Поможем в ✍️ написании учебной работы

Имя

Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

Выберите тип работыЧасть дипломаДипломная работаКурсовая работаКонтрольная работаРешение задачРефератНаучно - исследовательская работаОтчет по практикеОтветы на билетыТест/экзамен onlineМонографияЭссеДокладКомпьютерный набор текстаКомпьютерный чертежРецензияПереводРепетиторБизнес-планКонспектыПроверка качестваЭкзамен на сайтеАспирантский рефератМагистерская работаНаучная статьяНаучный трудТехническая редакция текстаЧертеж от рукиДиаграммы, таблицыПрезентация к защитеТезисный планРечь к дипломуДоработка заказа клиентаОтзыв на дипломПубликация статьи в ВАКПубликация статьи в ScopusДипломная работа MBAПовышение оригинальностиКопирайтингДругое

Нажимая кнопку "Продолжить", я принимаю политику конфиденциальности

Б. Серологический

Реакция агглютинации по типу реакции Райта (с 10-12 дня заболевания,

диагностический титр 1:100)

 

В. Аллергический

Аллергическая проба с тулярином – накожная и внутрикожная

 (с 5-7 дня заболевания).

 

ВОЗБУДИТЕЛИ ИЕРСИНИОЗОВ

А. Иерсинии - возбудители псевдотуберкулеза (Yersinia pseudotuberculosis)

 и кишечного иерсиниоза (Y. enterocolitica)

Эти два вида иерсиний играют значительную роль в патологии че­ловека. Бактерии представляют собой полиморфные, не образующие спор грамотрицательные палочки, имеющие часто овоидную форму. Клетки в старых культурах окрашиваются неравномерно. Бактерии псевдотуберкулеза, взятые с влажного агара, могут иметь биполярную окраску, об­разуют капсулу, но с различной степенью выраженности. Оба вида бактерий обладают подвижностью, обусловленной наличием перитрихиальных жгутиков. Подвижность выявляется посевом в столбик полужидкого агара уколом, но только при 18-20ºC , при 37°C подвижность отсутствует.

Иерсинии неприхотливы к питательным средам, хорошо растут на обычных универсальных средах, способны активно размножаться в почве и воде. Оптимальная для роста температуре 30ºС, верхняя и нижняя границы роста составляют 43°С и 0-2°С соответственно, оптимум рН 6,6-7,8. На среде Эндо колонии имеют диаметр 0,1-0,2 мм, круглые выпуклые, блестящие с ровными краями, бесцветные (не ферментируют лактозы). Колонии возбудителя псевдотуберкулеза, находящиеся в R-форме, почти не отличаются от колонии возбудителя чумы (пигментированный центр и фестончатый "кружевной" край). Биохимические различия трех видов иерсиний представлены в таблице.

Все три вида иерсиний отличаются и по своим антигенным свойствам.

Возбудитель псевдотуберкулеза по O-антигенам разделяется на восемь групп (1-8) с 20 O-факторными антигенами (1-20). По O- и Н-антигенам (а-е) этот вид подразделяют на 13 сероваров и подсероваров (la, 1в, 2а, 2в, 2с, 3, 4а, 4в, 5а, 5в, 6, 7, 8).

Y. enterocolitica характеризуется антигенной неоднородностью по 0-антигену. В настоящее время различают более 30 сероваров этого вида. Большинство из них адаптированы к некоторым видам животных или широко распространены во внешней среде. Подавляющее большинство штаммов, выделенных от человека, принадлежат к сероварам 03 и 09, реже встречаются серовары 08, 05в и очень редко - серовары 01, 02, 06, 07, 010, 011, 013, 014, 015, 016, 017.

От людей, больных псевдотуберкулезом, чаще всего выделяются штаммы, относящиеся к серовару 1, реже 3 и 4.

