1)В лунки планшета наносят большие капли плазмы исследуемой крови.

2)Рядом с каждой каплей плазмы последовательно наносят по небольшой капле стандартных эритроцитов групп 0(1), А(II), В(III).

3)Капли перемешивают покачиванием планшета.

4)Через 5 минут к каждой капле смеси добавляют по 1 капле физиологического раствора и учитывают результат.

Определение резус-фактора .

1)Экспресс-метод

-В качестве реагента применяется сыворотка под названием «антирезус», которая является универсальной для всех групп крови.

-Aнтигены резус - липопротеиды. Они очень активны и способны вызывать образование иммунных антител.

-Резус-антитела, будучи иммунными (неполными, моновалентными, блокирующими), могут фиксироваться к резус-положительным эритроцитам, не вызывая их склеивания. Они агглютинируют эритроциты только в присутствии коллоидных растворов, протеолитических ферментов или под действием специально приготовленной антиглобулиновой преципитирующей сыворотки.

-Неполные антитела относят к иммуноглобулинам класса G.

1)На дно сухой пробирки наносят 1 большую каплю универсального реагента антирезус, затем добавляют такую же каплю исследуемой крови.

2)После встряхивания пробирки производят перемешивание сыворотки антирезус и крови в течение 5 минут по стенкам пробирки, после чего добавляют 5 — 7 мл физиологического раствора. ( Чтобы исключить агрегацию красных клеток, в пробирку добавляют раствор изотонический NaCl и несколько раз переворачивают пробирку, чтобы содержимое перемешалось.)

3) Наличие агглютинации свидетельствует о присутствии резус-фактора.

После этого считывают результат.

- Если появились хлопья на фоне более светлой жидкости, Rh положительный,

- если хлопьев нет, жидкость окрашена равномерно в розовый цвет, Rh – отрицательный.

2) Методика определения резус-фактора

1)Берут 2-3 мл крови больного в сухую пробирку без стабилизатора.

2)Со дна пробирки набирают эритроциты в собственной сыворотке (5-10 %-я взвесь).

3)На чашку Петри наносят по 2 капли сыворотки антирезус 2-х серий и по 1-й капле крови реципиента, перемешивают стеклянной палочкой.

4)Чашку Петри ставят на водяную баню (45 °С) на 5-7 мин.

Результаты просматривают на свету на белом фоне.

-Если кровь реципиента агглютинируется - обеими сериями сыворотки антирезус, то она резус-положительная, а если не агглютинируется, то она резус-отрицательная.

В некоторых случаях не представляется возможным определение резус-принадлежности реципиента, тогда пользуются индивидуальной пробой на резус-совместимость крови донора и реципиента.

1)На чашку Петри наносят 2 капли сыворотки крови больного и маленькую каплю переливаемой крови, их смешивают и ставят на водяную баню (42-45 °С) на 10 мин.

2)Если наступила агглютинация, то кровь донора несовместима с кровью реципиента и ее переливать нельзя

С применением желатина

Эта методика основана на применении желатина (в виде раствора 10 %). Для тестирования используются и стандартные антирезусные реагенты, и цоликлоны.

1)В пробирку капают одну каплю крови (0,05 мл) или эритроцитов в виде взвеси в сыворотке (50 %).

2)Затем 2 капли подогретого заранее до жидкого состояния раствора желатина.

3)Далее 2 капли реагента, затем смешивают.

4)Пробирку ставят на пять-десять минут на водяную баню (47°C) или на полчаса в сухой термостат с такой же температурой.

5)Затем в пробирку добавляют физиологический раствор (5-8 мл), закрывают крышкой и осторожно поворачивают два-три раза, чтобы перемешать.

-Для определения наличия хлопьев содержимое пробирки осматривают невооруженным глазом на свет или через увеличительное стекло.

-При использовании желатина не происходит неспецифической агглютинации. После проведения такой пробы необходимы контрольные тесты:

со стандартными Rh+ эритроцитами;

со стандартными Rh- эритроцитами;

с исследуемой кровью (эритроцитами) и желатином.