Полученный центрифугат или фильтрат стафилококковой культуры прогревают в кипящей водяной бане в течение 30 минут и вводят кошкам в вену уха или бедренную вену в количестве 0,5 мл на 1 кг веса. Наличие рвоты и поноса или только рвоты, наступившей в сроки от 30 минут до 3 часов, указывает на присутствие энтеротоксина.
А. Характеристика семейства Enterobacteriaceae
Короткие, не образующие спор палочки с закругленными концами, перитрихи или неподвижные, образующие или не образующие капсулу, грамотрицательны, оксидазонегативны (отсутствует цитохромоксидаза), но каталазопозитивны, ферментируют глюкозу (и другие углеводы) с образованием кислоты или кислоты и газа, как правило, не обладают протеолитической активностью, факультативные анаэробы или аэробы, не требовательны к питательным средам, место обитания – кишечный тракт и/или дыхательные пути, фекально-оральный (иногда – воздушно-капельный) путь передачи, восстанавливают нитраты в нитриты, хемоорганотрофы.
Б. Для фаготипирования брюшнотифозных бактерий, содержащих Vi-антиген, выпускается набор типовых брюшнотифозных Vi -фагов в ампулах с указанием рабочих разведений. Vi-I-фаг - универсальный, лизирует все культуры бактерий, содержащие Vi-антиген, Vi-II- фаг - лизирует только те штаммы, на которых он пассировался. Этот фаг подразделен на типы, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита. Соответственно типовым фагам существуют фаготипы брюшнотифозных бактерий, которые имеют идентичные обозначения.
В природе циркулирует более сотни фаготипов возбудителя брюшного тифа. На территории нашей страны чаще всего встречаются фаготипы A, F2, EI, С, Е2.
Существуют системы фаготипирования возбудителей паратифа В и паратифа А.
В. Классификация пищевых отравлений
Г. Классификация сальмонелл (Salmonella)
Род сальмонелл включает свыше 2000 серовариантов.
Род Salmonella включает единственный вид S. enterica (ранее - S. choleraesuis) с семью основными подвидами: S. enterica, S. salamae, S. arizonae, S. diarizonae, S. houtenae, S. bongori, S. indica, которые различаются по ряду биохимических признаков (см. табл.).
| Основные биохимические признаки | Подвиды | ||||||
| S. enterica | S. salamae | S. arisonae | S. diarisonae | S. houtenae | S. bonhori | S . indica | |
| Лактоза | - | - | + | + | - | - | - |
| Салицин | - | - | - | - | + | ? | ? |
| Дульцит | + | + | - | - | - | + | × |
| Желатин | - | + | + | + | + | ? | ? |
| d-тартрат | + | - или× | - или× | - или× | - или× | - или× | + |
| Малонат | - | + | + | + | - | - | |
| KCN | - | - | - | - | + | + | - |
| Тест на β-галактозидазу | - | - или× | + | + | - | + | × |
Примечание: × - ферментация поздно.
З А Н Я Т И Е 9
Дата ______________
Тема: Микробиологическая диагностика дизентерии и эшерихиозов
План занятия:
1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств дизентерийных бактерий.
2. Исследование испражнений больного дизентерией - посев на среду Плоскирева. Пересев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда". Агглютинация культуры поливалентными и монорецепторными видовыми, типовыми и групповыми сывортками (разбор схемы).
3. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств диареегенных кишечных палочек.
4. Исследование испражнений больного эшерихиозом ребёнка - посев на дифференциально-диагностические среды. Пересев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда". Агглютинация культуры поливалентными и монорецепторными видовыми, типовыми и групповыми сыворотками (разбор схемы).
5. Бактериологическая диагностика кишечной инфекции (продолжение). Регистрация результатов посева, сделанного на прошлом занятии. Посев на «пестрый ряд», МПА, среду Пешкова.
Методические указания
1. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств дизентерийных бактерий
Приготовить препараты-мазки из культур разных видов шигелл, окрасить по Граму и промикроскопировать. Сравнить морфологию бактерий во всех препаратах и отметить морфологическое сходство их друг с другом. Препараты зарисовать. Изучить биохимические свойства дизентерийных бактерий по демонстрационным наборам сред "пестрого ряда". Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной классификации шигелл.
2. Исследование испражнений больного дизентерией - посев на среду Плоскирева. Пересев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда". Агглютинация культуры поливалентными и монорецепторными видовыми, типовыми и групповыми сывортками (разбор схемы)
Производят посев испражнений больного дизентерией на чашки с дифференциально-диагностической средой Плоскирева. Бактериальной петлей каплю испражнений нанести на пластинку бактоагара Плоскирева и тщательно рассевают штриховым способом. На следующий день находят колонии, подозрительные на дизентерийные (бесцветные, прозрачные). Часть колонии микроскопируют с окраской по Граму, а оставшуюся часть засевают на скошенный МПА, среду Ресселя, среду Пешкова для определения подвижности и среды "пестрого ряда". Затем идентифицируют по антигенным свойствам реакцией агглютинации на стекле, используя видовые, типовые и групповые поливалентные и монорецепторные сыворотки. Для эпидемиологических целей у шигеллы Зонне проводят фаготипирование, хемотипирование или колициногено-/колицинотипирование.