В ходе эволюции у иерсиний закрепилась необходимость существования в двух средах обитания - внешней (сапрофитическая фаза жизни) и в организме теплокровных животных и человека (паразитическая фаза). Для осуществления паразитической стадии иерсинии должны проникнуть в организм теплокровного животного. Заражение возбудителем псевдотуберкулеза чаще всего происходит при употреблении в пищу инфицированных иерсиниями продуктов, хранившихся при пониженной температуре (4-12ºС) в холодильниках и овощехранилищах. В этих условиях бактерии в силу своей психрофильности могут размножаться и накапливаться в пищевых субстратах.

Иерсинии при пониженной температуре обладают высоким потенциа­лом клеточной и тканевой инвазивности и способны сохранять высокий уровень вирулентности, однако возбудитель может проникнуть в организм человека и через любые слизистые оболочки, вероятно, за счет неспецифических механизмов.

Основным источником иерсиниозов являются дикие и синантропные грызуны, домашние и сельскохозяйственные животные. Возможно заражение человека от человека. Штаммы Y. pseudotuberculosis выделены от 175 видов млекопитающих, 124 видов птиц, 7 видов рыб. Зараженные грызуны, животные и люди выделяют возбудителя с испражнениями и мочой, загрязняя воду, растения и другие объекты внешней среды. Таким образом, пищевой путь в передаче возбудителей псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза является ведущим. Заражение происходит в результате употребления в пищу сырых или недостаточно термически обработанных продуктов (мяса, мясных продуктов, молока, овощей, фруктов, зелени). Оба вида возбудителя способны существовать внутри растений (салата, гороха, овса и т.п.).

Заболевания, вызываемые иерсиниями, характеризуются полиморфностью клинических проявлений, поражением желудочно-кишечного тракта, тенденцией к генерализации, септикопиемии и поражению различных ор­ганов и систем.

Патогенные свойства иерсиний обоих видов, как и возбудителя чумы, во многом определяются наличием у них плазмид с молекулярной массой 42-48 МД и 82 МД. Плазмиды контролируют такие свойства возбудителей, как зависимость роста от наличия в среде кальция, способность синтезировать антигены вирулентности (v-w), пили адгезии, способность вызывать кератоконъюнктивит у морской свинки и т.п.

Микробиологическая диагностика иерсиниозов включает использование бактериологического метода и серологических реакций.

При бактериологическом методе исследуемый материал от больных (испражнения, кровь, слизь из зева), а также подозрительные продукты или воду засевают на среды Эндо, Плоскирева, Серова (индикаторную и дифференциальную) и инкубируют при 37°C в течение 48-72 часов.

Подозрительные колонии (мелкие бесцветные на средах Эндо и Плоскирева и окрашенные колонии двух различных форм на средах Серова) пересевают для получения чистых культур, которые идентифицируют по биохимическим признакам и окончательно типируют с помощью диагностических агглютинирующих сывороток.

Для серологической диагностики псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза используют развернутую реакцию агглютинации (по типу реакции Видаля) с соответствующими диагностикумами или реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА) с антигенным эритроцитарным диагностикумом. Положительными считают реакции при титре антител 1:400 и выше. Реакции рекомендуется ставить с парными сыворотками (с интервалом в несколько дней). Нарастание титра антител будет свидетельствовать о специфичности инфекционного процесса.

 

Б.  Табл. 1 Дифференциальные признаки биоваров Y. рestis

Признак	Биовары Y. pestis
	Y. antiqua	Y. mediaevalis	Y. orientalis
Ферментация:
глицерина	+	+	-
мелибиозы	-	+	-
Восстановление нитратов в нитриты	+	-	+
Область распространения:
Центральная Азия	+	-	+
Центральная Африка	+	-	+
Иран, Средняя Азия	-	+	+
Другие эндемичные регионы	-	-	+

 

В. Отечественная классификация вида Yersinia pestis (Саратов, 1985)

 

