Предварительная обработка 6%-ной серной кислотой
и отмывание физиологическим раствором
Посев на среды
Микроскопия
Окраска по Цилю-Нильсену
Цитратная кровь
(3-7 дней)
Определение чувствительности
к антибиотикам
В. Биологический
Материал: гной, мокрота, моча и т.д.
Предварительная обработка серной кислотой,
отмывание физиологическим раствором
Заражение морской свинки
Г. Аллергический – Проба Манту, Пирке.
А. Микобактерии, потенциально патогенные для человека:
| M. africanum | M. intracellulare | M. paratuberculosis |
| M. asiaticum | M. kansasii | M. scrofulaceum |
| M. avium | M. leprae | M. senegalense |
| M. bovis | M. lepraemurium | M. szulgai |
| M. chelone | M. malmoense | M. tuberculosis |
| M. farcinogenes | M. marinum | M. ulcerans |
| M. fortuitum | M. microti | M. xenopi |
| M. haemophilium | M.porcinum | M. vaccae |
Б. Схема идентификации микобактерий
Скорость роста субкультур
Медленно растущие Быстро растущие
(свыше 7 дней) (менее 7 дней)
Пигментообразование
Нехромогенные Хромогенные
Образование ниацина
Ниацинпозитивные Ниациннегативные
Фотоактивация пигментообразования
Нет эффекта Фотохромогены Скотохромогены
M ycobacterium tuberculorsis относится к медленно растущим нефотохромогенным ниацинпозитивным микобактериям.
Mycobacterium bovis относится к медленно растущим нефотохромогенным ниациннегативным микобактериям.
Для идентификаций других патогенных для человека микобактерий используются дополнительные тесты.
В. Методы дифференцирования истинных туберкулезных бактерий
от потенциально патогенных и сапрофитных микобактерий
|
| Микобактерии | ||
| туберкулезные | потенциально патогенные | сапрофитные | |
| Корд-фактор (трегалозодимиколат) | + | – | – |
| Каталазная проба | – (±) | ++ | ++ |
| Отношение к красителям | адсорбируют | не адсорбируют | не адсорбируют |
| Вирулентность для морских свинок и кроликов | + | – | – |
| Ниациновая проба | + | – | – |
З А Н Я Т И Е 7
Дата ______________
Тема: Итоговое контрольное занятие «ООИ, капельные инфекции, гноеродные кокки»
Вопросы к итоговому занятию
«ООИ, капельные инфекции, гноеродные кокки»
1. Особенности организации работы баклаборатории особо опасных инфекций.
2. Какие признаки (критерии) характерны для особо опасных инфекций?
3. Аллергены для диагностики особо опасных инфекций.
4. Значение реакции иммунофлуоресценции в диагностике ООИ.
5. Морфологические и тинкториальные особенности возбудителя чумы.
6. Культуральные свойства возбудителя чумы.
7. Подвиды Yersinia pestis.
8. Главные факторы патогенности возбудителя чумы
9. Плазмиды и факторы патогенности возбудителя чумы.
10. Эпидемиология чумы.
11. Пути и способы заражения человека чумой.
12. Основные клинические формы чумы, материал для МБ диагностики.
13. В каких случаях ставится аллергическая проба с пестином?
14. Характеристика иерсиний, патогенных для человека, отличия от палочки чумы.
15. Методы МБ диагностики чумы.
16. Специфическая профилактика чумы.
17. Морфологические и тинкториальные свойства бруцелл.
18. Культуральные свойства бруцелл.
19. Эпидемиология бруцеллеза.
20. Почему бруцеллез – особо опасная инфекция?
21. Патогенез бруцеллеза.
22. Микробиологическая диагностика бруцеллеза.
23. Методы МБ диагностики бруцеллеза.
24. Серодиагностика бруцеллеза.
25. Преимущества реакции Кумбса при серодиагностике бруцеллеза.
26. Серологические экспресс-реакции для диагностики бруцеллеза.
27. Реакция Хеддльсона и реакция Райта, их сущность.
28. Проба Бюрне, сущность, постановка, учет результатов.
29. Специфическая профилактика бруцеллеза.
30. Морфологические и тинкториальные свойства Bacillus anthracis.
31. Культуральные свойства возбудителя сибирской язвы.
32. Плазмиды и факторы патогенности возбудителя сибирской язвы
33. Отличия сибиреязвенной палочки и антракоидоз.
34. Эпидемиология сибирской язвы.
35. Патогенез сибирской язвы.
36. Основные клинические формы сибирской язвы.
37. Методы МБ диагностики сибирской язвы.
38. Бактериоскопическая диагностика сибирской язвы.
39. Выделение чистой культуры возбудителя сибирской язвы.
40. В каких случаях ставится аллергическая проба с антраксином?
