Основной метод диагностики дифтерии - бактериологический, обычно с предварительной бактериоскопией. Серологический метод используют для определения токсигенности возбудителя и, значительно реже, для выявления антитоксинов в сыворотке крови больного.

Материалы для исследования: пленки или слизь из зева, носа, глаза и других областей в зависимости от локализации поражений. Клинический материал берут сухим тампоном, пленки отделяют пин­цетом. Материал для микроскопии и посева берут отдельными тампо­нами. Бактериологическое исследование рекомендуется начать не позднее чем через 3 часа после взятия материала.

Бактериоскопии подвергаются микропрепараты, приготовлен­ные с тампона и окрашенные по Граму, Леффлеру, Нейссеру. При об­наружении палочек с морфологией и расположением, характерным для C.diphtheriae (зерна волютина на полюсах клеток), дают предваритель­ный ответ: "обнаружены палочки, подозрительные на дифтерийные; исследование продолжается".

Бактериологическое исследование. Производят посев инфици­рованным тампоном на чашки с теллуритовым кровяным агаром (сре­да Клауберга и др.), на которых могут вырасти радиально исчерченные колонии серого цвета (бивар gravis) или черные гладкие колонии не­сколько меньшего размера (биовар mitis). Потемнение колоний C.diphtheriae происходит вследствие их способности восстанавливать теллур из теллурита калия, (теллурит калия включают в среду для по­давления роста грамотрицательной микрофлоры). Колонии отсевают на скошенные среды - сывороточный агар или свернутую лошадиную сыворотку. Выделенную культуру идентифицируют на основании изу­чения ее морфологических, культуральных, биохимических свойств и определения токсигенности. C.diphtheriae ферментирует глюкозу, га­лактозу, цистеин, не расщепляет сахарозу и мочевину (см. табл 13).

Таблица 13. Дифференциальные признаки Cdiphtheriae и некоторых других видов коринебактерий, выделяемых со слизистых дыхательныхпутей человека

Определение токсигенности - очень важный тест при идентифи­кации выделенной культуры коринебактерий, так как продуцировать экзотоксин способны только патогенные штаммы C.diphtheriae и имен­но они являются возбудителями дифтерии.

Токсигенность определя­ют с помощью двойной диффузии в геле (метод Оухтерлони). Для постановки реакции нейтрализации в геле по Оухтерлони берут чашки Петри с фосфатно-пептонным агаром. На поверхность питательной среды помещают стерильную полоску фильтровальной бумаги (2,0x8 см), смоченную стандартной антитоксической противо­дифтерийной сывороткой, содержащей 500 МЕ/мл. По обеим сторо­нам бумажки на расстоянии 1 см от нее симметрично засевают испытуемые дифтерийные культуры бляшками или штрихами. Контроли: посев заведомо нетоксигенной и токсигенной культур. Результа­ты учитывают через 24,48 и 72 часа инкубации при 37°С. Если культура токсигенна, то между полоской бумаги и ростом культуры образуются белые линии преципитации в результате встречной диффузии анти­токсина и токсина. Образующиеся дугообразные линии должны со­впадать с линией преципитата контрольной токсигенной культуры.

Можно определять токсигенность у выделенных культур C.diphtheriae также при помощи вариантов реакции непрямой гемагглютинации - РОНГА и РНАТ. Эти реакции позволяют получать ре­зультат в день исследования (нередко через 1-2 часа) и отличаются высокой чувствительностью.

Лечение и профилактика

1) Вакцина коклюшно-дифтерийно-столбнячная адсорбированная жидкая (АКДС - вакцина) - применяется для плановой вакцинации детей от 3 мес. до 3 лет. Содержит взвесь убитых коклюшных микробов и очищенных дифтерийного и столбнячного анатоксинов, сорбирован­ных на алюминия гидроксиде (20 млрд. микробных клеток коклюшных бактерий/мл); 30 флокулирующих доз (Lf) дифтерийного и 10 антитоксинсвязывающих (ЕС) столбнячного анатоксина в 1 мл.

2) Тетракок (Франция). Содержит 30 ЕС дифтерийного анатокси­на, 60 ЕС столбнячного анатоксина, адсорбированных на гидроокиси алюминия, взвесь убитых коклюшных бактерий и инактивированную полиомиелитную вакцину 1, 2 и 3 типов. Предназначен для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка и полиомиелита. Обладает более высокой реактогенностью, чем АКДС вакцина.

3) Анатоксин дифтерийно-столбнячный очищенный адсорбиро­ванный (АДС). Содержит в 1 мл 60 Lf дифтерийного и 20 ЕС столб­нячного анатоксина, очищенных и сорбированных на алюминия гидроксиде. Предназначен для профилактики дифтерии и столбняка у детей до 6 лет.

4) Анатоксин дифтерийно-столбнячный очищенный адсорбиро­ванный с уменьшенным содержанием антигенов - АДС-М-анатоксин, препарат содержит в 1 мл 10 Lf дифтерийного и 10 ЕС столбнячного анатоксинов. Применяют у детей с 6 летнего возраста, у подростков и взрослых. У ослабленных детей и непереносимости АКДС-вакцины применяют АДС-М-анатоксин в более раннем возрасте.

5) Анатоксин дифтерийный очищенный адсорбированный с уменьшенным, содержанием антигена жидкий - АД-М-анатоксши Препарат содержит в 1 мл 10 Lf дифтерийного анатоксина, сорбиро­ван на алюминия гидроксиде. Предназначен для профилактики диф­терии у детей с 6-летнего возраста, подростков.

6) Сыворотка противодифтерийная лошадиная очищенная кон­центрированная жидкая - белковая фракция сыворотки крови лоша­дей, гипериммунизированных дифтерийным анатоксином, содержащая антитела - дифтерийные антитоксины (не менее 1500 МЕ/мл). Препа­рат применяют для лечения дифтерии в дозах от 10 000 ME до 100 000 ME в зависимости от тяжести заболевания. Антитела сыворотки нейтрализуют только не связанный с чувствительными клетка­ми токсин, поэтому специфическое лечение следует начинать в первые дни болезни.

Для воздействия на возбудителя дифтерии применяют антибио­тики эритромицин, клиндамицин, рифампицин и др.

III . План практической работы

1.  Приготовить мазок из "мокроты больного туберкулёзом", окрасить по Цилю-Нильсену, микроскопировать с иммерсией, зарисовать, дать заключение.

2.  Описать культуральные свойства колоний микобактерий на среде Левенштейна-Йенсена.

3.  Заполнить таблицу: «Факторы патогенности M.tuberculosis».

4.  Изучить и описать методы обогащения мокроты:

а) метод гомогенизации

б) метод флотации

5. Изучить и описать метод микрокультивирования микобактерий по Прайсу.

6. Микроскопировать с масляной иммерсией мазок чистой культуры коринебактерий, окрашенный по Леффлеру, зарисовать, дать заключение.

7. Изучить характер роста дифтерийной палочки на среде Клауберга. Описать культуральные свойства колоний, зарисовать.

8. Заполнить таблицу: «Дифференциальные признаки C. diphtheriae и некоторых других видов коринебактерий, выделяемых со слизистых дыхательныхпутей человека».

9. Изучить технику постановки и учесть реакцию преципитации (РП) в геле с целью определения токсигенности дифтерийной палочки (РН токсина антитоксической сывороткой).

10. Решение ситуационных задач.