86

Обращал на себя внимание тот факт, что титр МКА анти-АВ (серии 1–7), полученных иммунизацией животных эритроцитами A(II), был на 1–3 ступени выше с эритроцитами A(II), чем с эритроцитами B(III). Титр МКА анти-АВ (се-рия 8), полученных иммунизацией животных эритроцитами B(III), был на 2 сту-пени выше с эритроцитами B(III), чем с эритроцитами A(II).

При адсорбции МКА анти-АВ серий 1–7 эритроцитами A(II) активность ан-тител полностью (до нуля) снижалась как в отношении эритроцитов A(II), так и эритроцитов B(III). Образец МКА анти-АВ серии 8 после адсорбции эритроцита-ми A(II) сохранил способность агглютинировать эритроциты B(III) в разведении 1 : 4, полностью утратив активность в отношении эритроцитов A(II).

При адсорбции МКА анти-АВ серий 1–7 эритроцитами B(III) активность ан-тител убывала в отношении эритроцитов B(III), однако в отношении эритроци-тов A(II) сохранялась в разведении 1 : 2–1 : 4. Образец МКА анти-АВ серии 8 после адсорбции эритроцитами B(III) утратил активность как в отношении эри-троцитов B(III), так и A(II). Титр МКА анти-АВ после адсорбции эритроцитами О(I) не изменился и соответствовал исходному.

Элюаты, снятые с эритроцитов A(II), реагировали с одинаковой авидностью

с эритроцитами A(II) и B(III). Элюаты, полученные с эритроцитов B(III), силь-нее реагировали с эритроцитами A(II), слабее – с эритроцитами B(III). И в пер-вом, и во втором случаях агглютинация была хорошо выражена.

Полученные данные позволили заключить, что МКА анти-АВ серий 1–7 со-держали комбинированные антитела со специфичностью анти-АВ и анти-А, МКА анти-АВ серии 8 – анти-АВ и анти-В.

После инкубации с унитиолом испытуемые антитела не утрачивали актив-ности, что указывало на их принадлежность к классу IgG. Об этом также свиде-тельствовали эксперименты с флюоресцирующими антимышиными анти-IgG-сыворотками, которые специфически реагировали с эритроцитами, нагружен-ными субагглютинирующей дозой МКА анти-АВ.

При температуре 6–8  оС МКА анти-АВ проявляли более высокую активность (титр от 1 : 8 до 1 : 128). При температуре 40–45  оС, так же, как и при температуре 20–25  оС, активность антител была ниже (титр от 1 : 4 до 1 : 64). В отличие от клас-сических термостабильных иммунных антител IgG (например, анти-D, аллоиммун-ных α, β и др.) полученные МКА анти-АВ оказались термолабильными. После про-гревания при температуре 70  оС они полностью утрачивали активность. Уместно упомянуть, что естественные перекрестно реагирующие антитела, содержащиеся в сыворотках О_αβ(I), также относятся к категории термолабильных.

Вопреки ожиданиям все полученные серии МКА-АВ легко нейтрализо-вались группоспецифическими субстанциями – фруглюмином А и В, хотя, как известно, группоспецифические субстанции нейтрализуют только есте-ственные IgM изогемагглютинины α и β, но не разрушают иммунные IgG α- и β-антитела. Это свойство естественных и иммунных антител используют для их идентификации. То обстоятельство, что МКА анти-АВ, будучи иммунными

87

IgG, нейтрализовались группоспецифическими субстанциями, существенно от-личает их от классических иммунных антител и позволяет выделить их в осо-бую группу – иммунные IgG-антитела термолабильные легко нейтрализуемые.

К этой же группе могут быть отнесены перекрестно реагирующие антитела лиц О(I), имеющие идентичную иммуносерологическую характеристику – IgG тер-молабильные. Их происхождение (иммунное или естественное) остается неяс-ным. Не исключено, что они так же, как МКА анти-АВ, являются иммунными.

Обработка эритроцитов B(III) протеолитическими ферментами, специфиче-ски разрушающими антиген В, лишала эритроциты групповых свойств. После такой обработки эритроциты B(III) в отличие от обработанных глутаровым аль-дегидом приобретали свойства эритроцитов О(I) группы и не агглютинирова-лись сыворотками анти-В. Одновременно исчезала их способность взаимодей-ствовать с перекрестно реагирующими антителами МКА анти-АВ, а также пе-рекрестно реагирующими антителами лиц О(I).

