Для обнаружения кумаринов в растениях и сырье используются лактоновые свойства кумаринов, их способность флуоресцировать при ультрафиолетовом освещении и давать окрашенные растворы со специальными реактивами, микросублимацию и хроматографический анализ экстрактов сырья.

На пластинку "Силуфол" или хроматографическую бумагу наносят исследуемые экстракты и помещают в хроматографическую камеру с системой, указанной в НД на исследуемое сырье. Хроматограммы после высушивания просматривают в УФ-свете. Флуоресцирующие пятна кумаринов отмечают простым карандашом и хроматограммы обрабатывают щелочью. После этого их высушивают в сушильном шкафу при t=120°С и вновь просматривают в УФ-свете. Затем хроматограмму обрабатывают диазотированным сульфаниламидом, от действия которого кумарины в зависимости от структуры окрашиваются в оранжевый, красно-оранжевый, фиолетовый цвета.

В некоторых случаях после просматривания хроматограммы в УФ-свете ее обрабатывают реактивом Драгендорфа (BiI₃ в KI) или парами иода. Кумарины проявляются в виде пятен, окрашенных в коричневый цвет.

Качественное определение

Около 2 г измельченного сырья (плоды амми большой, пастернака посевного, корни горичника, трава донника и др.) заливают 20 мл. этилового спирта и кипятят в течение 15 мин на водяной бане с обратным холодильником. Извлечение охлаждают и фильтруют, далее проводят качественные реакции.

1. К 3-5 мл спиртового извлечения в пробирке прибавляют 10 капель 10% раствора КОН в метиловом спирте и нагревают в течение 5 мин. на кипящей водяной бане (при наличии кумаринов раствор желтеет). В пробирку прибавляют 5 капель свежеприготовленного диазореактива (диазотированная сульфаниловая кислота). При наличие кумаринов раствор приобретает окрашивание от коричнево-красного до вишневого.

2.  К 3-5 мл спиртового извлечения добавляют 10 капель 10% спиртового раствора КОН и нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин. Затем добавляют 5-10 мл дистиллированной воды, хорошо перемешивают и добавляют по каплям 10% раствор соляной кислоты до кислой реакции. При наличии кумаринов в сырье наблюдается помутнение или выпадение осадка в зависимости от содержания кумаринов (лактонная проба).

Количественное определение

В основу количественного определения кумаринов берется то или иное специфическое свойство кумаринов.

1) Способность лактонного кольца кумарина к обратимому замыканию и размыканию в зависимости от рН среды используется в гравиметрическом методе определения суммы кумаринов в растительном сырье.

2) Специфическое отношение кумаринов к щелочи лежит в основе метода нейтрализации (обратное титрование), которое применяется как для определения суммы кумаринов, так и для индивидуальных компонентов.

3) Хорошо разработаны колориметрические методы количественного определения как кумарина, так и суммы его производных в растениях. В основе этих методов лежит способность кумаринов давать устойчивые красно-пурпуровые растворы с диазотированным п-нитроанилином и сульфаниловой кислотой в щелочной среде.

Калибровочная прямая строится по одному из известных соединений.

Для количественного определения кумаринов применяются спектрофотометрические методы. В основу этих методов положено изменение оптической плотности растворов кумаринов при длине волны максимума поглощения в УФ-области того или иного кумарина в зависимости от концентрации на основе удельных показателей поглощения. Если колориметрическим и спектрофотометрическим методам предшествует хроматографическое разделение на бумаге или слое сорбента, методы называются хроматоколориметрическими и хроматоспектрофотометрическими соответственно.

Количественное определение кумаринов проводят также флуориметрическим и полярографическим методами. Последний применяется для анализа готовых лекарственных форм, содержащих фуранокумарины.

Биологические свойства

Многие природные кумарины являются биологически активными веществами и оказывают разнообразное действие на организм человека. Повышенный интерес к изучению производных кумарина появился с обнаружением антикоагулирующего действия 4-оксикумарина.

Особенно это выражено у дикумарола и его синтетических аналогов, которые применяются для лечения тромбозов.

ДИКУМАРОЛ

Многие фурокумарины (псорален, бергаптен, ксантотоксин и др.) обладают фотосенсибилизирующей активностью, т.е. повышают чувствительность кожи к ультрафиолетовым лучам, при этом наблюдаются интенсивная пигментация кожи и сильные ожоги. Это свойство фурокумаринов используют для лечения витилиго (лейкодермии). Предполагают, что фурокумарины ускоряют образование пигмента меланина, причем ответственным за это действие являются фурановое ядро. Производные фурокумаринов и пиранокумаринов обладают спазмолитическим и коронарорасширяющим действием. Наиболее активны из них виснадин, самидин, дигидросамидин. У куместрола и близких ему по структуре соединений отмечена значительная эстрогенная активность (стимулируют развитие и функцию женских половых органов, нормальный рост молочных желез). У кумаринов выявлена антимитозная активность, которая послужила толчком к изучению их противоракового действия.

Некоторые кумарины (эскулин, эскулетин) обладают Р-витаминной активностью. Ряд кумаринов и фурокумаринов обладает бактериостатической активностью (остановка размножения бактерий), антигрибковой активностью. Некоторые кумарины обладают инсектицидными, аминокумарины – антибактериальными свойствами.

Кумарины и фурокумарины являются ядами для рыб и моллюсков, поэтому первые из открытых кумаринов – бергаптен, остол и др. были названы рыбными ядами.