Наследование и полиморфизм антигенов Diegо
Поможем в ✍️ написании учебной работы
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

 

Посемейными исследованиями установлено, что ген Di  a передается по на-следству как доминантный признак (Cann и соавт. [23], Graninger [51], Lewis и соавт. [104], Race, Sanger [137], Levine, Robinson [98], Layrisse и соавт. [96]).

Протеин полосы 3, полученный из эритроцитов, подвергнутых обработке


 

660


проназой или химотрипсином, при электрофорезе в полиакриламидном геле (SDS-PAGE) оказался неоднородным (Mueller, Morrison [123]). В большинстве образцов присутствовали фракции с мол. массой 60 кДа, представляющие N-терминальный регион, и небольшое количество компонентов с мол. массой 63 кДа.

 

Один из вариантов протеина полосы 3, названный Мемфис, обуслов-лен точковой мутацией в паре нуклеотидов внутри экзона 4, которая приво-дит к замещению лизина на глютаминовую кислоту в цитоплазматическом N-терминальном домене белка полосы 3 (Yannoukakos и соавт. [176], Jarolim и соавт. [76]). У некоторых индивидов, гомозиготных по указанному мутантно-му гену, присутствовал только протеин с мол. массой 63 кДа (Ranney и соавт. [138], Ideguchi и соавт. [62]). Вариант Мемфис протеина полосы 3 был обна-ружен у 6–7 % произвольно взятых доноров. Его частота оказалась выше сре-ди американских негров (16 %), индейцев (17–25 %), китайцев (13 %), жителей Филиппин (17 %) и японцев (29 %) (Yannoukakos и соавт. [176], Jarolim и со-авт. [76]). Ингибиторы эритроцитарного транспортера анионов диизотиоцианат-стилбен (DIDS) и его дигидрат (H160mIDS) ковалентно связывались с лизином в позиции 539 белка полосы 3 (Tanner и соавт. [160]). У некоторых индивидов с Мемфис-вариантом белка полосы 3 отмечено повышенное связывание H160mIDS (Hsu, Morrison [60]). Такой тип белка полосы 3 был обозначен как Мемфис-вариант II для дифференцировки с Мемфис-вариантом I, которому свойствен нормальный уровень связывания H160mIDS.

 

Spring et al [157] указали на ассоциацию между фенотипами системы Diegо

 

и вариантами протеина полосы 3 при исследовании в SDS-PAGE. Они устано-вили, что наличие Мемфис-варианта II всегда было ассоциировано с наличием на эритроцитах антигена Di a. Белок полосы 3 таких эритроцитов связывал в 3 раза больше H160mIDS с радиоактивной меткой, а клетки Di(a −) проявляли нор-мальный уровень связывания H160mIDS. Таким образом, эпитопы Di a ассоцииро-ваны с протеином полосы 3 Мемфис-варианта II, а другие варианты этого белка (Мемфис-вариант I и обычный) – с антигенными эпитопами Di b.

 

Bruce и соавт. [16], проведя амплификацию кодирующего региона белка по-лосы 3 для выделения кДНК, сумели доказать, что экспрессия антигена Di a и Мемфис-варианта II ассоциированы с заменой С 2561 Т в экзоне 19: ген Di  a коди-рует лейцин в позиции 854, а в присутствии Di  b это положение занимает пролин. Кроме того, внутри гена Di  a отсутствуют сайты рестрикции MspI и NaeI. В соот-ветствии с моделью, в которой трансмембранная часть протеина полосы 3 пред-ставлена 14 доменами, аминокислотные замены имеются в 7 экстрацеллюлярных петлях белка (рис. 12.2). Повышенное связывание H160mIDS происходит в связи

 

и локальными пространственными изменениями, влияющими на перекрестные связи между лизином в положении 851 на седьмой петле и той же аминокислотой в положении 539 в трансмембранном домене (Salhany и соавт. [150]).

При исследовании генотипа с помощью ПЦР у 72 бразильских индейцев племени Паракана из Амазонии выявлено 26 индивидов Di  a  / Di  a, 26 – Di  a  / Di  b


 

661


 

Рис. 12.2. Локализация антигенных эпитопов Diegо на эритроците и топология протеина полосы 3.

BBBB 19 – Di  b  / Di  b. Таким образом, в этой этнической группе гены Di  a и Di  b име-ли частоту 0,56 и 0,44 соответственно (Castilho и соавт. [24]). Анализ вариан-тов Мемфис белка полосы 3 с рестрикцией MspI подтвердил корреляцию алле-лей Di  a и Di  b с кодонами Glu 56 и Lys 56 соответственно. Исключение состави-ли индивиды Di  a  / Di  a, гетерозиготные по Glu 56 и Lys 56 кодонам.

 

Jarolim и соавт. [74] описали 2 европеоидов Di(a +b −), гетерозиготность кото-рых (Di  a  / Di  b) подтверждалась молекулярно-генетическими тестами. У одного из них выявлена мутация, изменявшая рамку считывания, у другого – нонсенс-кодон внутри Di  b.

 

Антигены Di a и Di b устойчивы к действию папаина, трипсина, α-химотрипсина, проназы, сиалидазы и сульфгидрильным редуцентам (Daniels [36]).

