Поможем в ✍️ написании учебной работы

Имя

Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

Выберите тип работыЧасть дипломаДипломная работаКурсовая работаКонтрольная работаРешение задачРефератНаучно - исследовательская работаОтчет по практикеОтветы на билетыТест/экзамен onlineМонографияЭссеДокладКомпьютерный набор текстаКомпьютерный чертежРецензияПереводРепетиторБизнес-планКонспектыПроверка качестваЭкзамен на сайтеАспирантский рефератМагистерская работаНаучная статьяНаучный трудТехническая редакция текстаЧертеж от рукиДиаграммы, таблицыПрезентация к защитеТезисный планРечь к дипломуДоработка заказа клиентаОтзыв на дипломПубликация статьи в ВАКПубликация статьи в ScopusДипломная работа MBAПовышение оригинальностиКопирайтингДругое

Нажимая кнопку "Продолжить", я принимаю политику конфиденциальности

(ПО СТАНДАРТНЫМ СЫВОРОТКАМ И СТАНДАРТНЫМ ЭРИТРОЦИ-

ТАМ) (перекрестный способ)

Суть метода – с помощью стандартных изогемагглютинирую-

щих сывороток определяется наличие или отсутствие в исследуемой

крови групповых антигенов А и В, а с помощью стандартных эритр о-

цитов наличие или отсутствие в плазме групповых антител α и β.

Стандартные эритроциты представляют собой 10-20 % взвесь эритро-

цитов 0(I), A(II) и B(III) групп в цитратно-физиологическом растворе.

Их готовят из крови доноров с заранее известной группой крови, хр а-

нят при +4-8°С. Срок годности 2-3 дня.

Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(I), А(II),

В(III), групп двух серий, стандартные эритро циты 0(I), А(II), В(III)

групп, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стек-

лянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, р е-

зиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник.

Методика выполнения:

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для

обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Взять 3-5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизато-

ра. Кровь должна отстояться, или ее центрифугируют для получения

сыворотки.

3. На планшет нанести по две капли стандартных сывороток

группы 0(I), А(II), В(III), двух серий.

183

4. Соответственно каждой группе сывороток расположить по

одной капле стандартных эритроцитов группы 0(I), А(II), В(III), .

5. В стандартные сыворотки добавить по одной капле испытуе-

мой крови, а в стандартные эритроциты - по две капли испытуемой

сыворотки.

6. Капли перемешать углом предметного стекла, всякий раз из-

меняя угол так, чтобы не произошло смешивание разных сывороток и

разных эритроцитов.

7. Покачивая планшет в руках в течение 5 минут, следят за

наступлением агглютинации.

Оценка результатов:

При трактовке результатов оценивают данные, полученные при

обеих реакциях (со стандартными изогемагглютинирующими сыво-

ротками и стандартными эритроцитами)

1. Эритроциты группы О (I) являются контрольными, агглюти-

нация с ними не происходит.

2. Агглютинация со стандартными эритроцитами А и В и нет аг-

глютинации в трех стандартных сыворотках двух серий - в исследуемой

сыворотке присутствуют оба агглютинина и , а в испытуемых эритро-

цитах нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе O(I).

3. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы B(III)

и со стандартной сывороткой группы O(I), B(III) - в исследуемых

эритроцитах имеется агглютиноген А, а в сыво ротке исследуемой

крови - агглютинин . Следовательно, кровь относится к группе A(II).

4. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы A(II) и

со стандартной сывороткой группы A(II), O(I) – в исследуемых эрит-

роцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке - агглю-

тинин . Следовательно, кровь относится к группе B(III).

5. Нет агглютинации со стандартными эритроцитами и есть агглю-

тинация со стандартными сыворотками - в исследуемых эритроцитах

имеются оба агглютиногена А и В, а в сыворотке исследуемой крови о т-

сутствуют оба агглютинина, кровь относится к группе AB(IV).

