Лабораторная диагности­ка проводится бактериологическим, серологическим и молекулярно-генетическим методами.

Основной метод диагностики – бактериологический. Материал для исследования - испражнения и рвотные массы, секционные материалы от погибших, пробы воды и смывы с объектов окружающей среды, пищевые остатки. Исследование начинают с предварительного этапа: испражнения засевают на среду обогащения - щелочную пептонную воду, при отсутствии видимого роста пересе­вают на 2-ю пептонную воду. Далее делают посев с пептонной воды на чашки с элективными средами для получения роста колоний.

Одновременно засевают исходный исследуемый материал непос­редственно на чашки с теми же средами, т.е. проводят сразу 1-й этап исследования. Если на чашках вырастают колонии вибрионов, то дли­тельность бактериологического исследования сокращается на 6-8 ча­сов. Это очень важно, т.к. исследование проводится круглосуточно, по часам для наиболее быстрого получения результата, см. таблицу 12.

Таблица 12.Бактериологическое исследование испражнений больного

При подозрении на холеру

Серологический метод диагностики проводится с сывороткой больного для выявления антител к холерогену (наиболее ранние AT), агглютининов и вибриоцидных AT. Используются РИГА, РА, реакция бактериолиза и др. Серологические методы являются дополнительными, используются для выявления переболевших, установления напряженности иммунитета у вакцинированных.

Молекулярнв-генетический метод: ставятся ПЦР для обнару­жения следующих генов в ДНК возбудителей top- и act- гены, кодирующие факторы адгезии и колонизации и ctxA-и сгхВ- гены (Vet -гены), кодирующие субъединицы А и В холерогена.

Ускоренные методы диагностики при холере имеют лишь ориентировочное значение. Ответ с их помощью можно получить как через 3-5 мин, так и в течение 3-5 часов. Применяются следующие методы:

· Метод иммунофлюоресценции позволяет подтвердить диагноз через 1,5 —2 часа при условии концентрации вибрионов в фека­лиях 10-⁶- 10-⁷ мкл./мг;

· Метод иммобилизации вибрионов. Микроскопия в темном поле зрения или в фазово-контрастном микроскопе нативного мате­риала с добавлением специфической холерной О-сыворотки позволяет обнаружить холерный вибрион в течение 3-5 мин при концентрации последнего свыше 10-5 мкл./мл;

· Реакция микроагглютинацми с нативным материалом и холер­ной агглютинирующей О-сывороткой дает ответ через 5-10 мин.;

· Реакция макроагглютинации с подращиванием нативного материа­ла в ПВ с холерной О-сывороткой дает результат через 3-4 часа;

Лечение и профилактика

Специфическая профилактика. Имеются различные вакцины – корпускулярная убитая из сероваров Инаба и Огава, анатоксин холерогена, химическая бивалентная вакцина и живая для применения per os. Вакцины применяют только по эпидпоказаниям (низкая иммуногенность). Может проводиться антибиотикопрофилактика (превентивная терапия) тетрациклином и другими антибиотиками.

Вакцину вводят строго подкожно взрослым и детям (стар­ше 2 лет) для профилактики холеры двукратно с интервалом 7-10 дней. При проведении плановой массовой вакцинации прививку прово­дят в первую очередь лицам, вероятность заражения которых очень высокая: медицинские работники, участвующие в проведении работ по борьбе с холерой, работники очистных и канализационных соору­жений; лица, занятые сбором мусора, работники новостроек, пересе­ленцы и сезонные рабочие, проживающие в неудовлетворительных бы­товых условиях. Иммунитет на вакцину развивается в течение 30 дней после второго введения препарата, сохраняется до 6 месяцев, постепенно угасая. Это должно учитываться при определении сроков плановой вакцинации с учетом предполагаемого подъема заболеваемости.

Холероген-анатоксин представляет собой препарат, полученный из холерного экзотоксина, обезвреженного формалином. Использует­ся в профилактике холеры для создания антитоксического иммунитета. Вводят вакцину подкожно по эпидемическим показаниям.

Лечение: восполнение потери жидкости и электролитов, также проводят антибактериальную терапию препаратами тетрациклинового ряда.

I. План самостоятельной работы:

1. Произвести учёт роста холерного вибриона на щелочном МПБ. Описать рост:

2. Произвести учёт биологических свойств классического холерного вибриона и вибриона Эль-Тор.

3. Произвести учёт развёрнутой реакции агглютинации с парными сыворотками.

4. Заполнить таблицу: «Исследуемые материалы при кишечных инфекциях, вызываемых энтеробактериями».

5. Решение ситуационных задач

Теоретические вопросы для рубежного контроля знаний

1. Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики колиэнтеритов.

2. Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики кишечного иерсиниоза.

3. Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики дизентерии.

4. Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики брюшного тифа, паратифов А и В.

5. Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики сальмонеллёзных гастроэнтеритов.

6. Характеристика биологических свойств и особенности микробиологической диагностики холеры.