Иногда антиген Di b может быть слабо выражен. Описана мексиканская женщина, фенотип которой при первичном исследовании был определен как Di(a −b −). Однако последующие исследования выявили у нее слабый антиген Di b (Biro и соавт. [14]). Низкий уровень экспрессии антигена Di b у нескольких мексиканцев с фенотипом Di(a + ) описали Edwards-Moulds, Alperin [42]). При обследовании 784 жителей Америки испанского происхождения Issitt и соавт. [70] установили, что все они имеют антиген Di b, в 11 случаях последний был слабо выражен. Исследование этих образцов с сыворотками анти-Di a лишь в одном случае выявило этот антиген. Таким образом, феномен слабой экспрес-сии антигена Di b не был связан с эффектом дозы. Сниженная экспрессия анти-гена Di b имелась у лиц с овалоцитозом, встречающимся в Юго-Восточной Азии

 

(Kusnierz-Alejska, Bochenek [89]).


 

662








Протеин полосы 3

 

Белок полосы 3, отвечающий за транспорт анионов (АЕ1, или CD233), вхо-дит в структуру гликопротеинов эритроцитарной мембраны. Каждый эритро-цит содержит примерно 1,2 млн молекул этого белка, который легко выявля-ют электрофорезом в полиакриламидном геле после обработки субстрата до-децилсульфатом натрия (SDS-PAGE). Он мигрирует в область структур, име-ющих мол. массу 100 кДа (Bruce, Tanner [18], Tanner [158, 159]).

 

Ген SLC4A1, контролирующий синтез белка полосы 3, имеет величину 18 кб и включает 20 экзонов (Schofield и соавт. [151]). Клонирование и сек-венирование геномной ДНК белка полосы 3 подтвердило, что эта структу-ра состоит из 3 доменов. Цитоплазматический N-терминальный домен со-стоит из 403 аминокислот, гидрофобный трансмембранный домен представ-лен 479 аминокислотами, С-терминальный – 29 (см. рис. 12.2, 12.3) (Tanner

 

с соавт. [160], Lux и соавт. [112]). Терминальный N-домен взаимодействует с анкирином цитоскелетона. Трансмембранная часть белка полосы 3 в эритро-ците включает 14 доменов, экстрацеллюлярная часть представлена 7 петлями (см. рис. 12.2). Участок, связанный с олигосахаридами в области Asn 642 на четвертой экстрацеллюлярной петле, обладает серологической активностью в отношении антител анти-H, анти-A, анти-B, анти-I и анти-i. Количественные вариации протеина полосы 3 подсчитаны по числу повторяющихся N-ацетил-лактозаминовых группировок. Белок полосы 3 в мембране эритроцитов пред-ставлен олигомерами (ди-, три-, тетра- и т. д.) (Popov и соавт. [136], Fujinaga

 

с соавт. [46]). Тетрамеры преимущественно связаны с анкирином (Van Dort и

 

соавт. [167], Zafar, Reid [180]).

 

MEELQDDYED MMEENLEQEE YEDPDIPESQ MEEPAAHDTE ATATDYHTTS

50

HPGTHKVYVE LQELVMDEKN QELRWMEAAR WVQLEENLGE NGAWGRPHLS

100

HLTFWSLLEL RRVFTKGTVL LDLQETSLAG VANQLLDRFI FEDQIRPQDR

150

EELLRALLLK HSHAGELEAL GGVKPAVLTR SGDPSQPLLP QHSSLETQLF

200

CEQGDGGTEG HSPSGILEKI PPDSEATLVL VGRADFLEQP VLGFVRLQEA

250

AELEAVELPV PIRFLFVLLG PEAPHIDYTQ LGRAAATLMS ERVFRIDAYM

300

AQSRGELLHS LEGFLDCSLV LPPTDAPSEQ ALLSLVPVQR ELLRRRYQSS

350

PAKPDSSFYK GLDLNGGPDD PLQQYGQLFG GLVRDIRRRY PYYLSDITDA

400

FSPQVLAAVI FIYFAALSPA ITFGGLLGEK TRNQMGVSEL LISTAVQGIL

450

FALLGAQPLL VVGFSGPLLV FEEAFFSFCE TNGLEYIVGR VWIGFWLILL

500

VVLVVAFEGS FLVRFISRYT QEIFSFLISL IFIYETFSKL IKIFQDHPLQ

550

KTYNYNVLMV PKPQGPLPNT ALLSLVLMAG TFFFAMMLRK FKNSSYFPGK

600

LRRVIGDFGV PISILIMVLV DFFIQDTYTQ KLSVPDGFKV SNSSARGWVI

650
HPLGLRSEFP IWMMFASALP ALLVFILIFL ESQITTLIVS KPERKMVKGS 700
GFHLDLLLVV MGGVAALFG MPWLSATTVR SVTHANALTV MGKASTPGAA 750

AQIQEVKEQR ISGLLVAVLV GLSILMEPIL SRIPLAVLFG IFLYMGVTSL

800

SGIQLFDRIL LLFKPPKYHP DVPYVKRVKT WRMHLFTGIQ IICLAVLWVV

850

KSTPASLALP FVLILTVPLR RVLLPLIFRN VELQCLDADD AKATFDEEEG

900
RDEYDEVAMP V       911

 

Рис. 12.3. Аминокислотная последовательность протеина полосы 3 эритроцитов человека.


 

 

663




Дата: 2019-02-24, просмотров: 206.