Telen и соавт. [47] показали, что большинство образцов анти-Yt a-антител не реагирует с фракцией комплементчувствительных эритроцитов больных парок-сизмальной ночной гемоглобинурией (ПНГ), однако взаимодействует с фракци-ей эритроцитов, не чувствительных к комплементу. Установлено, что упомянутые комплементчувствительные эритроциты в значительной степени лишены глико-зилфосфатидилинозитола (ГФИ). У двух больных ПНГ комплементчувствитель-ные эритроциты были Yt(b + ). Эти результаты интерпретированы авторами как указание на то, что эпитопы Yt a и Yt b несет ГФИ-ассоциированный гликопротеин.

W. 1991 г. Spring и соавт. [45] показали, что антигены Cartwright на эритро-цитах несет ГФИ-ассоциированный гликопротеин АХЭ (см. рис. 13.1). Путем иммунопреципитации антителами анти-Yt a и анти-Yt b выделен субстрат с мол. массой 72 кДа. По электрофоретической подвижности он был идентичен веще-ству, выделенному с помощью моноклональных антител к АХЭ эритроцитов. Субстрат обладал ацетилхолинэстеразной активностью, о чем свидетельство-вали результаты экспериментов Petty [36] с иммобилизацией моно- и поликло-нальных антител анти-Yt a и анти-Yt b.

АХЭ эритроцитов подвергается N-гликозилированию. Как установили Spring

236. соавт. [45], обработка субстрата, выделенного посредством иммунопреципи-тации, N-гликаназой приводила к уменьшению его мол. массы с 72 до 63 кДа. С помощью МКА к АХЭ установлено, что один эритроцит несет 3–5 тыс. АХЭ-участков. При использовании для аналогичных исследований Fab-фрагментов указанных антител выявлено 7–10 тыс. участков связывания. Это дало основа-ния Spring и соавт. [45] полагать, что АХЭ присутствует в мембране эритроци-тов в форме димера.

Как указывалось выше, АХЭ играет важную роль в передаче нервных им-пульсов в исполнительные органы и ткани. Ацетилхолин обеспечивает переда-чу электроимпульсных сигналов от терминальных участков нервов в мышечные клетки. Затем ацетилхолин быстро разрушается АХЭ путем гидролиза для пре-кращения последующей передачи нейроимпульсов.

АХЭ присутствует в различных тканях в разных изоформах, обусловлен-ных альтернативным сплайсингом гена ACHE (Taylor [46], Li и соавт. [29]). Фрагменты кДНК гена ACHE обнаружены в библиотеке генов из клеток фе-тальной мышечной ткани и нервной ткани взрослых лиц (Soreg и соавт. [44]). Полная кодирующая последовательность гена установлена Li и соавт. [29] при анализе космидной библиотеки генома человека.

690

Три экзона кодируют сигнальный пептид и N-терминальный участок, состоя-щий из 535 аминокислот (рис. 13.3). За счет альтернативного сплайсинга следу-ющего экзона возникают структурные изменения в С-терминальном домене, по-зволяющие ГФИ присоединяться к эритроидным клеткам (Li и соавт. [29]).

Рис. 13.3. Аминокислотная последовательность протеина АХЭ.

Частота распределения

Из 1568 доноров, обследованных Eaton и соавт. [12], Giles и соавт. [17] в Оксфорде, только 5 имели фенотип Yt(a −), остальные – Yt(a + ). Таким об-разом, частота антигена Yt a составила 99,8 %, гена Yt  a – 0,9559 (табл. 13.2). Установлено, что 8 % лиц белой расы имели фенотип Yt(b  + ). По результатам изучения частоты антигенов Yt a и Yt b рассчитана частота генотипов: Yt  a  / Yt  a (0,8966), Yt  a  / Yt  b (0,1006) и Yt  b  / Yt  b (0,0028). Расчеты показали, что существова-ние третьего аллеля в системе Cartwright вряд ли возможно (Lewis и соавт. [28]).

Примечание: « – » – нет данных.

691

Обследование лиц различной национальности показало, что среди ев-реев, арабов и друзов Израиля антиген Yt b встречается относительно ча-сто (табл. 13.2). В то же время этот фактор не был выявлен у японцев, жите-лей Таиланда, а также у инков и других коренных жителей Южной Америки (Nakajima и соавт. [34], Mourant и соавт. [33]).

Giles и соавт. [17] установили среди 1399 обследованных 113 (8,1 %) лиц Yt(b + ). Salmon и соавт. [42] выявили 608 человек Yt(b + ) среди 7510 французов (8,1 %). Lewis

268. соавт. [28] обследовали 659 канадцев, из них 589 были Yt(a +b −), 70 Yt(a +b + ), не было ни одного Yt(a −b + ). Wurzel и Haesler [50] протестировали эритроциты 714 аме-риканских негров и обнаружили, что 60 из них (8,4 %) были Yt(b + ). Эти данные по-казывают, что частота Yt a и Yt b одинакова у негроидов и европеоидов.