41. Специфическая профилактика и лечение сибирской язвы.
42. Морфологические и тинкториальные свойства возбудителя туляремии.
43. Культуральные свойства возбудителя туляремии.
44. Факторы патогенности возбудителя туляремии.
45. Географические расы возбудителя туляремии.
46. Эпидемиология туляремии.
47. Патогенез туляремии.
48. Основные клинические формы туляремии.
49. Микробиологическая диагностика туляремии.
50. Особенности выделения чистой культуры возбудителя туляремии.
51. Аллергический метод диагностики туляремии.
52. Специфическая профилактика туляремии.
53. Культуральные свойства стафилококков.
54. Заболевания, которые вызывают стафилококки.
55. Межвидовые различия стафилококков.
56. Факторы патогенности стафилококков.
57. Методы микробиологической диагностики стафилококковых инфекций.
58. Выделение чистой культуры стафилококков.
59. Для чего и как проводят фаготипирование?
60. Какие экзотоксины продуцируют стафилококки?
61. Ферменты защиты и агрессии стафилококков.
62. Факторы патогенности стафилококков, влияющие на процесс фагоцитоза.
63. Как определяют гиалуронидазную активность?
64. Мембраноповреждающие токсины, разновидности, механизм действия.
65. Свойства стафилококковых энтеротоксинов.
66. Как у стафилококков определяют наличие плазмокоагулазы?
67. Методы определения чувствительности к антибиотикам
68. Классификация стрептококков по росту на кровяном агаре.
69. Культуральные свойства стрептококков.
70. Выделение чистой культуры пиогенных стрептококков.
71. Какие заболевания вызывают стрептококки?
72. Серологическая классификация стрептококков.
73. Факторы патогенности стрептококков.
74. Какие стрептококки вызывают скарлатину?
75. Патогенез скарлатины.
76. Особенности иммунитета при скарлатине.
77. Патогенез ревматизма.
78. Факторы патогенности стрептококков.
79. Морфология пневмококков.
80. Правила взятия и пересылки материала при подозрении на менингококковую инфекцию.
81. Эпидемиология менингококковых инфекций.
82. Культуральные свойства менингококков.
83. Методы микробиологической диагностики менингококковых инфекций.
84. Формы менингококковых инфекций.
85. Патогенез менингококковых инфекций.
86. Какие заболевания вызывают пневмококки?
87. Бактериологическая диагностика менингококковых инфекций.
88. Бактериоскопическая диагностика менингококковых инфекций.
89. Серологическая классификация менингококков.
90. Иммунологическая диагностика менингококковых инфекций.
91. Специфическая профилактика менингококковых инфекций.
92. Отличия пневмококков от других стрептококков.
93. Факторы патогенности менингококков.
94. Какие заболевания вызывают гонококки?
95. Морфологические, тинкториальные, культуральные свойства гонококков.
96. Бактериоскопическая диагностика гонореи.
97. Бактериологическая диагностика гонореи.
98. Серологическая диагностика гонореи.
99. Иммунитет при гонорее.
100. Для каких целей используют гоновакцину.
101. Факторы патогенности гонококков.
102. Эпидемиология гонококковых инфекций.
103. Морфологические и тинкториальные свойства дифтерийной палочки.
104. Культуральные и биохимические свойства дифтерийной палочки.
105. Факторы патогенности дифтерийной палочки.
106. Дифтерийный токсин, активация, структура, механизм действия.
107. Генетический контроль синтеза дифтерийного токсина.
108. Эпидемиология дифтерии.
109. Патогенез дифтерии.
110. Микробиологическая диагностика дифтерии.
111. Методы определения токсигенности дифтерийной палочки.
112. Специфическая профилактика и лечение дифтерии, препараты.
113. Основные свойства возбудителя коклюша.
114. Факторы патогенности коклюшной палочки.
115. Эпидемиология и патогенез коклюша.
116. Микробиологическая диагностика коклюша.
117. Специфическая профилактика коклюша, препараты.
118. Морфологические и тинкториальные особенности туберкулезной палочки.
119. Классификации микобактерий по скорости роста и пигментообразованию.
120. Факторы патогенности туберкулезной палочки.
121. Свойства микобактерий, определяемые высоким содержанием липидов.
122. Эпидемиология туберкулеза.
123. Патогенез туберкулеза, строение бугорка.
124. Методы обогащения исследуемого материала при МБ диагностике туберкулеза.
125. Бактериоскопическая диагностика туберкулеза.
126. Бактериологическая диагностика туберкулеза, преимущества и недостатки.
127. Аллергический метод диагностики туберкулеза.
128. Специфическая профилактика и лечение туберкулеза.
129. Понятие о микобактериозах, их возбудители.
130. Основные свойства возбудителя проказы.
131. Эпидемиология и патогенез проказы.