3. Изучение морфологии, культуральных и биохимических свойств диареегенных кишечных палочек
Приготовить препараты-мазки из культуры кишечной палочки, окрасить по Граму и промикроскопировать. Препарат зарисовать. Изучить биохимические свойства кишечной палочки по демонстрационному набору сред "пестрого ряда". Разобрать особенности антигенного строения и принципы современной классификации E . coli.
| Рис 1. Shigella sonnei | Рис. 2. Shigella flexneri | Рис.3. Escherichia coli | Рис.4. Микроскопия подозрительной колонии |
| Окраска по Граму | |||
4. Исследование испражнений больного эшерихиозом ребёнка - посев на дифференциально-диагностические среды. Пересев подозрительной колонии на МПА, среду Ресселя и среды "пестрого ряда". Агглютинация культуры поливалентными и монорецепторными видовыми, типовыми и групповыми сыворотками (разбор схемы)
Производят посев испражнений ребенка, больного эшерихиозом, на чашки с дифференциально-диагностическими средами Эндо и Левина. Диареегенная кишечная палочка ни по культуральным, ни по биохимическим свойствам не отличается от непатогенной, отличается наличием определенных факторов патогенности и принадлежностью к вполне определенным серогруппам и сероварам. Поэтому отбор подозрительных колоний со сред Эндо или Левина проводят по результатам реакции агглютинации на стекле с поливалентной ОКА-сывороткой (проверяют не менее 10 одинаковых колоний); колонию, давшую четкую агглютинацию, отсевают для накопления чистой культуры. Далее проверяют развернутые биохимические свойства и определяют принадлежность к серогруппе реакцией агглютинации на стекле живой (за счет К-антигена) и гретой (за счет О-антигена) культуры с поливалентными (ОКВ, ОКС, ОКD, ОКЕ) сыворотками. Принадлежность к серовару (серотипу) определяют в живой культуре с помощью Н-сывороток.
5. Бактериологическая диагностика кишечной инфекции (продолжение). Регистрация результатов посева, сделанного на прошлом занятии. Посев на «пестрый ряд», МПА, среду Пешкова
Найти на чашке с дифференциально-диагностической средой подозрительные лактозонегативные колонии, из части колонии приготовить препарат-мазок, окрасить по Граму и промикроскопировать. Оставшуюся часть колонии пересеять на скошенный МПА, среды «пестрого ряда» и среду Пешкова. Посевы поместить в термостат.
Контрольные вопросы
1. Какие микроорганизмы являются возбудителями дизентерии?
2. Какие принципы используют для классификации возбудителей дизентерии?
3. Как отличаются различные виды дизентерийных бактерий по биохимическим свойствам?
4. Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Зонне?
5. Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Флекснера?
6. По каким признакам бактерии вида Флекснера подразделяются на серовары и подсеровары?
7. Каковы особенности антигенного строения бактерий вида Бойда?
8. Каковы особенности патогенеза дизентерии?
9. Какие микробиологические методы используются для диагностики дизентерии?
10. Какой материал исследуется для выделения возбудителей дизентерии и на какие питательные среды его засевают?
11. Где в организме больного локализуется возбудитель дизентерии?
12. Как следует брать материал от больного дизентерией?
13. По каким признакам идентифицируют возбудителей дизентерии?
14. Каково различие между типовыми и групповыми диагностическими агглютинирующими дизентерийными сыворотками?
15. Для чего необходимо серологическое типирование возбудителей?
16. Какова методика кератоконьюктивальной пробы и каково ее значение?
17. Каковы методика и цель определения чувствительности дизентерийных бактерий к антибиотикам?
18. В каких случаях и как применяют дизентерийный бактериофаг?
19. В чем заключается сущность методов определения чувствительности бактерий Зонне к колицинам и типов колицинов, продуцируемых шигеллами?
20. Как ставится аллергическая проба Цуверкалова?
21. Чем обусловлена вирулентность дизентерийных бактерий?
22. Какие микроорганизмы являются основными представителями нормальной кишечной микрофлоры?
23. Какое значение имеет кишечная микрофлора для организма человека?
24. В каких случаях возникает дисбактериоз?
25. Какие препараты применяют для восстановления состава нормальной микрофлоры кишечника?
26. Почему кишечную палочку считают санитарно-показательным микроорганизмом при загрязнении внешней среды?
27. Что такое коли-титр и коли-индекс?
28. Каково антигенное строение кишечной палочки?
29. Как выделяют чистую культуру диареегенной кишечной палочки?
30. Какой антиген (O или К) определяют в реакции агглютинации с живой культурой?
31. Как обнаруживают специфический O-антиген у кишечной палочки?
32. По какому антигену окончательно судят о принадлежности бактерий к патогенному серовару?
33. Что собой представляют колицины и какое значение имеет определение их типа?
34. На какие категории и по каким признакам подразделяют диареегенные кишечные палочки?
35. Какими факторами патогенности обладают энтеротоксигенные кишечные палочки? Каков генетический контроль их синтеза?
36. Чем обусловлена патогенность энтеропатогенных кишечных палочек?
37. Чем обусловлена патогенность энтероинвазивных кишечных палочек?
38. Чем объясняется некоторое антигенное и патогенное сходство энтероинвазивных кишечных палочек и шигелл?
39. С чем связана патогенность знтерогеморрагических кишечных палочек?
40. Каков генетический контроль биосинтеза шигаподобных экзотоксинов у энтерогеморрагических вариантов кишечной палочки?
41. Каков механизм действия термостабильных и термолабильных энтеротокоинов?
42. Какова молекулярная структура энтеротоксинов?
43. Каковы основные способы заражения диареегенными кишечными палочками?
44. Какие категории диареегенных кишечных палочек чаше всего вызывают внутрибольничные вспышки?
45. Можно ли отличить колонии диареегенных кишечных палочек от колоний непатогенных кишечных палочек на дифференциально-диагностических средах? Если можно, то в каких случаях?
ПРИЛОЖЕНИЕ к ЗАНЯТИЮ 9
МЕТОДЫ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ДИЗЕНТЕРИИ
А. Бактериологический
Испражнения
Б. Аллергический
Внутрикожная проба с дизентерином (проба Цуверкалова).
Дата: 2019-03-05, просмотров: 347.
