Микроскопическое исследование
Поможем в ✍️ написании учебной работы
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

Оборудование:

- ламинарный бокс 2-го класса биологической безопасности;

- микроскоп бинокулярный с осветителем, набором объективов и окуляров;

- центрифуга лабораторная;

- кюветы и штативы-рельсы для фиксации и окрашивания мазков;

- прибор для покраски мазков (автоматический аналог);

- дозаторы переменного объема полуавтоматические (автоматические);

- спиртовка (газовая горелка);

- приборы и программы информационного обеспечения (компьютер, принтер, электронные информационные системы).

Реагенты :

- наборы реагентов для окраски микропрепаратов метиленовым синим, фуксином Циля, по Граму, Бури-Гинса и др.;

- синька Леффлера;

- специфические антипневмококковые сыворотки (I, II, III типов);

 

Средства дезинфекции:

Дезинфицирующие средства в концентрации и времени экспозиции указанны в инструкциях по их использованию.

 

 Лабораторная посуда и расходные материалы:

- стекла предметные и покровные стандартных размеров для микропрепаратов;

- петля микробиологическая (d=2 мм)

- чашки Петри;

- наконечники стерильные для дозаторов переменного объема;

- перчатки резиновые;

- контейнеры и емкости для обеззараживания медицинских отходов.

 

Классический метод окраски

На середину предметного стекла пипеткой (стерильным наконечником дозатора) наносят каплю крови, спинномозговой жидкости, БАЛ и другой материал. При необходимости материал можно центрифугировать и проводить микроскопию осадка. Мокроту предварительно помещают в стерильную чашку Петри, петлей захватывают гнойно-слизистый комочек, промывают его в физиологическом растворе, затем петлей или наконечником дозатора растирают на предметном стекле. Материал по поверхности стекла распределяют так, чтобы диаметр образующегося мазка соответствовал величине небольшой монеты. Стекло оставляют в горизонтальном положении и высушивают. Фиксацию препарата проводят над пламенем горелки или спиртовки.

Окраску мазка проводят ручным или автоматизированным методом. В качестве красителя используют водный раствор метиленового синего (или производят окраску по Граму).

В нативном препарате ликвора клетки S . pneumoniae чаще визуализируются ланцетовидной формы, располагаются парами, имеют капсулу (рис. 1.)

 

Рисунок 1. Окраска ликвора по Граму (в мазке видны ланцетовидные диплококки, окруженные бесцветной капсулой, встречаются единичные палочкоядерные нейтрофилы).

 

В мазке крови, имеющем голубой фон, хорошо видны окрашенные в темно-синий цвет лейкоциты и между ними (или внутри них) множество мелких диплококков. В мазках из других органов чаще встречаются мелкие не имеющие капсулы диплококки, что затрудняет их дифференциальную диагностику с другой бактериальной микрофлорой (прежде всего в образцах из «нестерильного» материала).

Бактериоскопия мазков из носо- и ротоглотки не проводится в связи с их недостаточной информативностью.

Метод Нейфельда или феномен набухания капсулы является модифицированным вариантом микроскопии и серологической диагностики S . pneumoniae. При его использовании на три покровных стекла наносят по одному комочку свежевыделенной мокроты (СМЖ, сыворотки крови) к каждому из которых прибавляют каплю неразведенной специфической антипневмококковой сыворотки (I, II, III типов) и каплю синьки Лёффлера. Капли тщательно смешивают, покрывают предметным стеклом с лункой, смазанной по краям вазелином. Через две минуты рассматривают висячие капли под микроскопом с иммерсионной системой. При положительном результате видно резкое увеличение капсул пневмококков. При отрицательном результате капсулы едва заметны. Реакция набухания специфична и не даёт положительного результата с другими капсульными бактериями.

По методу Бурри на край предметного стекла наносят каплю исследуемого материала и каплю туши. Смесь перемешивают и делают мазок, высушивают на воздухе, и, не фиксируя микроскопируют. Фон препарата — тёмно-дымчатый, микробные тела и их капсулы не окрашиваются.

Препарат, изготовленный по Бурри, можно фиксировать смесью Никифорова, отмыть водой, окрасить фуксином Циля, разведенным 1:3 в течение 3-5 минут. На тёмном фоне мазка выделяются неокрашенные капсулы, внутри которых находятся бактерии ярко малинового цвета (метод Гинса).

 

Дата: 2018-12-28, просмотров: 267.