Парциальные K-антигены и парциальные анти-K-антитела
Поможем в ✍️ написании учебной работы
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

 

Описано несколько пробандов с парциальной формой антигена K [276, 348]. Приведенные McDowell и соавт. [276] наблюдения убеждает в том, что лица

 

K +, так же как K −, могут вырабатывать анти-K-антитела, реагирующие со всеми образцами эритроцитов K +, за исключением собственных. Другие случаи [348] свидетельствуют о том, что большинство сывороток анти-K содержат парциаль-ные анти-K-антитела, не реагирующие с некоторыми эпитопами антигена K.

 

Skradski и соавт. [348] описали белого мужчину, эритроциты которого K +k + реагировали с 8 из 72 использованных анти-K- реагентов. С помощью адсорбции – элюции авторы показали , что эритроциты обследуемого адсорби-ровали анти-K-антитела, с которыми давали видимую агглютинацию и кото-рые затем обнаруживали в элюате. Анти-K-реагенты , с которыми не было ви-димой реакции, на эритроцитах не адсорбировались и в элюатах отсутствова-ли. Антигены k, Kp b , Js b, Ku, K11, K12, K13, K14, K18, K19 и К 22 на эритро-цитах обследуемого были выражены нормально, антигены Kp a, Kp c, Js a, UI a, Wk a и K23 отсутствовали. Три сестры обследуемого имели эритроциты K +, которые также несли на себе вариантную форму K. Парциальный антиген K, обнаруженный в этой семье, был слабее, чем на контрольных эритроцитах K + неродственных доноров.

 

Из 8 образцов анти-K-антител, которые реагировали с эритроцитами об-следуемого, 3 были поликлональные IgG, 4 – моноклональные IgM. Авторы точно не указали, что послужило иммуногенным стимулом для образова-ния реагирующих антител. У 6 лиц они, по-видимому, имели аллоиммунное


 

362


происхождение, поскольку были выявлены с помощью непрямой пробы Кумбса. У одной женщины титр анти-K-антител значительно повысился при беременности плодом K −.

 

При исследовании эритроцитов более 50 000 человек одной из 8 реагирую-щих сывороток не было обнаружено ни одного образца, который подобно эри-троцитам пробанда и трех его сестер реагировал с упомянутой сывороткой, но при этом не реагировал с другими сыворотками анти-K.

 

McDowell и соавт. [276] описали женщину с фенотипом K +k +, у которой имелись антитела, охарактеризованные авторами как K-подобные. Антитела не агглютинировали ни собственные эритроциты, ни эритроциты K +k + ее до-чери, но реагировали с эритроцитами K +k + ее сына и мужа. Элюат, снятый с эритроцитов сына после адсорбции ими сыворотки матери, содержал анти-K-антитела, которые по-прежнему не реагировали с эритроцитами самой женщи-ны и эритроцитами дочери. Выраженность антигена K на эритроцитах матери и дочери была существенно слабее, чем сына и мужа. Каких-либо аномалий дру-гих антигенов системы Kell на эритроцитах женщины, ее мужа и детей указан-ные авторы не отметили.

 

Исходя из представленных данных, можно сделать 2 основных вывода. Во-первых, парциальные антигены K, не выявляющиеся обычными сыво-

 

ротками анти-K, крайне редки. Напротив, парциальные анти-K-антитела встре-чаются часто. Исходя из данных Skradski и соавт. [348], 88 % сывороток анти-K (64 из 72) не содержат фракции антител, направленных к определенным эпито-пам K-антигена. В то же время практически все поли- и моноклональные анти-K-реагенты содержат антитела к иммуногенному, трансфузионно опасному эпи-топу K, который содержится, за редчайшим исключением, во всех эритроцитах K +, и выявляют его даже при слабой экспрессии.

 

Во-вторых, парциальные антигены K обусловлены редким вариантным ал-лелем KEL, который, будучи в гомозиготной форме, кодирует продукцию неко-торых, но не всех эпитопов нормального антигена K. Парциальные антигены K отличаются от нормального K не только качественно, но и количественно.

 

В последнее, носителей парциальных K-антигенов следует рассматривать как K-отрицательных реципиентов, но как K-положительных доноров.

 

Другие варианты K

 

Некоторые варианты антигена K не являются парциальными, но, несо-мненно, имеют отношение к этой категории антигенов как переходные фор-мы от K-дефицитных фенотипов, лишенных многих эпитопов Kell, к нормаль-ным Kell-фенотипам и далее к Kell-фенотипам, включающим качественно но-вые Kell-антигены. Очевидно существуют гены KEL, кодирующие продукцию уменьшенного количества копий нормального антигена K. Они не относятся к вариантным, а скорее к K-дефицитным формам, поскольку антиген K количе-ственно, а не качественно отличается от нормального K.


