Метод основан на гидролизе динатриевой соли фенилфосфорной кислоты ферментом фосфатазой, содержащимся в молоке и молочных продуктах. Выделившийся при гидролизе свободный фенол в присутствии окислителя даёт розовое окрашивание с 4-аминоантипирином.

В пробирку отмеривают анализируемый продукт и дистиллированную воду (если это необходимо). Количество анализируемого продукта и дистиллированной воды должно соответствовать объёму, указанному в таблице 5.

Далее в пробирку вносят 2 см³ рабочего раствора субстрата. Затем содержимое пробирки перемешивают и ставят в водяную баню с температурой 40-45 °С на 30 минут. После подогревания в водяной бане в пробирку добавляют 5 см³ осадителя системы цинк-медь, тщательно перемешивают содержимое пробирки и снова ставят в водяную баню с температурой 40-45 °С. Вынув пробирку из бани, сравнивают её содержимое с контролем.

Продолжение прил.

Таблица 5

Количество анализируемого продукта и дистиллированной воды

Контролем является аналогичная реакция с кипячёным молоком. Если в опыте с кипячёным молоком появляется слабо-розовое окрашивание, то соль подлежит дополнительной очистке.

При отсутствии фермента фосфатазы в анализируемых продуктах содержимое пробирок (раствор, отделившийся от осаждённого белка) бесцветное, т.е. такое же, как содержимое пробирок контрольного опыта. Следовательно, молоко и молочные продукты были пропастеризованы.

При наличии фосфатазы в анализируемых продуктах содержимое пробирок (раствор, отделившийся от осаждённого белка) окрашивается от розового до тёмно-красного цвета. Следовательно, молоко и молочные продукты не подвергались пастеризации, или подвергались пастеризации при температуре ниже 63 °С, или были смешаны с непастеризованными продуктами.

При оценке результатов реакции учитывается только цвет, но не прозрачность раствора. Чувствительность метода позволяет обнаружить добавление непастеризованных молочных продуктов к пастеризованным в количестве 0,3 %.  

Определение фосфатазы по реакции с фенолфталеинфосфатом натрия (ускоренный метод)

Метод основан на гидролизе фенолфталеинфосфата натрия ферментом  фосфатазой,  содержащимся в молоке и молоч-

Продолжение прил.

ных продуктах. Освобождающийся при гидролизе фенолфталеин в щелочной среде даёт розовое окрашивание.

В пробирку отмеривают анализируемый продукт, дистиллированную воду и реактив (фенолфталеинфосфат натрия). Количество анализируемого продукта, дистиллированной воды и реактива должно соответствовать объёму, указанному в таблице 6.

Таблица 6

Количество анализируемого продукта,

дистиллированной воды и реактива

После добавления дистиллированной воды и реактива в пробирку с анализируемым продуктом, содержимое закрывают пробкой и взбалтывают. Затем пробирку помещают в водяную баню с температурой 40-45 °С и определяют окраску содержимого через 10 минут выдержки и через 1 час.

При отсутствии фермента фосфатазы в анализируемых продуктах окраска содержимого пробирок не изменится. Следовательно, молоко или молочные продукты подвергались пастеризации.

При наличии фосфатазы в анализируемых продуктах содержимое пробирок приобретает окраску от светло-розовой до ярко-розовой. Следовательно, молоко или молочные продукты не подвергались пастеризации, или  подвергались пастеризации при температуре ниже 63 °С, или были смешаны с непастеризованными продуктами.

Чувствительность метода позволяет обнаружить добавление не менее 2 % непастеризованного продукта к пастеризованному.

Продолжение прил.

Определение витамина С