Обращают на себя внимание две популяции, в которых частота антигенов Yt a и Yt b отличается от таковой в других сравниваемых группах. Так, Nakajima и соавт. [34] протестировали 5 тыс. японских доноров, из них 70 были протестированы анти-Yt b-сывороткой. Все японцы были Yt(a + ), ни одного индивида Yt(b + ) не об-наружено. Возможно, для японцев характерен исключительно фенотип Yt(a +b −).

Отмечена более высокая, чем ожидалась, частота анти-Yt a-антител у израиль-тян. Когда появились тестовые анти-Yt b-реактивы, было установлено, что часто-та этого антигена у жителей Израиля существенно выше, чем в других геогра-фических зонах. Повышенная частота антигена Yt b в этом регионе привела к не-которому увеличению частоты фенотипа Yt(a −b + ), что могло повлиять на часто-ту аллоиммунизации лиц Yt(a −b + ). Из 1683 целенаправленно протестированных израильских евреев, арабов и друзов 26 имели фенотип Yt(a −b + ). Иными слова-ми, среди этих народов лиц Yt(a −b + ) обнаруживают с частотой 1 на 65. Частота встречаемости этого фенотипа среди англичан, французов и негров составляет примерно 1 на 500, то есть почти в 10 раз меньше.

Результаты двух посемейных исследований свидетельствовали о кодоминантном наследовании генов Yt  a и Yt  b в соответствии с законом Менделя. Данных о суще-ствовании молчащего аллеля не получено (Giles и соавт. [17], Lewis и соавт. [28]).

V. антигенными различиями Yt a / Yt b ассоциированы две нуклеотидные заме-ны внутри гена АСНЕ. Одна из них, С 1057 А в экзоне 2, кодирует замену гисти-дина на аспарагин в положении 353. Другая мутация, С 1432 Т в экзоне 3, фе-нотипически не проявляется. Третья замена нуклеотидов, в экзоне 5, также не проявляла себя в зрелом протеине (Bartels и соавт. [3]).

Исследование АХЭ электрического ската Torpedo californica, наиболее изучен-ной формы этого фермента, показало, что лишь аминокислотная замена в пози-ции 353 приводит к формированию иммуногенного участка, способного стимули-ровать синтез специфических антител. Различия в антигенной структуре АХЭ не влияют на ее активность (Masson и соавт. [30]).

Антиген Yt a устойчив к действию трипсина, α-химотрипсин его разруша-ет. Обработка эритроцитов фицином и папаином дала разноречивые результа-ты, которые зависели от того, какими образцами анти-Yt a-антител проводили

692

тестирование энзимированных эритроцитов (Eaton и соавт. [12], Vengelen-Tyler, Morel [48], Morton [32], Rouger и соавт. [41], Daniels [7]). В некоторых случаях об-работка указанными протеолитическими ферментами усиливала реакцию. К дей-ствию сиалидазы антиген Yt a не чувствителен (Rouger и соавт. [41], Daniels [7]).

Антигены Yt a и Yt b разрушаются под воздействием дитиотрейтола, 2-ами-ноэтилизотиоурониумбромида (АЕТ), 2-меркаптоэтанола (Branch и соавт. [6], Levene, Harel [26], Shulman и соавт. [43]). Денатурация зависела от концентра-ции дитиотрейтола при обработке эритроцитов. Когда применяли 200 мМ пре-парата, как Yt a, так и Yt b денатурировались. При использовании 50 и 100 мМ растворов дитиотрейтола активность антигена Yt a снижалась пропорционально повышению концентрации раствора ДТТ, но не подавлялась полностью.

Shulman и соавт. [43] показали, что антиген Yt b денатурируется, когда эри-троцты обрабатывают 500 мМ раствором 2-меркаптоэтанола.

Уместно упомянуть, что применение АЕТ для создания искусственных эри-троцитов Kell_null подверглось критике, поскольку этот препарат разрушает и другие, не относящиеся к системе Kell, антигены. Однако, когда Levene и Harel

14 обработали АЕТ эритроциты Yt(a + ), денатурация антигена Yt a не была та-кой полной, как денатурация антигенов системы Kell. Девять из 15 сывороток анти-Yt a не реагировали с эритроцитами, обработанными АЕТ, другие 6 все же реагировали, хотя не так сильно, как с необработанными эритроцитами.

Антигены Yt a и Yt b определяются на эритроцитах новорожденных: Yt b выра-жен слабо, в то время как экспрессия Yt a не отличается от таковой у взрослых. Giles и соавт. [17] установили, что экспрессия антигена Yt b у новорожденных не изменена. Слабую экспрессию антигена Yt a наблюдали у недоношенных (Eaton и соавт. [12], Ferguson и соавт. [14]); 8 из 10 образцов эритроцитов не реагирова-ли с анти-Yt b-сывороткой, остальные 2 реагировали слабо (Gobel и соавт. [18]).

АХЭ присутствует в нервной и мышечной тканях и на эритроцитах (Taylor [46]). Данных о распределении этого фермента в других тканях мало. Антиген Yt a не был выявлен на лимфоцитах, гранулоцитах и моноцитах при исследова-нии методом проточной цитофлюориметрии (Dunstan [11]).