По характеру реагирования полученные МКА анти-АВ вряд ли можно от-нести к анти-А и анти-В. По-видимому, это одно, маскирующееся под анти-А и анти-В антитело, реагирующее с общей для эритроцитов А(II) и В(III) антиген-ной детерминантой. По своим свойствам эти антитела близки к перекрестно ре-агирующим антителам сывороток лиц О(I), описанным выше. Сам факт получе-ния антител анти-АВ в ответ на иммунизацию эритроцитами как A, так и B слу-жит веским аргументом в пользу того, что оба антигена наряду с существенны-ми серологическими различиями имеют идентичный эпитоп С, в равной мере являющийся сильным иммуногеном.

Таким образом, имеются все основания полагать, что групповая система АВО представлена не двумя агглютиногенами – А, В и двумя агглютининами – α, β, а тремя агглютиногенами – А, В, С и тремя агглютининами – α, β и С.

Антиген С выявляют с помощью перекрестно реагирующих сывороток лиц О_αβ(I) [184, 229]. Именно фракция перекрестно реагирующих агглютининов представляет собой антитела анти-С. Последние можно удалить из сыворотки указанных лиц адсорбцией как А, так и В эритроцитами. При рутинном иссле-довании антиген С маскируется присутствием антигена А и / или В. Антитела анти-С в обычных методах исследования проявляют себя подобно несепари-руемой комбинации α- и β-агглютининов. У лиц, имеющих группу крови А и В, агглютинины анти-С отсутствуют.

Не исключено, что антитела анти-С могут встречаться в чистом виде. Однако отличить их от анти-А и анти-В обычными методами не представляется воз-можным. У плодов O(I) от матерей O(I) находят антитела со свойствами анти-С, у плодов А(II) и В(III) от матерей А(II) и В(III) таких антител не находят.

Owen (цит. по Wiener [229]) получил чистую фракцию анти-С-агглютининов адсорбцией сывороток О_αβ(I) эритроцитами опоссума и кролика, которые, со-держат парциальный антиген В и, по-видимому, не содержат антигена С. После такой обработки оставшиеся в сыворотке антитела анти-С реагировали

88

с эритроцитами А и В, и их можно было удалить эритроцитами А или В в ад-сорбционной пробе. Однако для окончательного доказательства того, что С-, α-и β-агглютинины являются самостоятельными независимыми друг от друга ан-тителами, не достает эксперимента, в котором антигены А и В были бы разру-шены ферментативно (не реагировали бы с сыворотками анти-А и анти-В), но при этом сохранили бы антиген С (продолжали бы агглютинироваться анти-С-сывороткой или элюатом αβ). Только в том случае, если эритроциты не агглю-тинируются α и β, но продолжают агглютинироваться анти-С-антителами, мож-но не только с достаточной степенью уверенности констатировать существова-ние антигена С, но и с помощью такого реактива изучить закономерности на-следования этого антигена, возможные его разновидности и комбинации. В на-ших экспериментах ферментативное разрушение В-антигена приводило одно-временно к утрате их способности реагировать с МКА анти-АВ. Иными слова-ми разрушение В-антигена влекло за собой разрушение антигена С. Однако, не-смотря на отрицательный результат этого эксперимента, полученные нами дан-ные в целом со всей очевидностью свидетельствуют о наличии третьего антиге-на в системе АВО, существование которого блестяще предсказал Wiener.

Подгруппы крови

А ₂ и А ₂ В

Эритроциты A(II) с пониженными агглютинационными свойствами впервые описали Dungern и Hirszfeld в 1911 г. [94].

Landsteiner и Levine [133] подразделили фенотип А на подгруппы А₁ и А₂.

Около 88 % лиц группы А относятся к подгруппе А₁, 12 % – к подгруппе А₂. Среди лиц AB(IV) 80 % А₁В, 20 % А₂В. Ранее полагали, что лица А₁ имеют ан-тигены А и А₁, а лица А₂ – только антиген А. Клетки А₁ и А₂ несут различное количество антигенного вещества, имеющего в то же время и некоторые каче-ственные отличия. Так, сыворотки анти-А лиц, имеющих группу крови B(III), содержат 2 фракции анти-А-антител: одна фракция (анти-А) реагирует с эри-троцитами А₁ и А₂, другая (анти-А₁) – только c эритроцитами А₁ (Wiener и со-авт. [225, 227]). Адсорбция сывороток анти-А эритроцитами А₂ позволяет по-лучить реактив, который не реагирует с эритроцитами А₂, но сохраняет высо-кую активность по отношению к эритроцитам А₁ и может быть использован для дифференцировки образцов эритроцитов А на А₁ и А₂ (Р.М. Уринсон [61]).