Примечание. Результат перекрестного способа считается до-

стоверным только в случае совпадения ответов о группе исследуемой

крови и со стандартными изогемагглютинирующими сыворотками и

со стандартными эритроцитами. При несовпадении результатов обе

реакции необходимо переделать.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ

С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИТЕЛ

Определение группы крови можно произвести с помощью мо-

ноклональных антител (МКА). Для определения агглютиногенов

184

эритроцитов используют стандартные реагенты цоликлоны анти-А и

анти-В. Получают моноклональные антитела с применением гибр и-

домной битехнологии. Гибридома – это клеточный гибрид, возник-

ший в результате слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с

иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические монокло-

нальные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих “родите-

лей”: способность к неограниченному росту, характерную для опухо-

левой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую им-

мунному лимфоциту. Цоликлоны анти-А и анти-В продуцируются

двумя различными гибридомами. Они предназначены для определе-

ния группы крови системы АВО человека взамен стандартных изог е-

магглютинирующих сывороток. Цоликлоны анти-А (красного цвета) и

анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и в лиофили-

зированной форме в ампулах по 20,50,100,200 доз с растворителем, при-

ложенным к каждой ампуле по 2,5, 10,20 мл соответственно. Лиофилизи-

рованный порошок разводят изотоническим раствором хлористого натрия

непосредственно перед исследованием. Для каждого определения группы

крови применяют по одной серии реагента анти-А и анти-В.

Материальное оснащение: цоликлоны анти-А и анти-В, изото-

нический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки

или предметные стекла, пипетки, песочные часы, резиновые перчатки,

маска, очки, клеенчатый передник.

Методика выполнения:

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для

обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Убедиться в пригодности цоликлонов, донорской крови.

3. На тарелке написать Ф. И. О. донора и реципиента.

4. Вскрыть ампулы с цоликлонами, растворителями, смешать

все с помощью отдельных шприцев, разлить цоликлоны во флаконы с

пипеткой (анти-А – красный, анти-В – синий).

5. Взять кровь реципиента и донора.

6. В две лунки под соответствующими надписями: анти-А или

анти-В нанести по 1 капле (0,1мл) цоликлонов: в первую – цоликлон

анти-А, во вторую – цоликлон анти-В.

7. Отдельным концом стеклянной палочки или отдельной пи-

петкой для каждой лунки перенести каплю крови в 10 раз меньше

капли цоликлона с предметного стекла в лунку и смешать с каплей

цоликлона до гомогенного пятна.

8. Блюдце осторожно покачивать в течение 2,5 мин.

9. Оценить результат пробы без добавления изотонического

раствора натрия хлорида.

185

Оценка результатов:

- При отсутствии агглютинации с двумя цоликлонаи группа

крови 0(I) – первая.

- При наличии агглютинации с цоликлоном анти-А группа

крови А(II) – вторая.

- При наличии агглютинации с цоликлоном анти-В группа

крови В(III) – третья.

- При наличии агглютинации с двумя цоликлонами группа

крови АВ(IV) – четвертая.

37 ПРОБА НА ИНДИВИДУАЛЬНУЮ СОВМЕСТИМОСТЬ

Для пробы на индивидуальную совместимость используют сыворотку (не плазму!) крови реципиента и консервированную кровь (эритроциты, лейкоциты) донора. Сыворотка больного должна быть свежей, полученной в тот же день или накануне. Для получения сыворотки у больного берут 4—5 мл крови из вены в чистую пробирку без стабилизатора. После свертывания крови от сгустка отделяется сыворотка, которая служит для проведения проб на совместимость.

Первая проба на совместимость по группе системы АВО производится при комнатной температуре. На тарелку наносят 2 капли сыворотки крови больного, туда же добавляют маленькую каплю донорской крови в соотношении 1:10 и перемешивают покачиванием или стеклянной палочкой. При отсутствии агглютинации через 5 минут (не более!) надо считать, что кровь совместима. Если появляется агглютинация, то кровь донора несовместима с кровью больного и не должна быть ему перелита.