 

363


Hawley и соавт. [194] при попытке подобрать совместимую кровь больному, имеющему анти-K-антитела, выявили донора, эритроциты которого не агглюти-нировались сывороткой пациента, но адсорбировали анти-K-антитела, содержа-щиеся в его сыворотке. Исследование элюата подтвердило, что антитела имели специфичность анти-K. Эритроциты донора не давали видимой положительной реакции с другими сыворотками анти-K.

 

Kline и соавт. [226] описали ослабленную экспрессию антигена K, ассоции-рованную с нормальной экспрессией других антигенов Kell, у представителей 4 поколений одной семьи. Авторы выявили женщину, на эритроцитах которой антиген K был выражен очень слабо. Другие антигены (k, Kp b, Js b и Kx) име-ли нормальный уровень активности. У матери упомянутой женщины, дочери

 

В внука также обнаруживали слабый K. Эритроциты со слабо экспрессиро-ванным антигеном K адсорбировали анти-K-антитела из всех использованных анти-K-сывороток. Адсорбированные антитела присутствавали в элюатах.

 

Uchikawa и соавт. [374] обследовали 4 человек с фенотипом Kmod, у которых антиген K можно было выявить только с помощью метода адсорбции – элю-ции антител. Другие часто встречающиеся антигены Kell были слабо выраже-ны, k-антиген отсутствовал. Все 4 были гомозиготны по KEL-мутации, коди-рующей Thr 193 Arg. Авторы указывают, что подобно замене Thr 193 Met, ха-рактеризующей специфичность K, замена Thr 193 Arg не сопровождалась N-гликозилированием в позиции Asn 191. Ослабление других K-антигенов яви-лось результатом уменьшения количества Kell-гликопротеина.

 

Слабую экспрессию антигена K наблюдали Marsh и соавт. [271] у лиц с феноти-пом McLeod, а также Muller и соавт. [292] – у лиц, не имеющих антигена Gerbich, Ge: −2, −3. Экспрессия антигенов k и Kp a у лиц Ge: −2, −3 также была снижена.

По оценке Jaber и соавт. [211], эритроциты K +k + Ge: −2, −3 несут почти в 2 раза меньше участков антигена K, чем эритроциты K +k + Ge:2,3.

 

Имеются сведения о слабых формах антигена k, наблюдаемых у лиц с де-прессией других часто встречающихся Kell-антигенов (McLeod, Kmod и др.), а также у лиц с фенотипом K +k + Kp(a +b + ), у которых гены k и Kp a наследуются с Ge: −2, −3 в цис-позиции.

Слабая экспрессия антигена k обусловлена мутацией C 1388 T в экзоне 11 гена KEL, которая кодирует замену Ala 423 Val [231].

 

Описано транзиторное ослабление антигена K и других Kell-антигенов у не-которых больных (чаще инфекционных), у которых в период ослабления Kell-антигенов появлялись свободно циркулирующие и фиксированные на эритро-цитах аутоиммунные анти-K-антитела, выявляемые соответственно с помощью непрямой и прямой антиглобулиновой пробы [101, 192, 208, 308, 344, 380, 397] (см. Аутоантитела к Kell-антигенам).


 

364


Трансформация K − в K +, K + в K −

 

McGinniss и соавт. [278] описали пациента, эритроциты которого K −k + вследствие сепсиса приобрели K-подобный антиген и стали определяться как K +k +. Перелитые ему эритроциты K − также становились K +. Сепсис был вы-зван грамположительными бактериями Streptоcoccus faecium. Авторы обнару-жили, что эритроциты K −, инкубированные in vitro с лизатом Streptоcoccus fae-cium, преобразовывались в K +. Трансформация не происходила, если использо-вали взвесь неповрежденных бактерий.

 

При аутоиммунной гемолитической анемии, вызванной анти-K-аутоанти-телами, последние блокируют K-антигенные участки на эритроцитах, делая их недоступными для тестовых реактивов. Одновременно с продукцией аутоантител снижается экспрессия антигена K на поверхности клеток. Оба фактора в совокуп-ности приводят к тому, что пациента K + типируют как K −. В период ремиссии, когда аутоантитела исчезают и экспрессия антигена K восстанавливается, пациен-та вновь типируют как K + (см. Аутоантитела к антигенам Kell).

 







Химические свойства

 

Kell-гликопротеин хотя и является трансмембранной структурой, большая часть его в противоположность антигенам резус представляет внемембранное образование, далеко выступающее над поверхностью эритроцита. Считается, что он состоит из двух протяженных разветвленных цепей, соединенных меж-ду собой дисульфидными мостиками. Экстрацеллюлярная часть Kell-протеина ковалентно присоединена к Kx-протеину мембраны эритроцитов также дисуль-фидной связью [322, 341].

