Поможем в ✍️ написании учебной работы

Имя

Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

Выберите тип работыЧасть дипломаДипломная работаКурсовая работаКонтрольная работаРешение задачРефератНаучно - исследовательская работаОтчет по практикеОтветы на билетыТест/экзамен onlineМонографияЭссеДокладКомпьютерный набор текстаКомпьютерный чертежРецензияПереводРепетиторБизнес-планКонспектыПроверка качестваЭкзамен на сайтеАспирантский рефератМагистерская работаНаучная статьяНаучный трудТехническая редакция текстаЧертеж от рукиДиаграммы, таблицыПрезентация к защитеТезисный планРечь к дипломуДоработка заказа клиентаОтзыв на дипломПубликация статьи в ВАКПубликация статьи в ScopusДипломная работа MBAПовышение оригинальностиКопирайтингДругое

Нажимая кнопку "Продолжить", я принимаю политику конфиденциальности

 МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

МЕТОДИЧЕСКОЕ ПОСОБИЕ ДЛЯ СТУДЕНТОВ

МЕДИЦИНСКОГО УНИВЕРСИТЕТА ПО ГИСТОЛОГИИ И ЦИТОЛОГИИ С ОСНОВАМИ ЭМБРИОЛОГИИ

 

 

 Под редакцией: д.м.н. П.А. Мотавкина

                     к.б.н. И.В. Ковалевой

 

 

Владивосток

2003

 

 

Предлагаемое методическое пособие написано в соответствии с действующей программой и новейшими данными по гистологии, цитологии и эмбриологии для студентов 1-2 курсов Владивостокского государственного медицинского университета

 

 

Составители: к.м.н. Баранов В.Ф., к.б.н. Ковалева И.В., д.м.н. Ломакин А.В., д.м.н. Рева Г.В., к.м.н. Марчук О.В., к.м.н. Матвеева Н.Ю.,

                   к.б.н. Холоденко Г.М.

 

Технический редактор: Котова Н.Д.

 

Рецензенты: д.м.н. Красников Ю.А.

                 д.м.н. Маркина Л.Д.

 

Утверждено к печати цикловой методической комиссией кафедр медико- биологических дисциплин ВГМУ, протокол № 10 от 12.02.03.

 

                         Весенний семестр

 

 

 

МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА ЛАБОРАТОРНОГО ЗАНЯТИЯ № 1 ДЛЯ СТУДЕНТОВ

ВГМУ, кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии

 

ТЕМА: «ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА»

Время: 3 часа

Хронокарта: 1.Организационная часть с мотивацией темы - 5 мин

                   2.Программированный контроль                     - 10 мин

                   3.Опрос – беседа                                                - 35 мин

                   4.Объяснение препаратов                                      - 10 мин

                   5.Перерыв                                                           - 15 мин

                   6.Контроль за самостоятельной работой

                   студентов. Помощь в работе с препаратами   - 65 мин

                   7.Подведение итогов. Проверка альбомов      - 10 мин

 

Мотивационная характеристика темы: Развитие гистологии как науки и её дальнейший прогресс тесно связаны с совершенствованием методов исследования. Гистология располагает большим арсеналом средств для изучения биологических структур на всех уровнях их ор­ганизации: клеточном, тканевом, органном. Методы исследования, применяемые гистологи­ей необходимы врачу любого профиля для диагностики, лечения и профилактики заболева­ний, познания причин, вызывающих болезни и осложнения их течения.

Материалы темы «Гистологическая техника» способствуют активному формированию мировоззрения будущего врача. Взаимоотношения между структурой и функцией рассматриваются с позиции диалектического представления о единстве материи и её движения; нет структуры без функции и нет функции без структуры. Структура является материальным субстратом любой функции организма. Необходимо отметить, что прогресс современной гистологии в большей степени определяется тем, что она основывается на достижениях фи­зики, химии, математики и кибернетики. Внедрение новейших методов исследования обуславливает бурное развитие биологических наук, в том числе гистологии, обеспечивает широкое внедрение гистологии в клинические дисциплины.

 

Учебная цель

Общая цель - Знать общие принципы микроскопических методов исследования. Уметь работать на свето­вом микроскопе.

Конкретная цель - 1.Знать принципы работы и овладеть навыками работы на световом микроскопе. 2.Знать принципы работы поляризационной микроскопии. 3. Знать принципы работы фазовоконтрастной микроскопии.

4.Знать принципы работы интерференционной микроскопии. 5.Знать принципы работы флуоресцентной микроскопии. 6.Знать принципы работы электронной микроскопии. 7.Иметь представление о гистологических и гистохимических методах исследования. 8.Иметь представление о количественном методе исследования.

 

Необходимый исходный уровень знаний

Из других предметов и предшествующих тем:

1. Физические свойства световой, люминесцентной, интерференционной, электронной мик­роскопии.

