Протеин полосы 3 тесно связан в мембране эритроцитов с гликофорином А. Антитела к протеину полосы 3 преципитировали как этот белок, так и гликофо-рин А (Wainwright и соавт. [169], Tanner [160]). Антитела против гликофорина

9. существенно снижали подвижность протеина полосы 3 (Nigg и соавт. [125], Che, Sherry [26], Paulitschke и соавт. [130]).

По мнению Groves, Tanner [53] гликофорин А способствует переносу вновь об-разовавшихся молекул белка полосы 3 в мембрану эритроцитов. Однако гликофо-рин А не является строго обязательной структурой, необходимой для экспрессии белка полосы 3, хотя при его дефиците протеин полосы 3 медленнее движется к мембране и его прикрепление к ней остается незавершенным. В эритроцитах, де-фицитных по гликофорину А, протеин полосы 3 имеет более высокую мол. массу и, несмотря на его нормальное количественное содержание, транспорт анионов через мембрану таких эритроцитов затруднен. Эритроциты мышей, у которых на-правленно был инактивирован ген белка полосы 3 (нокаутные мыши), имели низ-кое содержание как протеина полосы 3, так и гликофорина А, что дало основание полагать, что белок полосы 3 важен для формирования гликофорина А на мем-бране эритроцитов (Hassoun и соавт. [57]). Однако эти экспериментальные дан-ные вряд ли можно экстраполировать на человека, поскольку у человека в про-цессе гемопоэза гликофорин появляется на мембране эритроцитов раньше белка полосы 3 (Southscott и соавт. [156], Daniels, Green [38]). В то же время эритролей-

кемическая линия клеток человека K562 экспрессирует гликофорин А, а протеин полосы 3 не экспрессирует (Gahmberg, Andersson [48], Beckman и соавт. [11]).

Ribeiro и соавт. [142] описали ребенка с полным отсутствием белка полосы 3, однако его эритроциты при этом содержали, хотя и в небольшом количестве, гликофорин А.

Эритроциты трансгенных мышей экспрессировали гликофорин А человека, но в то же время содержание в них мышиного гликофорина А было снижено. Это указывает на возможную конкуренцию двух разных в видовом отношении гли-кофоринов, участвующих в формировании белка полосы 3 (Auffray и соавт. [10]).

Антиген Wr b не экспрессируется в отсутствие гликофорина А. Эритроциты с дефицитом гликофорина А имеют фенотип En(a −) по системе MN и Wr(a −b −) по системе Diegо (Issitt и соавт. [68, 69]). Образцы эритроцитов Wr(a −b −), которые содержали некоторое количество гибридных гликофоринов, реагировали с анти-телами анти-En a. Эритроциты индивидов Wr(a +b −) имели нормальную экспрес-сию антигенов M, N, S, s и En a (Dahr и соавт. [35]). Секвенирование гена GYPA у лиц Wr(a +b −) не выявило каких-либо особенностей (Bruce и соавт. [17]).

Большинство моноклональных антител к гликофорину А преципитировало указанный гликофорин, но не преципитировало белк полосы 3. Преципитация гликофорина А происходила с анти-Wr b-антителами (Ridgwell и соавт. [144, 145]), которые одновременно преципитировали и протеин полосы 3 (Telen,

664

Chasis [163], Ring и соавт. [147]), обнаруживая тем самым структурное сход-ство обоих антигенных субстратов. Шесть образцов сывороток с аутоантитела-ми также вызывали преципитацию протеина полосы 3 и гликофорина А (Leddy

37. соавт. [97]). Антитела анти-Wr b содержались лишь в 3 из 6 упомянутых сыво-роток с аутоантителами, и это свидетельствует о том, что могут существовать другие антигенные эпитопы, общие для протеина полосы 3 и гликофорина А.

Гемагглютинирующую активность аллоиммунных антител анти-Wr b оказалось возможным ингибировать очищенными фрагментами гликофорина А, но ингибиру-ющая активность была низкой и ее можно было выявить лишь в присутствии липи-дов (Dahr и соавт. [35]). Активность одного образца моноклональных антител анти-Wr b угнеталась синтетическим пептидом, имеющим аминокислотную последова-тельность, свойственную гликофорину А в положениях 56–70. Этот синтетический пептид не снижал активность аллоиммунных, аутоиммунных, а также двух образ-цов моноклональных антител анти-Wr b (Rearden [139]). Моноклональные антите-ла не связывались с клеточными линиями человека, не экспрессирующими глико-форин А и белок полосы 3 (Telen, Chasis [163]). Клеточная линия K562 экспресси-рует гликофорин А без протеина полосы 3 и антигена Wr b, однако трансфекция кле-ток кДНК белка полосы 3 индуцировала экспрессию антигена Wr b (Beckman и со-авт. [11]). В экспериментах с искусственным эритропоэзом in vitro белок полосы 3

38. антиген Wr b появлялись на клетках в одно время, после гликофорина А (Daniels, Green [38]). Связывание антител с экстрацеллюлярным доменом гликофорина А вызывало одновременно иммобилизацию протеина 3, этот эффект был заметно снижен при использовании эритроцитов Wr(a +b −) (Paulitschke и соавт. [130]).

Bruce и соавт. [17], Huang и соавт. [61], Poole [132] сравнили аминокислотную последовательность гликофорина А, гибридного гликофорина GP(B-A)Sch., ассо-циированного с антигеном Wr b, а также гибридов GP(A-B)Hil и GP(B-A)Dantu, ас-социированных с фенотипом Wr(a −b −). Результаты позволили заключить, что ами-нокислоты в позициях 55–68 α-спирального региона, близкого к месту встраивания гликофорина А в мембрану эритроцитов, могут играть важную роль в экспрессии антигена Wr b. Аминокислотные замены Gln 63 Lys и Ala 65 Pro ассоциированы с необычно высокой экспрессией антигена Wr b. На эритроцитах с гибридными гли-кофоринами, экспрессирующими антиген SAT, фактор Wr b отсутствовал, несмотря на наличие аминокислот, происходящих из участков 1–70 или 1–71 гликофорина А. Вероятно, что взаимодействие протеина полосы 3 и гликофорина А происходит че-рез трансмембранный домен гликофорина А и восьмой трансмембранный домен белка полосы 3, а также через экстрацеллюлярные участки, находящиеся рядом с этими трансмембранными доменами.

Таким образом, связь гликофорина А и протеина полосы 3 очевидна. Эритроциты En(a −) M kM k не содержат гликофорина А и являются Wr(a −b −). Антиген Wr b отсутствует на эритроцитах, несущих гибридные гликофорины

GP.Hil, GP.TSEN, GP.SAT, GP.TK или GP.Dantu. Во всех случаях в позиции 658

протеина полосы 3 присутствует глютаминовая кислота, однако для экспрессии

665

антигена Wr b еще необходимы соответствующие аминокислоты в составе указан-ных гликофоринов. Экспрессия Wr b ослаблена на эритроцитах с гибридными гли-кофоринами GP.HAG и GP.MARS, которые несут фрагменты гликофорина А с за-менами аминокислот Gln 63 Lys и Ala 65 Pro соответственно (см. Система MNS).

Остается невыясненным, требуется ли присутствие самого гликофорина А для экспрессии антигена Wr a. Попытки исследовать компоненты эритроцитар-ной мембраны иммунопреципитацией моноклональными антителами анти-Wr a успеха не принесли (Ring и соавт. [147]).