132. Микробиологическая диагностика проказы.
З А Н Я Т И Е 8
Дата ______________
Тема: Микробиологическая диагностика брюшного тифа и сальмонеллезов
План занятия:
1. Изучение морфологических, культуральных и биохимических свойств бактерий сальмонелл.
2. Бактериологическое исследование крови брюшнотифозного больного. Посев крови на среду с желчью (разбор с демонстрацией).
3. Бактериологическое исследование испражнений брюшнотифозного больного: посев на среду обогащения и дифференциально-диагностические среды (разбор схемы).
4. Реакция Видаля. Постановка реакции агглютинации с O- и Н-диагностикумами. Регистрация результатов реакции Видаля (разбор с демонстрацией).
5. Разбор методов диагностики брюшнотифозного бактерионосительства.
6. Исследование пищевых продуктов на наличие возбудителей пищевых токсикоинфекций (разбор схемы).
7. Исследование пищевых продуктов на наличие энтеротоксигенного стафилококка и обнаружение стафилококкового энтеротоксина. Разбор методов.
8. Бактериологическое исследование испражнений больного при подозрении на кишечную инфекцию (начало). Посев испражнений на дифференциально-диагностические среды.
Методические указания
1. Изучение морфологических, культуральных и биохимических свойств бактерий сальмонелл.
Приготовить препараты-мазки из культур бактерий - возбудителей брюшного тифа, паратифа А, S . enteritidis и кишечной палочки, окрасить по Граму и промикроскопировать. Сравнить морфологию бактерий во всех препаратах и отметить морфологическое сходство их друг с другом. Препараты зарисовать.
Изучить и записать в тетрадь биохимические свойства бактерий тифо-паратифозной группы по готовым демонстрационным наборам посевов на среды "пестрого ряда".
2. Бактериологическое исследование крови брюшнотифозного больного. Посев крови на среду с желчью (разбор с демонстрацией).
Взятая из вены больного кровь в количестве 8-10 мл для выделения гемокультуры засевается в среду с желчью (МПБ + 10 процентов желчи + 1 процент глюкозы + индикатор Андреде).
Посев крови производят непосредственно у постели больного в десятикратный (по отношению к количеству крови) объем питательной среды. Посев помещают в термостат при 37°C, а на следующие сутки производят высев на скошенный агар и на дифференциально-диагностические среды (Левина, Плоскирева, висмут-сульфит-агар, Эндо).
Отметить изменения, наступившие в среде Рапопорт в результате роста возбудителей брюшного тифа (покраснение среды) и паратифов или других возбудителей сальмонеллёзов (покраснение среды и наличие газа). Пересев культуры бактерий со среды Рапопорт на скошенный МПА и среды Плоскирева, Эндо, Левина (демонстрация).
Окончательная идентификация проводится по биохимическим свойствам и антигенным свойствам – агглютинация на стекле с монорецепторными Vi-, О- и Н-сыворотками.
| Рис.1. Возбудитель брюшного тифа Salmonella typhi | Рис.2. Возбудитель паратифа А S . paratyphi А |
| Рис.3. Возбудитель паратифа В S . enteritidis | Рис.4. Кишечная палочка Escherichia coli |
3. Бактериологическое исследование испражнений брюшнотифозного больного: посев на среду обогащения и дифференциально-диагностические среды (разбор схемы).
Испражнения брюшнотифозного больного засевают на одну из сред обогащения (среда магниевая, среда с селенитом) и одновременно на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Плоскирева, Левина или висмут-сульфит-агар. Через 8-10 часов инкубирования в термостате со среды обогащения также производится посев на плотную дифференциально-диагностическую среду.
На чашках с посевами находят бесцветные прозрачные колонки, типичные для возбудителей тифо-паратифозной группы. Половину колонии используют для приготовления препарата-мазка (окрасить по Граму), оставшуюся часть колонки засевают на среды "пестрого ряда", среду Пешкова (для исследования подвижности) и на скошенный МПА.
Окончательная идентификация проводится по биохимическим свойствам и антигенным свойствам – агглютинация на стекле с монорецепторными Vi-, О- и Н-сывоторками.
Табл.1. Биохимические свойства бактерий тифо-паратифозной группы
| Вид микроба | Лактоза | Глюкоза | Маннит | Сахароза | Молоко | Индол | Серо-водород | Подвиж-ность |
| S. typhi | ||||||||
| S. paratyphi А | ||||||||
| S. enteritidis | ||||||||
| Eschrichia coli |
4. Реакция Видаля. Постановка реакции агглютинации с O - и Н-диагностикумами. Регистрация результатов реакции Видаля (разбор с демонстрацией).