Y . pestis subsp . pestis                   - основной подвид

Y . pestis subsp . altaica       - алтайский подвид

Y. pestis subsp. caucasica            - кавказский подвид

Y. pestis subsp. hissarica             - гиссарский подвид

Y. pestis subsp. ulegeica     - улэгейский подвид

 

Г.  Особенности генетического контроля факторов

патогенности у возбудителя чумы

 

Контроль наиболее важных факторов патогенности возбудителя чу­мы осуществляется плазмидами, на которых локализованы гены вирулентности. Известны три плазмиды, контролирующие важнейшие факто­ры патогенности возбудителя: рYР (м.м.6 МД); рYТ (м.м. 60 МД) и рYV (м.м. 47 МД).

Плазмида рYР (6 МД) несет гены, определяющие синтез пестицина. фибринолизина и плазмокоагулазы.

Плазмида рYТ (60 МД) несет детерминанты, контролирующие синтез антигена фракции I и "мышиного" токсина.

Плазмида рYV (47 МД) ответственна за синтез антигенов v и w и термоиндуцибельных белков внешней мембраны, а также зависимость роста чумной палочки от наличия в среде ионов Са⁺⁺.

 

Д. Табл.2.  Основные различия между возбудителями чумы,

псевдотуберкулеза и кишечного иерсиниоза

Признак	Вид возбудителя
	Возбудитель чумы	Возбудитель псевдотуберкулеза	Возбудитель кишечного иерсиниоза
Подвижность	-	+	+
Лизис а) индикаторным чумным фагом	+	-	-
б) псевдотуберкулезным фагом	-	+	-
Рост на голодно-кислой среде	-	+	+
Ферментация: рамнозы	-	+	-
маннита	+	+	+
мальтозы	+	+	+
сахарозы	-	-	+
Наличие: уреазы	-	+	+
аденозиндезаминазы	-	+
плазмокоагулазы	+	-	-
фибринолизина	+	-	-
фракции 1	+	-	-
Вирулентность: в S-форме	-	+	+
в R-форме	+	-	-

 

Е. Табл.3. Географические разновидности туляремийных бактерий

Расы	Ферментация глицерина	Наличие цитруллин-уреидазы	Патогенность для домашних кроликов и людей
Голарктическая раса (Европа, Азия) Francisella tularensis h olarctica	-	-	умеренно патогенна
а) японский вариант - var. japonica	+	-	“
Среднеазиатская раса - Francisella tularensis mediasica	+	+	“
Неарктическая, или американская раса - Francisella tularensis nearctica	+	+	Относительно высокая патогенность для кроликов и людей

 

Ж. Ландшафтные типы природных очагов туляремии

 

Пойменно-болотный, луго-полевой, степной, лесной, предгорно-ручьевой, тугайный (пойменно-пустынный) и тундровый.

З А Н Я Т И Е  2

Дата ______________

Тема: ООИ. Микробиологическая диагностика бруцеллеза и сибирской язвы

План занятия:

1. Приготовление, окраска и микроскопия препаратов-мазков из убитых культур бруцелл.

2. Бактериологическая диагностика бруцеллеза. Выделение гемокультуры (разбор).

3. Серологическая диагностика бруцеллеза. Реакция Райта. Регистрация результатов реакции Райта.

4. Ускоренный метод серологической диагностики бруцеллеза – реакция Хеддлъсона и др.

5. Аллергическая диагностика бруцеллеза. Постановка пробы Бюрне (разбор).

6. Знакомство с препаратами, применяемыми для диагностики, профилактики и лечения бруцеллеза (диагностикумы, бруцеллин, профилактические и лечебная вакцины).

7. Возбудитель сибирской язвы. Изучение морфологических и культуральных свойств. Приготовление и микроскопия мазков из чистой культуры авирулентной сибиреязвенной палочки.

8. Знакомство с иммунопрепаратами, применяемыми для диагностики, профилактики и лечения сибирской язвы (антраксин, вакцины, сыворотки).

