205. 1960-х годах полагали, что существует один антиген Gerbich, выявляемый сывороткой миссис Gerbich и двумя другими однотипно реагирующими сыворот-ками. Этот антиген был описан Rosenfield и соавт. [106] и позднее получил обо-значение Ge3. В 1961 г. Barnes и Lewis [6] нашли еще один антиген этой систе-мы – Ge2, выявляемый сывороткой миссис Yussef. И наконец, в середине 80-х го-

дов Anstee и соавт. [5], Daniels и соавт. [26], McShane и Chung [67] обнаружили антитела, идентифицирующие третий часто встречающийся антиген – Ge4.

Ge2, Ge3 и Ge4

Как установили Barnes и Lewis [6], эритроциты миссис Yussef, жительни-цы Кипра турецкого происхождения, агглютинировались сывороткой Gerbich, но не реагировали с сыворотками анти-Ge, полученными от других лиц Ge −. Сыворотка миссис Yussef содержала антитела, реагировавшие со всеми

784

образцами эритроцитов за исключением собственных эритроцитов и эритро-цитов трех ранее найденных Ge-отрицательных лиц. Адсорбция сыворотки Gerbich эритроцитами Yussef полностью устраняла ее активность. Таким об-разом, с помощью двух разнореагирующих сывороток (Gerbich и Yussef) были идентифицированы два антигена системы Gerbich.

Обследование жителей Папуа – Новой Гвинеи позволило получить новые дан-ные об этой системе. Booth и соавт. [10, 11] нашли Gerbich-ассоциированные ан-титела у меланезийца Ge +, которые не реагировали с эритроцитами лиц, имевших фенотип Gerbich и Yus, а также с эритроцитами 15 % меланезийцев Ge +. Стало оче-видным, что существует третья разновидность анти-Ge-антител, с помощью кото-рой можно идентифицировать три Ge-отрицательных фенотипа, каждый из кото-рых лишен одного из трех антигенов, составляющих систему Gerbich (табл. 20.3).

Таблица 20.3

Редкие фенотипы Gerbich

Однако эритроциты меланезийца Ge: −1, 2, 3 и его анти-Ge1-сыворотка вскоре стали недоступны. Соответственно, меланезийский вариант Gerbich-отрицательного фенотипа (Ge: −1, 2, 3) и анти-Ge1-антитела не вошли в класси-фикацию и больше не используются (Booth и соавт. [11, 61], Daniels [24]).

Anstee и соавт. [5] и Daniels и соавт. [26] обнаружили, что некоторые иссле-дованные ими моноклональные антитела обладали Gerbich-ассоциированной специфичностью. Эти антитела реагировали со всеми образцами эритро-цитов Ge + и Ge −, включая эритроциты Ge: −2, −3. В то же время были най-дены образцы эритроцитов Ge: −2, −3, которые не реагировали с Gerbich-ассоциированными МКА (Anstee и соавт. [4, 5]). Этот Gerbich-отрицательный фенотип получил название Leach. Антитела, имевшиеся у миссис Leach, дава-ли реакции, сходные с реакциями Gerbich-ассоциированных МКА. Антиген, открываемый ими, получил обозначение Ge4 (McShane, Chung [67]). Фенотип Leach обозначен в цифровой номенклатуре как Ge: −2, −3, −4. Все другие образ-цы эритроцитов содержат антиген Ge4 (см. табл. 20.3).

Посредством иммуноблоттинга с использованием нескольких образцов анти-Ge2-антител показано, что антиген Ge2 распологается на гликофорине D (рис. 20.6). Гликофорин С не содержит этот антиген (Dahr и соавт. [22], Reid и соавт. [94]). Эпитопы Ge2 расположены на N-терминальном пептиде гликофорина D (аминокис-лоты в позициях 1–27) (Dahr и соавт. [22]). Обработка эритроцитов трипсином или папаином разрушает антиген Ge2, в то время как химотрипсин и проназа на него не действуют (Daniels [25]). Примерно половина образцов анти-Ge2-антител реагирова-ла слабее с эритроцитами, обработанными сиалидазой (Daniels [25]).

785

Поскольку гликофорин D является укороченным аналогом гликофорина С анти-Ge2-антитела могут распознать аминокислотную последовательность, если она находится на N-терминальном участке гликофорина D, но не на гомологич-ном участке гликофорина С. Вместе с тем в образовании эпитопа Ge2 могут уча-ствовать свободные аминогруппы гликофорина D. Некоторые образцы анти-Ge2-антител не реагируют с эритроцитами, обработанными уксусным ангидридом. Это дает основание полагать, что аминогруппы также вовлечены в формирова-ние эпитопов, распознаваемых анти-Ge2-антителами. Анти-Ge2-антитела, по-видимому, являются гетерогенными и распознают эпитопы на разных участках гликофорина D, в том числе на N-терминальном участке (Daniels и соавт. [28]).