2. Химические свойства кислотных и щелочных растворов.

3. Устройство световых микроскопов: «Биолам», «Эрудит», «МБР-1», «МБИ»

 

ВОПРОСЫ ДЛЯ САМОПОДГОТОВКИ.

1. Назвать основные части светового микроскопа.

2. Что такое разрешающая способность микроскопа.

3. Правила работы с микроскопом.

4. Что такое тёмнопольная микроскопия и её применение при исследовании объектов.

5.Каковы возможности фазовоконтрастной и интерференционной микроскопии в изучении биологических объектов.

6. Люминесцентная микроскопия. Первичная и вторичная флуоресценция.

7.Принципы работы электронного микроскопа. Его разрешающая способность.

8. Гистологические и гистохимические методы исследования.

9. Количественные методы гистологического исследования.

 

Рекомендации для работы на занятии.

Задание 1. Овладеть правилами работы со световым микроскопом.

Объект изучения - «Биолам», «Эрудит», «МБР-1».

Программа действий - Научиться микроскопировать при малом и большом увеличении объ­ектива.

Ориентировочные основы действий - Прежде, чем начать работу с микроскопом, нужно уста­новить его на рабочем месте так, чтобы он был обращен колонкой к наблюдателю, а зеркалом к источнику света. Затем установить освещение при слабом увеличении объектива, повернув зеркало так, чтобы поле зрения микроскопа было освещено равномерно и достаточно ярко, но чтобы свет не раздражал глаз. После этого положить препарат на предметный столик по­кровным стеклом кверху, чтобы объектив приходился против отверстия столика. Микроскопирование препарата всегда надо начинать при слабом увеличении, глядя сбоку на микро­скоп, нужно опустить его тубус, вращая от себя макровинт до тех пор, пока фронтальная ли­ния объектива не будет на расстоянии 0,5 см от покровного стекла. Затем, смотрят в окуляр левым глазом и, держа при этом правый глаз открытым, медленно вращать макровинт на себя до получения изображения препарата. Для более четкой наводки пользуются микровинтом, вращая его не более, чем на пол-оборота в обоих направлениях. С помощью микровинта мож­но определить толщину препарата в мкм. Изучая препарат при слабом увеличении микроско­па, нельзя ограничиваться одним полем зрения - необходимо исследовать препарат по всей его поверхности, т.к. заключенный под покровное стекло гистологический срез может лежать не совсем горизонтально, и толщина его частей может быть разной, при его перемещении те­ряется четкость изображения. Поэтому нужно, передвигая препарат держать свободную руку на макровинте и слегка вращать его. Но при этом нужно помнить, что микроскоп дает обрат­ное изображение, т.е. при перемещении препарата сверху вниз изображение будет двигаться снизу вверх. После того, как найдено на препарате хорошее место дальнейшего изучения, не­обходимо поставить его в центре поля зрения и закрепить препарат зажимами. После этого сменить увеличение на сильное: поднять тубус микроскопа при помощи поворота микровин­та на себя, сменить объектив слабого на объектив сильного увеличения поворотом револьве­ра. Глядя сбоку на микроскоп, вращают микровинт от себя до тех пор, пока фронтальная лин­за не приблизиться вплотную к покровному стеклу. После этого, глядя в окуляр, осторожно вращать микровинт на себя до появления четкого изображения препарата. Наиболее четкая наводка на фокус достигается вращением микровинта так же, как и при слабом увеличении. После окончания микроскопирования нельзя сразу снимать препарат с предметного стекла, нужно предварительно поднять тубус несколькими оборотами макровинта, иначе можно по­вредить препаратом фронтальную линзу. Затем приводят микроскоп в исходное состояние, т.е. ставят над отверстием столика объектив слабого увеличения на расстоянии 2-3 см. от не­го. Перенося микроскоп, держат правой рукой колонку штатива, а левую подставляют под его основание. С помощью оптических микроскопов можно изучать биологические объекты при различном увеличении. Увеличение до 440 х дают "сухие" объекты, т.е. те, при работе с которыми между препаратом и объективом имеется небольшое пространство (воздух), боль­шое увеличение достигается с помощью короткофокусных объективов, когда между объекти­вом и исследуемым препаратом помещают каплю жидкости (вода, масло). Эта система назы­вается иммерсионной. В зависимости от применяемой жидкости различают масляную или водную иммерсию. Иммерсионная система позволяет изучать препараты с увеличением в 1200-1500 раз. Оптические микроскопы обладают ограниченными данными, в связи с чем, в гистологию введены новые методы микроскопии.

 

Задание 2. Знать принципы работы поляризационного, интерференционного, люминесцентного, электронного микроскопов.

Объект изучения - Поляризационный, интерференционный, люминесцентный, электронный микроскопы.

