-Помещение, где проводится определение группы крови, должно быть светлым, с температурой от 15 до 25 °С.

Способы определения группы крови

Групповую принадлежность крови по системе АВ0 определяют с помощью реакции агглютинации. В настоящее время используют три способа определения групп крови по системе АВ0:

• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток;

• с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов (перекрёстный способ);

• с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Моноклинальные антитела (ABO-титрующие: цоликлоны анти-А и анти-В) получаются при помощи генной инженерии. Их готовят в промышленных масштабах из крови стерильных мышей, поэтому исключается заражение гепатитом или СПИДом. Цоликлон анти-А -окрашивается в голубой цвет;

анти-В - в розовый.

1)Цоликлоны наносятся на планшет одной большой каплей (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А, анти-В.

2)Рядом наносится по одной маленькой (0,01 мл) капле исследуемой крови.

3)После смешивания реагентов и крови реакцию агглютинации наблюдают в течение 2,5 минут.

Оценка результатов:

-кровь Oαβ(I) группы - агглютинации нет ни с цоликлоном анти-A, ни с анти-B (эритроциты не содержат антигенов A и В);

-кровь Aβ(II) группы - агглютинация произошла только с цоликлоном анти-A (эритроциты содержат только антиген A);

-кровь Bα(III) группы - агглютинация произошла только с цоликлоном анти-B (эритроциты содержат только антиген B);

-кровь ABO(IV) - агглютинация наблюдается с обеими цоликлонами (эритроциты содержат оба антигена). В этом случае производится контрольное исследование дабы исключить аутоагглютинацию. Одна капля (0,1 мл) изотонического раствора хлорида натрия смешивается с каплей (0,01 мл) исследуемой крови - реакция агглютинации должна отсутствовать.

Определение групп крови с помощью стандартных сывороток.

1)В лунки планшета для определения групп крови последовательно наносят пипетками (разными!)  по одной крупной капле стандартной сыворотки групп 0(1), А(П), В(Ш) двух различных серий каждой группы.

2)Затем наносят в каждую лупку по капле исследуемой крови, в 5 — 10 раз меньшую сыворотки.

3)Сухими стеклянными палочками или путем покачивания планшета смешивают стандартные сыворотки и исследуемую кровь.

4)Через 5 минут оценивают результат. Результаты групп крови должны совпадать в обеих сериях сыворотки.

Оценка результатов изогемагглютинации:

 изогемагглютинация.

-При положительной реакции в смеси появляются мельчайшие красные зернышки склеивающихся эритроцитов.

-Зернышки сливаются в более крупные зерна, а последние в хлопья.

-Сыворотка почти обесцвечивается;

 при отрицательной реакции

- смесь в течение 5 мин остается равномерно окрашенной в розовый цвет и никаких зернышек не обнаруживается;

 при работе с 3-я сыворотками групп О(I), А(II), В(III) возможны 4 комбинации реакций:
- если все 3 сыворотки дали отрицательную реакцию, то есть смесь равномерно окрашена в розовый цвет - это О(I) группа крови;
- если отрицательную реакцию дала только сыворотка группы А(II), а сыворотки О(I) и В(III) дали положительную реакцию, то есть появились зерна - это А(II) группа крови;
- сыворотка группы В(II) дала отрицательную реакцию, а сыворотки группы О(I) и А(II) дали положительную - это В(III) группа крови.

- все 3 сыворотки дали положительные реакции - испытуемая кровь АВ(IV) группы. В этом случае проводится исследование с сывороткой АВ(IV) группы.

Обратите внимание! Капли исследуемой крови должны быть в 5-10 раз меньше капель сыворотки.

Ошибки изогемагглютинации.

1)Невыполнение агглютинации, где она должна быть и наличие агглютинации, где ее быть не должно.

-Это может быть при слабом титре сыворотки плюс плохая агглютинация эритроцитов.
Наличие агглютинации, где ее быть не должно - это псевдоагглютинация, когда кучки эритроцитов образуют "монетные столбики".

-Покачивание тарелки или добавление физраствора их разрушают.

2)Панагглютинация, когда сыворотка склеивает все эритроциты, в том числе и своей группы крови.

-К 5-й минуте признаки агглютинации исчезают.

3)Имеется еще так называемая холодовая панагглютинация, когда склеивание эритроцитов происходит из-за низкой температуры воздуха (ниже 15 °С) в помещении.

Во всех этих случаях проводят либо повторную реакцию, либо по стандартным эритроцитам.