Материалом для бактериологического исследования при острых кишечных инфекциях чаще всего служат фекалии, реже рвотные массы, промывные воды желудка, (по клиническим показаниям − желчь, кровь, моча).

В целях эпидемиологического анализа это могут быть пробы воды (при холере), остатки пищевых продуктов (при пищевых токсикоинфекциях).Выбор материала для исследования тесно связан и с нозологической формой острых кишечных инфекций и с конкретной клинической фазой заболевания, что особенно характерно для тифо-паратифозного заболевания.

При исследовании фекалий в качестве материала для бактериологического исследования при острых кишечных инфекциях необходимо помнить, что перед его проведением следует:

1)провести окрашивание мазков фекалий метиленовым синим для выявления лейкоцитов, свидетельствующих о поражении слизистой кишечника;

2)провести микроскопический анализ нативного мазка фекалий на яйца глист, т.к. гельминтозы могут протекать с клиникой острых кишечных инфекций, и микроскопический анализ на простейшие (амебы, лямблии, криптоспоридии);

3)для исключения псевдомембранозного колита, вызванного токсинами Clostridium difficile, по возможности, произвести сигмоскопию;

Проба, аккуратно отобранная с помощью ректального тампона, и содержащая небольшое количество материала, должна быть помещена в соответствующую транспортную среду вместе со слизью и частицами эпителия.

Со взятым материалом следует начать работу как можно быстрее после доставки его в лабораторию, по крайней мере не позже чем через 2 часа после взятия. Если невозможно произвести посев фекалий безотлагательно, образцы исследуемого материала хранят при температуре 40С. Безотлагательный посев особенно информативен в отношении шигелл и кампилобактеров.

Особенности проведения 1-го этапа бактериологического исследования при подозрении на острую кишечную инфекцию состоят в том, что:

1) первичная бактериоскопия мазков из фекалий не проводится, поскольку в норме в них содержится большое количество различных микроорганизмов со сходными морфолого-тинкториальными свойствами;

2)учитывая полиэтиологичность острых кишечных инфекций, для выделения чистой культуры посев проводится (из разведений фекалий в физиологическом растворе) на дифференциально-диагностические среды – среду Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфит агар или в среды обогащения − селенитовый бульон, желчный бульон (способствующие накоплению патогенных энтеробактерий), при этом образец в первую очередь исследуется на наличие патогенных бактерий.

Чашки с питательной средой могут быть засеяны материалом, взятым непосредственно с ректального тампона, при этом посев может быть как легким, так и плотным, в зависимости от вида используемой питательной среды. Вместе с тем, когда материал засевают более чем на три чашки, полезно приготовить фекальную суспензию на физиологическом растворе (1,0 мл на тампон), в жидкие каловые массы добавлять физиологический раствор нет необходимости.

Посев суспензии рекомендуется осуществлять с помощью бактериологической петли, что позволяет нанести небольшое количество органического материала, поскольку излишне большое количество может исказить вид появляющихся колоний, хотя можно использовать и метод рассева шпателем, особенно из разведений фекалий.

На 2-м этапе бактериологического исследования для накопления и дальнейшей биохимической и серологической идентификации в первую очередь отбираются выросшие на дифференциально-диагностических средах лактозонегативные колонии (бесцветные – цвета среды) грамотрицательных палочек. При отсутствии лактозонегативных колоний среди лактозоположительных (окрашенных) колоний грамотрицательных палочек отбор потенциальных возбудителей проводят по результатам реакции агглютинации по идентификации с комплексными поливалентными эшерихиозными сыворотками ОКА, ОКВ, ОКС (смесь нескольких моновалентных сывороток), содержащими в своем составе антитела к антигенам различных серогрупп патогенных кишечных палочек – возбудителей эшерихиозов.

Для накопления отобранную чистую культуру пересевают на скошенный мясо-пептонный агар.

Накопленную чистую культуру возбудителя идентифицируют до рода и вида путем определения подвижности, капсулообразования, постановки теста на оксидазу, по биохимическим свойствам (с использованием или рутинных тестов или набора соответствующих сред − энтеротесты, API-системы и т.д.). В дальнейшем, особенно для сальмонелл, шигелл и патогенных кишечных палочек, с использованием соответствующих видоспецифических и вариантспецифических агллютинирующих сывороток, проводят серологическую идентификацию, которая позволяет осуществить и внутривидовую дифференцировку до серовара.

При диагностике брюшного тифа и паратифов особенность бактериологического исследования состоит в том, что выбор материала для исследования диктуется фазой течения заболевания.В начале болезни и в дальнейшем на высоте лихорадки, это кровь – для выделения гемокультуры (засевается в желчный бульон в разведении 1:10 непосредственно у постели больного, первичная микроскопия не проводится). Со второй, третьей недели и в период реконвалесценции материалом для исследования служат в основном пунктат костного мозга (для выделения миелокультуры), фекалии (для выделения копрокультуры), хотя можно использовать мочу (для выделения уринокультуры) или в период разгара болезни − соскоб с розеол (для выделения розеолокультуры).

Выделение чистой культуры сальмонелл – возбудителей тифо- паратифозного заболевания проводится путем высева на дифференциально- диагностические среды, а дальнейший ход бактериологического исследования (накопление выделенной культуры, определение ее морфологических и тинкториальных свойств, биохимическая и серологическая идентификация выделенной чистой культуры возбудителя до рода и вида) − по общепринятой методике, без особенностей.

Для бактериологической диагностики иерсиниоза первичный посев проводится на специальные среды (среда Серова) с последующим холодовым обогащением (посевы помещают в холодильник с последующим высевом на плотные питательные среды).

Для выделения Campylobacter – первичный посев проводится на специальные для них питательные среды с добавлением антибиотиков (для подавления сопутствующей микрофлоры). Посевы инкубируют в анаэростате.

Для бактериологической диагностики холеры материал от больного засевают на элективную питательную среду (1%-ная пептонная вода)

Для диагностики заболеваний, вызываемых C.difficile, в фекалиях больных обнаруживают экзотоксин (ИФА) или применяют молекулярно- генетические методы.

При пищевых токсикоинфекциях первичный посев материала проводится для выделения возможно большего круга возможных возбудителей на ряд сред– среда Эндо, посев по Шукевичу, ЖСА, кровяной агар, среда Китта-Тароцци, среды обогащения.