Моноклональные антирезус-антитела
Поможем в ✍️ написании учебной работы
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

 

Для производства моноклональных антител применяют метод гибридизации иммунных лимфоцитов (полученных от иммунизированных людей) с клетками мышиной миеломы или трансформации иммунных лимфоцитов вирусами. Вместо миеломных клеток мыши используют также лимфобластоидные клеточные линии человека. Гетеро- и аллогибридомы обладают способностью к самоподдержанию, присущей опухолевым клеткам, и одновременно способностью продуцировать ан-титела. Существует несколько способов гибридизации иммунных лимфоцитов:

 

––прямая гибридизация, когда лимфоциты иммунизированного лица сли-вают с клетками миеломы в расчете, что среди слившихся клеток мо-гут оказаться лимфобласты, продуцирующие моноклональные антите-ла. Этот способ менее эффективен, поскольку вероятность слияния опу-холевых и антителопродуцирующих клеток очень мала;

 

––реиммунизация in vitro, когда перед слиянием с миеломными клетками им-мунные лимфоциты выдерживают с эритроцитами, содержащими соответ-ствующий антиген, то есть иммунизируют их вторично. Этот прием позво-ляет повысить концентрацию лимфобластов или лимфобластоподобных­ клеток во взвеси иммунных лимфоцитов и таким образом увеличить веро-ятность получения требуемого гибрида-продуцента;

 

––трансформация иммунных лимфоцитов вирусом Эпштейна – Барр. Этот способ не требует использования мышиной миеломы. Эффект превраще-ния короткоживущих иммунных лимфоцитов в самоподдерживающуюся линию достигается тем, что встроившийся в геном клетки вирус придает ей способность к безудержной пролиферации.


 

294


Вирусную трансформацию лимфоцитов, придающую им опухолегенные, ма-лигнизирующие свойства, можно рассматривать как своеобразную гибридиза-цию ДНК лимфоцитов и ДНК вирусов. В результате такой гибридизации лим-фоциты или лимфобластоподобные клетки преодолевают апоптоз (управляе-мую гибель клеток) и становятся практически бессмертными.

 

Первые моноклональные анти-D-антитела были получены Bron и соавт. [184], Lowe и соавт. [450], Thompson и соавт. [652] и другими авторами [291, 402, 555]. Вскоре были получены антитела анти-C [651], анти-с [555, 651], анти-E [651], анти-e [182, 292, 651], анти-G [290, 651], анти-C W [653], анти-Rh17, анти-Rh29 и анти-Rh46 [580, 659].

 

Первые в России моноклональные антитела анти-D и анти-DC полу-чены в Центральном НИИ гематологии и переливания крови профессо-ром И.Л. Чертковым с сотрудниками [17, 18, 31].

 

И.В. Дубинкиным с соавт. получены штаммы гетерогибридом человек × мышь, продуцирующие моноклональные антитела к антигенам D, c, C W, E и др., пригод-ные для промышленного производства диагностических реагентов [51, 52, 53].

 

Для этого лимфоциты периферической крови доноров, продуцирующих соответ-ствующие антитела, гибридизировали с клетками мышиной миеломы X-63 и NS1.

Полученные антитела тестировали по панели стандартных эритроцитов ГНЦ РАМН (табл. 4.40). Класс иммуноглобулинов устанавливали с помощью мы-шиных моноклональных антител к иммуноглобулинам человека в реакции не-прямой иммунофлюоресценции. Титр антител определяли посредством реак-ции в солевой и коллоидной среде, а также непрямой реакции Кумбса в зависи-мости от принадлежности антител к тому или иному классу иммуноглобулинов (табл. 4.41).

 

Таблица 4.40

 



Протокол испытания моноклональных антител со стандартными эритроцитами

 

   

Реагирование моноклональных антител,

 
Эритроциты    

продуцируемых штаммом

   
  RhD-1 RhD-2 RhD-3 RhE-1 RhE-2 RhC W-1 Rhc-1
ccddee Kk +
ccDEE kk + + + + + +
CCDee kk + + +
CcC WDee kk + + + + +
DCcEe Kk + + + + + +
CcDEe KK + + + + + +

 

Оптимальным разводителем моноклональных антител анти-Rh, позво-лившим получать активные и специфичные тестовые реагенты, явились рас-творы с низкой ионной силой в комбинации с коллоидами полисахаридной природы. В настоящее время эти реагенты широко применяют в лечебно-профилактических учреждениях России.


 

295


          Таблица 4.41  
   

Дата: 2019-02-24, просмотров: 231.