 

Kell-гликопротеин имеет 15 цистеиновых остатков в экстрацеллюлярном до-мене (см. рис. 5.1), и дисульфидные связи между цистеиновыми остатками уси-ливают несущий каркас полипептида. Разрушение дисульфидных связей суль-фгидрильными реагентами приводит к инактивации всех 24 Kell- и пара-Kell-антигенов, в частности антигены Kell разрушаются 6 % АЕТ (2-аминоэтилизо-тиоурониумбромидом) при pH 8 [109, 263, 289, 341], 100–2000 мМ ДТТ (дитио-трейтолом) [109]; меркаптоэтанол менее эффективен.

 

Обработка эритроцитов глицин-HCl-ЭДТА разрушает антигены Kell и Kell-антитела IgG (см. Judd [216]).

 

Антигены Js a и Js b инактивируются при существенно более низкой концен-трации дитиотрейтола – 2 мМ (Branch и соавт. [109]), поскольку, как полагают Lee и соавт. [240], 2 цистеиновых остатка, разделяемых ДТТ, расположены не-посредственно в участке аминокислотных замен, обусловливающих специфич-ность Js a и Js b (см. рис. 5.1).

 

Отщепляя гликопротеин Kell от экзофациальной части мембраны эритроци-тов, сульфгидрильные реагенты существенно увеличивают выраженность анти-гена Kx на поверхности эритроцитов, что может быть использовано для моде-лирования фенотипа Ko.


 

365


Подобно натуральным Ko-эритроцитам искусственные Ko-клетки, полу-ченные после обработки АЕТ, имеют выраженную экспрессию Kx-антигена (Advani [85], Branch и соавт. [111]). Искусственные Ko-эритроциты применяют для дифференцировки антител анти-Kell и анти-Kx. Для скрининга антиэритро-цитарных антител, включая анти-Kell, их не используют, так как АЕТ разруша-ет антигены системы Lutheran, Cartwright, Dombrock, LW (Landsteiner – Wiener), Knops, JMH (Jhon Milton Hagen) и другие.

 

Обработка эритроцитов протеолитическими ферментами по-разному сказы-вается на серологической активности антигенов Kell.

 

Ферменты растительного (папаин, фицин, бромелин) и животного происхо-ждения (трипсин) не только не уменьшают выраженность антигенов Kell, но, напротив, существенно ее усиливают (Branch и соавт. [111], Schenkel-Brunner [341], C.И. Донсков и др. [26]).

 

По нашим наблюдениям [26], обработанные 0,5–1 % раствором фицина эри-троциты K1 + непосредственно агглютинировались в солевой среде поликло-нальными сыворотками, содержащими неполные IgG анти-K1-антитела, подоб-но тому, как энзимированные эритроциты Rh + агглютинируются под действием неполных Rh-антител. В контрольных тестах (без обработки ферментом) непол-ные анти-K1-антитела не агглютинировали эритроциты K1 +.

 

Обработка эритроцитов трипсином в меньшей степени усиливала реакцию Kell-антител по сравнению с обработкой эритроцитов папаином.

 

Daniels [59], Judson и Anstee [218] отметили, что сочетанное воздействие на эритроциты смеси трипсина и α-химотрипсина или последовательная обработка эритроцитов одним ферментом, а потом другим (порядок не имеет значения) де-лает клетки нереактивными к антителам системы Kell. К такому же инактивиру-ющему Kell-антигены эффекту приводит сочетанная обработка эритроцитов ди-тиотрейтолом и папаином, активированным цистеином (реагент ZZAP) [110, 341].

 

Обработка эритроцитов только одним химотрипсином или только одной прона-зой давала различные результаты [142]. Осталось неясным, связаны ли вариации усиления или ослабления активности Kell-антигенов со свойствами использован-ных антител или со способом и интенсивностью энзимирования эритроцитов.

 

Parsons и соавт. [303] отметили, что некоторые моноклональные реагенты к антигенам системы Kell продолжали реагировать с энзимированными эритро-цитами, утратившими способность реагировать с человеческими поликлональ-ными антителами. Не исключено, что отдельные МКА анти-Kell могут одновре-менно проявлять слабую анти-Kx-активность.

 

Подобно большинству других мембранных белков Kell-протеин гликозили-руется. Как показали Redman и соавт. [321], дегликозилирование с помощью N-гликозидазы уменьшает его мол. массу до 79–80 кДа. О-гликаназа дает сла-бый эффект. Эти результаты свидетельствуют о том, что углеводная составляю-щая Kell-гликопротеина представлена N-гликанами.


 

 

366






Дата: 2019-02-24, просмотров: 222.