Подобно антигену Ge2, антиген Ge3 разрушается трипсином. К химотрипси-ну и проназе он устойчив. В отличие от Ge2 антиген Ge3 устойчив к действию папаина (Mohammed и соавт. [70]). Соответственно эритроциты, обработанные папаином, можно использовать для дифференциации антител анти-Ge2 от анти-Ge3 при отсутствии эритроцитов редкого фенотипа Ge: −2, 3, 4.

Методом иммуноблоттинга с МКА было показано, что эпитопы Ge3 локали-зуются на гликофоринах С и D (рис. 20.6) (Dahr и соавт. [22], Loirat и соавт. [56, 57], Reid и соавт. [94], Smythe и соавт. [115]). Аллоиммунные анти-Ge3-антитела удавалось элюировать с гликофоринов обоих типов (Reid и соавт. [94]).

Антиген Ge3 кодируется экзоном 3 GYPC. При делеции указанного участка ан-тиген Ge3 отсутствует. Делеция экзона 2 не приводит к исчезновению экспрессии Ge3. Экзоны 2 и 3 имеют большое сходство и различаются лишь вставкой из 27 нуклеотидов, кодирующих аминокислоты в позициях 42–50 на гликофорине С и 21–29 – на гликофорине D, поэтому эпитопы Ge3 присутствуют именно в указан-ных областях соответствующих гликофоринов (Dahr и соавт. [22]).

Антиген Ge4 располагается в N-терминальной части гликофорина С (см. рис. 20.6). На гликофорине D он отсутствует (Anstee и соавт. [4, 5], Dahr и соавт. [21], Daniels и соавт. [29]).

Детальный анализ специфических МКА показал, что некоторым из них для свя-зывания эпитопами Ge4 требовалась аминогруппа в позиции Met1 на гликофорине С. В то же время другие МКА распознавали эпитопы среди первых 20 аминокислот гликофорина С и Met1 в реакцию вовлечен не был (Anstee и соавт. [5], Dahr и соавт. [21]). Более значимым для связывания антител оказалось О-гликозилирование гли-кофорина С. Антиген Ge4 разрушается трипсином и папаином.

Фенотип Gerbich-нуль

Gerbich-отрицательные фенотипы у европеоидов крайне редки. При обследо-вании более 45 тыс. европейцев Gerbich-отрицательный фенотип выявлен лишь

50 одного (табл. 20.4). Существенно чаще люди, лишенные антигенов Gerbich, встречаются среди жителей Папуа – Новой Гвинеи.

Многие Gerbich-отрицательные лица выявлены в связи с присутствием в сы-

воротке их крови антител Gerbich (Anstee и соавт. [5], Barnes, Lewis [6], Daniels

786

Рис. 20.6. Локализация эпитопов Ge2–4 на гликофорине С

A D (по Daniels [24]).

181. соавт. [29, 3], McLouglin, Rogers [66], Muller и соавт. [74], Nunn и соавт. [78], Okubo и соавт. [81], Peddle и соавт. [87], Reid и соавт. [91, 98], Rosenfield и соавт. [106], Rountree и соавт. [107], Sacks и соавт. [108]).

Фенотип Yus (Ge: −2, 3, 4) встречается реже, чем Ge: −2, −3, но такое соотно-шение может отражать лишь неодинаковую способность лиц с указанным фено-типом к антителообразованию (Daniels [25], Reid и соавт. [91]).

Лица Ge: −2, 3, 4 были обнаружены среди арабов, турок-киприотов и евреев, а также у негров.

Исследования посредством SDS-PAGE и иммуноблоттинга с МКА показано, что эритроциты Ge: −2,3,4 не содержат гликофорины С и D. Однако они несут гликофорин-С-подобную структуру с мол. массой 32,5–36,5 кДа, промежуточ-ную между гликофоринами С и D (Anstee и соавт. [5], Dahr и соавт. [23], Reid

182. соавт. [94]). В эритроцитах гетерозигот GYPC / GYPC.Yus гликофорины С и D присутствуют (Reid и соавт. [102]).

Анализ геномной и кодирующей ДНК показал, что лица Ge: −2,3,4 гомози-готны по гену GYPC.Yus, в котором экзон 2 подвергся делеции (Chang и соавт. [13], High и соавт. [39], Johnson, Daniels [44]). Продуктом указанного гена яв-

ляется гликофорин-С-подобный протеин без аминокислот в позициях 17–35, экспрессия антигенов Ge3 и Ge4 при этом сохранена. Вторая стартовая точка трансляции (Met 22) отсутствует, поэтому не происходит синтеза гликофорина D, несущего антиген Ge2.

787