Ориентировочные основы действий - Поляризационная микроскопия употребляется в цитоло­гии для определенных целей. Она позволяет выявить структуры с упорядоченным располо­жением молекул (например, кристаллы или фибриллярные белки). Такие структуры облада­ют, как известно, двойным лучепреломлением (анизотропией): проходящий через них свето­вой луч разделяется на два, распространяющихся с различной скоростью и в различных на­правлениях. В поле зрения поляризационного микроскопа анизотропные объекты оказывают­ся ярко светящимися на темном поле. Отечественный микроскоп МИН-8 является отличным прибором и вполне удовлетворяет исследователей-биологов. На кафедре имеется микро­скоп "Варшава".

Интерференционная микроскопия тоже основана на применении поляризационного света. На основе эффекта фазового сдвига можно судить о структурах объекта и плотности отдельных участков: т.к. сдвиг связан с плотностью структуры, то измерив величину клетки (или её части), можно найти её сухой вес в граммах.

Флуоресцентная микроскопия позволяет изучать как собственную (первичную) флуо­ресценцию ряда веществ, так и вторичную флуоресценцию, вызывая окрашиванием биологи­ческих структур специальными красителями - флуорохромами. Принцип метода состоит в том, что некоторые вещества при световом облучении сами начинают светиться, причём длина волны испускаемого ими света всегда больше, чем длина волны света, возбуждающего флуоресценцию. Поэтому для возбуждения флуоресценции в видимой части спектра обычно поль­зуются синими или ультрафиолетовыми лучами. Собственной флуоресценцией обладают нуклеиновые кислоты, рибофлавин и ряд др. В качестве флуорохрома чаще всего применяют акридиновый оранжевый. Флуоресценцию можно наблюдать визуально и фотографировать. Всеми необходимыми качествами для произведения флуоресцентной микроскопии обладает наш отечественный микроскоп МЛ-2.

     Электронная микроскопия. Создание электронного микроскопа основано на возмож­ности магнитного поля, обладающего магнитной симметрией подобно линзам, фокусировать поток электронов (Буш, 1926). В связи с тем, что длина волны электромагнитного колебания при движении электронов (=0.0056) короче длинны волны видимого света (200-800 нм), раз­решающая сила электронного микроскопа во много раз больше, чем у световых микроскопов. Полностью реализовать возможности электронного луча невозможно в связи с техническими затруднениями, однако уже сейчас разрешающая способность электронного микроскопа рав­на 1/2 -1/4 нм. Отечественные электронные микроскопы ЭММА-10 К имеют разрешающую способность 0,5 нм, а ЭНМ-100 Л-0,25 нм. Электронный микроскоп построен следующим об­разом: 1. Источник электронов (по типу электронной пушки). 2.Система электромагнитных конденсоров. 3.Держатель образца (исследуемого объекта). 4.Электронный объектив (сис­тема электромагнитов). 5.Система электронных проекторов. 6.Флуоресцентный экран для визуального наблюдения. 7. Камера для фоторегистрации изображения. Вся система элек­тронного микроскопа работает в глубоком вакууме. В отличие от светового микроскопа, в ко­тором изображение определяется в связи с поглощением света в электронном микроскопе флуоресценции экрана и воспроизведение деталей объекта зависят от степени рассеивания электронов при прохождении через изучаемый объект. Препараты для электронного микро­скопа должны быть тонкими (0,5-2,0 нм). Готовятся они на специальном ультратоме. В част­ности на кафедре имеется УМВБ-2.

 

Основная и дополнительная литература

Основная литература: 1)Учебник гистологии (под ред. Ю.И. Афанасьева, Н.А. Юриной). М. , «Меди­цина», 1999. 2) Учебник гистологии (под ред. Ю.И. Афанасьева, Н.А. Юриной). М. , «Ме­дицина», 1989. 3) Г.Э. Улумбеков «Гистология», 1999. 4) З.С. Канцельсон, И. Д. Рихтер «Практикум по гистологии цитологии и эмбриологии» 1963. 5) Ю.С.Ченцов «Общая цитология», 1978. 6) Г.А. Меркулов «Курс патогистологической техники», 1969. 7) Лекционный курс.

Дополнительная литература: 1) М. Уикли «Электронныя микроскопия для начинающих», 1978, М. «Мир». 2) Н.Луппа «Гистохимия», 1979, «Мир».

 

ТСО и наглядные пособия

1. Микроскопы

2. Внеаудиторные стенды: 1. Микроскопическая техника. 2. Жизнь кафедры.

 

 Домашнее задание: см. методическую разработку лабораторных занятий для студентов по теме: «Приготовление постоянного гистологического препарата».

МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА ЛАБОРАТОРНОГО ЗАНЯТИЯ № 2 ДЛЯ СТУДЕНТОВ