Методические указания

1. Приготовление, окраска и микроскопия препаратов-мазков из убитых культур бруцелл

Приготовить, окрасить по Граму и промикроскопировать препарат из убитой культуры бруцелл. Обратить внимание на размеры микроорганизмов.

3. Серологическая диагностика бруцеллеза. Реакция Райта. Регистрация результатов реакции Райта

Поставить реакцию Райта с сывороткой больного бруцеллезом по классической схеме пробирочной реакции агглютинации (см. Часть I, занятие 16). Диагностический титр реакции Райта - 1:200.

Зарегистрировать в таблице результаты реакции Райта. Сформулировать и записать вывод: указывают ли результаты реакции на на­личие заболевания бруцеллезом у данного больного?

Табл. 1. Регистрация результатов реакции Райта

Разведения сыворотки	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800	Контроль
Результат реакции

 

Вывод:___________________________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

4. Ускоренный метод серологической диагностики бруцеллеза – реакция Хеддлъсона и др

 На стекле размечают карандашом 4 квадрата размером 3x3 см каждый. Микропипеткой наносят в квадраты капли сыворотки объемом 0,04, 0,02 и 0,01 мл, в последний квадрат одну каплю (0,03 мл) физиологического раствора (контроль). В каждую каплю другой микропипеткой добавляют по 0,03 мл бруцеллезного диагностикума. Перемешивают капли стеклянной палочкой пли петлей, начиная с контрольной капли и идя от меньших количеств сыворотки к большим. Слегка подогревая и покачивая стекло, наблюдают за появлением агглютинации, которая должна наступать в течение 5 минут.

Оценка реакции: агглютинация только в первой капле – реакция сомнительная; агглютинация в первой и второй каплях – реакция положительная; агглютинация во всех трех каплях – реакция резко положительная.

Примечание: Реакция Хеддльсона имеет только скрининговое, ориентировочное значение. В случае ее положительного результата необходимо ставить более надежные серологические реакции (Райта, РПГА, ИФМ) и/или аллергическую пробу Бюрне.

Зарисовать реакцию Хеддльсона с указанием доз сыворотки в каждой капле.

Табл. 2. Регистрация результатов реакции Хеддльсона

Номер капли	1	2	3	4
Доза сыворотки
Результат

 

Заключение ________________________________________________________

__________________________________________________________________

5. Аллергическая диагностика бруцеллеза. Постановка пробы Бюрне (разбор)

Реакция Бюрне. Техника постановки реакции:

а) стерильным тампоном, смоченным спиртом, тщательно дезинфицируют кожу на границе верхней и средней трети передней поверхности предплечья;

б) в шприц с делениями по 0,1 мл и о тонкой иглой набирают бруцеллин (обратить внимание на внешний вид, данные этикетки и срок годности препарата!);

в) держа шприц по возможности параллельно поверхности кожи, вводят иглу внутрикожно. Для этого необходимо держать иглу срезом вверх и толчкообразными движениями насаживать на нее кожу. Когда срез иглы скроется в коже, иглу поворачивают срезом вниз и, осторожно нажимая на поршень, вводят содержимое шприца в кожу (0,1 мл бруцеллина). На месте инъекции должен образоваться небольшой белый волдырь, указывающий на правильное введение препарата;

г) реакцию учитывают дважды: через 24 и 48 часов. В случае положительной реакции (наличие отека и гиперемии) миллиметровой линейкой измеряют размер отека (длина и ширина).

7. Возбудитель сибирской язвы. Изучение морфологических и культуральных свойств. Приготовление и микроскопия мазков из чистой культуры авирулентной сибиреязвенной палочки

Рассмотреть невооруженным глазом и под малым увеличением микроскопа колонии сибиреязвенных палочек (вакцинный штамм СТИ).

Приготовить, окрасить по Граму и зарисовать препарат из культуры авирулентного штамма сибиреязвенной палочки.