Для определения подгрупп А используют экстраагглютинины α₁ и α₂, специ-ально отобранные моноклональные антитела анти-А, а также лектины Dolichos biflorus и Ulex europaeus. Первый из них реагирует с эритроцитами А₁, второй – с эритроцитами А₂.

У лиц А₁ с частотой примерно 1 на 10 000 встречаются экстраагглютинины α₂. Лица А₂ и А₂В содержат экстраагглютинины α₁ с частотой 1 на 50 и 1 на 5 со-ответственно.

Гены А 1 и А 2 передаются по наследству. Лица А 1 А 2 имеют фенотип А₁.

89

Присутствие аллеля А 2 можно обнаружить при семейном исследовании. Если один из родителей передает аллель А 2, а другой О или В, фенотип ребенка будет

А₂ или А₂В.

Оба аллеля (А 1 и А 2) кодируют синтез ацетилгалактозаминилтрансфераз, которые присоединяют терминальные углеводные группировки А к веществу Н. Указанные трансферазы отличаются друг от друга кинетической активностью, оптимумом рН, изоэлектрическими точками. А₁-трансфераза обладает большей активностью.

N-ацетилгалактозамины как акцепторный субстрат также, по-видимому, не идентичны, что вносит свой вклад в разнообразие строения антигена А.

Предполагают, что различия А₁ и А₂ обусловлены липидсвязанными цепя-ми 3 (тип 3Н и 4Н). Поскольку А₁-трансфераза более активно присоединяет тер-минальные углеводные группировки, на цепях 3Н эритроцитов А₁ образует-ся большее число А-антигенных копий, а на цепях 3Н клеток А₂ в силу мень-шей активности А₂-трансферазы образуется меньшее число копий. Таким обра-зом, 3Н-цепи лиц А₂ получают существенно меньше вещества А. В то же вре-мя на них остается больше вещества Н, чем и объясняется большая экспрессия Н-антигена на эритроцитах А₂ по сравнению с эритроцитами А₁.

В количественном отношении антиген Н находится в реципрокных соотноше-ниях с А и В. Как отмечено выше, иммунодоминантные А- и В-сахара присоеди-няются к Н-цепям типов 1, 2, 3 и 4. По мере увеличения количества присоединен-ных А- или В-антигенных группировок содержание серологически выявляемой субстанции Н уменьшается. Поскольку фенотипы А₁ и В несут большее количе-ство иммунодоминантных группировок, серологически выявляемое количество антигена Н на таких клетках минимально. Иными словами, исходное количество вещества Н на клетках указанных групп заблокировано или преобразовано в А- и В-детерминанты. Это убедительно подтверждают результаты сравнительного ис-следования содержания вещества Н на эритроцитах А₂ и О. Эритроциты А₂ со-держат меньше антигена А, однако количество антигена Н на них выше по срав-нению с клетками А₁ и В. На эритроцитах А₂ для антител анти-Н доступно гораз-до большее количество соответствующих антигенных участков. Количество анти-гена Н на эритроцитах А₁ и В иногда настолько мало, что некоторые из носителей этих фенотипов вырабатывают анти-Н-антитела, не реагирующие с собственны-ми клетками. У лиц А₂ анти-Н-антитела не образуются.

Предположение о том, что вещество Н экранировано на клетках детерминан-тами А и В подтверждается и тем, что эритроциты А₃, А_х и других слабых под-групп по количеству содержащегося в них вещества Н приближаются к клеткам группы О. Поскольку аллель О является молчащим, вещество Н на эритроци-тах О свободно от группоспецифических углеводных группировок. В силу это-го эритроциты О реагируют с анти-Н-антителами более интенсивно, чем клетки А₂, и анти-Н-антитела у лиц О никогда не образуются.

Интересная деталь, эритроциты группы О удавалось преобразовать in vitro в А или В посредством обработки А- или В-трансферазой в присутствии А- и

90

В-специфического донорского субстрата (Romano и соавт., цит. по Issitt и Anstee [122]). Н-дефицитные клетки O_h (Бомбей) такой конверсии не поддавались.

Реципрокные количественные соотношения вещества Н с А и В наблюдают при исследовании секретов лиц выделителей. Исключение составляли выдели-тели с фенотипом пара-Бомбей, секретирующие А или В, но не Н, а также ин-дивиды A_int (см. A_int), у которых реципрокность А, В и Н нарушена.