Реакцию Видаля ставят с O-Н-диагностикумами для обнаружения О- и Н-антител в крови больного брюшным тифом. Для этого необходимо взять два ряда пробирок по 6 шт. и в каждом из них приготовить последовательно разведения сыворотки больного в физиологическом растворе по следующей схеме:
| Номера пробирок | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Разведения сыворотки | 1:50 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | контроль антигена |
| Физиологический раствор | - | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Сыворотка больного в разведении 1:25 | 0,5 | 0,5 | - | - | - | - |
| Диагностикум O (H) | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Во второй пробирке сыворотку смешать с физиологическим раствором и 0,5 мл перенести в третью, снова перемешать и 0,5 мл смеси перенести из третьей пробирки в четвертую, а из четвертой - таким же способом в пятую. После перемешивания из пятой пробирки 0,5 мл смеси удалить в банку с раствором хлорамина.
В пробирки первого ряда добивать по 0,5 мл брюшнотифозного O-диагностикума, а в пробирки второго ряда - по 0,5 мл брюшнотифозного Н-диагностикума. Предварительные результаты реакции учесть после 2-часового инкубирования пробирок в термостате при 37ºC, а окончательные - на следующем занятии, после суточного выдерживания при комнатной температуре.
Произвести учет результатов реакции Видаля по четырехкрестной системе с "О"- и "Н"-диагностикумами. Результаты реакции и заключение записать в тетрадь.
Табл. 2. Результаты реакции Видаля
| Разведение сыворотки | 1:50 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | контроль |
| “O”-диагностикум | ||||||
| “H”-диагностикум |
Заключение_______________________________________________________________
__________________________________________________________________
6. Исследование пищевых продуктов на наличие возбудителей пищевых токсикоинфекций (разбор схемы)
Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной серологической классификации сальмонелл (демонстрация схемы).
8. Бактериологическое исследование испражнений больного при подозрении на кишечную инфекцию (начало). Посев испражнений на дифференциально-диагностические среды
Приготовить взвесь испражнений больного в физиологическом растворе в соотношении 1:10, профильтровать через ватно-марлевый фильтр и произвести посев взвеси на среду обогащения (магниевая среда) и на дифференциально-диагностические среды Плоскирева или Эндо и висмут-сульфит-агар. Поместить посевы в термостат.
Контрольные вопросы
1. Чем отличаются сальмонеллы брюшного тифа от сальмонелл паратифов А и В по биохимическим свойствам? Какова антигенная структура сальмонелл?
2. Какие микробиологические методы используются для диагностики брюшного тифа и паратифов?
3. Какой материал берется от больного для ранней диагностики брюшного тифа и как этот материал исследуется?
4. Почему при серологической диагностике брюшного тифа используются "О" и "Н" - антигены?
5. Какое значение имеет исследование испражнений при брюшном тифе и паратифах?
6. Каков порядок исследования испражнений?
7. Как производится идентификация выделенных чистых культур возбудителей брюшного тифа?
8. Как определяются серологическая группа и серотип сальмонелл?
9. Как осуществляется фаготипирование брюшнотифозных бактерий и в чем заключается значение этого метода?
10. Какой материал берется для бактериологического исследования на брюшнотифозное бактерионосительство и каким образом он исследуется?
11. Как осуществляется серологическая диагностика брюшнотифозного бактерионосительства?
12. Каковы особенности патогенеза брюшного тифа?
13. Какие существуют иммунопрепараты для профилактики брюшного тифа и паратифов?
14. В чем суть иммунофлуоресцентного метода диагностики брюшного тифа?
15. Какие микроорганизмы чаще всего вызывают пищевые токсикоинфекции?
16. Какие условия способствуют возникновению пищевых токсикоинфекций?
17. Какие сальмонеллы чаще всего оказываются возбудителями пищевых токсикоинфекций?
18. Каковы морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства сальмонелл - возбудителей пищевых токсикоинфекций?
19. Каковы особенности патогенеза пищевых токсикоинфекций?
20. Какие микробиологические методы используются для диагностики пищевых токсикоинфекций?
21. Что подлежит исследованию при пищевых токсикоинфекциях?
22. На какие питательные среды следует сеять материал при пищевых токсикоинфекциях?
23. Как производится идентификация сальмонелл - возбудителей пищевых токсикоинфекций?
24. Как производится исследование пищевых продуктов на наличие условно патогенных микробов кишечной группы?
25. Как производится исследование пищевых продуктов на наличие стафилококка?
26. Как обнаруживается стафилококковый энтеротоксин?
27. Какие формы сальмонеллезов бывают у животных?
28. Каковы эпидемиологические особенности пищевых токсикоинфекций?
29. Каковы меры предупреждения пищевых токсикоинфекций?
30. Что такое спорадический сальмонеллез и каковы особенности его эпидемиологии?
ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 8
Дата: 2019-03-05, просмотров: 219.