 

Рис. 1. Бруцеллы Окраска по Граму	Рис. 2. Возбудитель сибирской язвы Bacillus anthracis

Контрольные вопросы

1. Какие виды бруцелл вызывают бруцеллез у человека?

2. Каковы основные хозяева бруцелл соответствующих видов?

3. Каковы морфология и культуральные свойства различных видов бруцелл?

4. Какие свойства бруцелл используются для классификации их на вида и биотипы?

5. Какой из видов бруцелл наиболее патогенен для человека?

6. Каковы пути заражения бруцеллезом?

7. Какие микробиологические методы применяются для диагностики бруцеллеза?

8. Какой берется от больного материал для выделения возбудителя бруцеллеза? Как осуществляется выделение возбудителя из разного ма­териала?

9. Какими методами осуществляется серологическая диагностика бру­целлеза? Какова техника постановки серологических реакций?

10. Каково диагностическое значение реакции Хеддльсона?

11. Как производится оценка реакции Райта? Какова ее диагностиче­ская ценность?

12. Как ставится аллергическая проба Бюрне? Через сколько времени и как производится ее оценка?

13. С какого дня заболевания рекомендуется ставить реакцию Райта и пробу Бюрне?

14. Что такое бруцеллин и как его получают?

15. Как производится специфическая профилактика бруцеллеза? Как производится отбор лиц, подлежащих специфической вакцинации?

16. Какие категории работников подвергаются специфической профилактике в первую очередь?

17. В чем заключается принцип вакцинотерапии бруцеллеза?

18. Какова методика постановки реакции Кумбса? (см. Часть I, занятие 16).

19. Каковы морфология, культуральные свойства и устойчивость во внешней среде возбудителя сибирской язвы?

20. Как дифференцируется сибиреязвенная палочка от антракоидов и псевдосибиреязвенных бактерий?

21. Какой материал берется для исследования при сибирской язве?

22. Какие микробиологические методы используются для диагностики сибирской язвы?

23. Как осуществляется проверка животного сырья на зараженность си­биреязвенными палочками?

24. Какой иммунопрепарат используется для специфической терапии си­бирской язвы и как он применяется?

25. Какие вакцины используются для профилактики сибирской язвы и как они применяются?

ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 2

МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА

А. Бактериологический

Б. Биологический

Материал: загрязненный или с низким содержанием бруцелл
Вводится морской свинке                                                                     по 1,0 мл подкожно                                                                            в паховую область
Через 30 дней		Посев материала из органов и лимфатических узлов на питательные среды для выделения чистой культуры
Проба Бюрне	Реакция Райта

В. Серологический

Для диагностики бруцеллеза используются следующие серологические реакции:

А. Для обнаружения антител

1. Реакция Райта (титр антител определяют в международных единицах - МЕ. Диагностическое значение имеет титр антител более 200 МЕ/мл.

2. Реакция Кумбса (для определения неполных антител).

3. Ускоренные реакции: Хеддльсона, роз-бенгал, латекс-агглютинация, непрямая реакция гемолиза (эритроциты сенсибилизируют липополисахаридом бруцелл, добавляют сыворотку больного. Антиген соединяется с антителом и в присутствии комплемента происходит лизис эритроцитов), реакция иммунофлуоресценции (непрямой метод на предметном стекле).

4. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА).

5. Иммуноферментный метод (ИФМ – лунки сенсибилизируют антигеном).

6. Реакция связывания комплемента.

7. Опсоно-фагоцитарная реакция (ОФР) – прогностическое значение.

 

Б. Для обнаружения антигена

1. Реакция агрегат-гемагглютинации.

2. Иммуноферментный метод (луночки сенсибилизируют антителами к родоспецифическому антигену бруцелл).

3. РПГА с использованием эритроцитарного диагностикума с моноклональными антителами к родоспецифическому антигену бруцелл.

4. Реакция коагглютинации.

Кроме того, для быстрой диагностики бруцеллеза используют ПЦР.

Г. Аллергический - проба Бюрне

МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ

А. Бактериологический