- для микроскопического и бактериологического исследования

Бронхоскопия выполняется в условиях оксигенотерапии (ингаляция кислорода через носовые катетеры, с помощью маски Вентури либо маски с резервуаром). Если не удается обеспечить достаточную оксигенацию крови, бронхоскопия выполняется в условиях неинвазивной вентиляции легких. У больных на искусственной вентиляции легких процедура выполняется под общей анестезией в условиях миоплегии через адаптер респиратора, снабженный клапаном для бронхоскопа.

Бронхоальвеолярный лаваж

Для получения пробы бронхоальвеолярного лаважа:

- фибробронхоскоп проводят в бронх до его «заклинивания», после чего с помощью одноразовых шприцов через биопсийный канал бронхоскопа вводят отдельными порциям подогретый до 37^о С 0,9% раствор натрия хлорида и (общий объем от 5-20 до 100 мл).

- перед введением следующей порции физиологического раствора осторожно отсасывают введенной частью шприца в стерильный одноразовый контейнер с завинчивающейся крышкой или оставляют в закрытом шприце, предварительно удалив из него воздух (как правило, 50-70% введенного физиологического раствора находится в лаваже); с целью предотвращения коллапса альвеол отсасывание проводят при 50-80 мм рт. ст.;

- каждую отсасываемую порцию собирают в отдельную посуду;

- по окончании процедуры соединяют пробы, полученные из одного и того же участка. Пробы из разных участков (например, правая верхняя доля легкого и правая нижняя доля) следует соединять вместе только после консультации с лечащим врачом;

- в направлении указывают общий объем введенного физиологического раствора.

Для получения пробы соскоба с бронхов:

- через биопсийный канал бронхоскопа вводят телескопический двойной катетер с обработанным полиэтиленгликолем (другим соответствующим реактивом) дистальным концом для предотвращения контаминации пробы;

- собирают материал в стерильный контейнер или транспортную питательную среду

- доставляют материал в лабораторию.

Для получения биоптата легких:

- получают кусочки ткани легких размером 1-3 см2;

Хранение образца:

В стерильной емкости:

- при комнатной температуре + 20 + 25º С – до 2 ч.;

- при температуре холодильной камеры + 2 + 8º С – до 24 ч.;

*В транспортных питательных средах (тиогликолевая среда и пр.):

- при комнатной температуре + 20 + 25º С – до 24 ч.;

- при температуре термостатирования + 35 + 37º С – до 48 ч.;

* - Посев биологического материала в питательные среды позволяет оценить выросшие колонии без учета их количества в исследуемом образце.

- для исследования методом ПЦР

Сбор материала аналогичен предыдущему пункту. Материал, полученный при заборе соскоба с бронхов, и кусочки биоптата легких помещают в стерильную пробирку (типа Эппендорф или аналоги) с 0,3 мл стерильного физиологического раствора.

Хранение образца:

- при комнатной температуре + 20 + 25º С – до 6 ч.;

- при температуре холодильной камеры + 2 + 8º С – до 24 ч.;

- при температуре морозильной камеры - 16 - 20º С – до 1 мес.

Венозная кровь

- для микроскопического и бактериологического исследования

В связи с низкой информативностью микроскопия цельной крови при внебольничной пневмонии средней тяжести не проводится. При тяжелых формах пневмонии или подозрении на генерализованную инфекцию микроскопия осуществляется (см. ниже) для выдачи предварительного результата.

Пробы для микроскопического и бактериологического исследования получают пункцией из периферических вен (чаще локтевого сгиба). Собирают 2 пробы из двух сосудов. У больных, в комплекс терапии которым включены антибиотики, собирают 6 проб в течение 48ч. Сбор проб крови производят у постели больного или в процедурном кабинете. Для получения пробы необходимо:

- продезинфицировать участок кожи над выбранным для пункции сосудом и обработать кожу тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 1-2%-м раствором йода или другим дезинфицирующим средством (разрешенным к применению для этих целей в установленном порядке), круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 сек.;

- подождать, пока высохнет обработанный участок, не допускать пальпирование сосуда после обработки кожи перед введением иглы;

- с использованием иглы-бабочки у взрослых вводят во флакон с коммерческой питательной средой  10-30 мл крови, у детей - 0,5-3,0 мл, предварительно обработав колпачок флакона спиртом. При отсутствии коммерческих сред кровь забирают шприцем и переносят в транспортные среды, приготовленные в лабораторных условиях (не менее 2-х флаконов). В этом случае необходимо учитывать возможность контаминации образца посторонней микрофлорой.

- для первичной микроскопии снимают иглу-переходник с адаптера системы для забора крови, каплю крови свободно вытекающую из системы наносят на предметное стекло, оставляя до полного высыхания, стекло помещают в стерильный контейнер (чашку Петри). При использовании шприца кровь иглой наносят на предметное стекло только после посева во флаконы.

- после венепункции и посева крови для предотвращения возможного раздражения (ожога) с участка кожи пациента стирают остатки йода с помощью тампона, смоченного 70%-м этиловым спиртом.

Хранение образца:

*В коммерческой транспортной среде «для посева крови» (тип Oxoid, BD, Hi-Media и пр.):

- при комнатной температуре + 20 + 25º С – до 24 ч.;

- при температуре термостатирования + 35 + 37º С – до 48 ч.;

*В транспортных питательных средах, приготовленных в лаборатории (тиогликолевая среда, двухфазная среда и пр.):

- при комнатной температуре + 20 + 25º С – до 24 ч.;

- при температуре термостатирования + 35 + 37º С – до 48 ч.;

* - Посев биологического материала в указанные питательные среды позволяет оценить выросшие колонии без учета их количества в исследуемом образце.

- для исследования методом латекс-агглютинации

Кровь забирается натощак в вакуумные пробирки  диаметром 4-9 мл с активатором свертывания или конические центрифужные пробирки для получения сыворотки. 

Хранение образца:

В коммерческих вакуумных пробирках при комнатной температуре + 20 + 25º С – до 24 ч.

В конических центрифужных пробирках при комнатной температуре + 20 + 25º С – до 2 ч.

- для исследования методом ПЦР

Взятие венозной крови проводят натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены в положении сидя в пробирки с антикоагулянтом (ЭДТА).

Непосредственно перед венепункцией производится дезинфекция кожи в месте венепункции циркулярными движениями от центра к периферии дважды 70% раствором спирта или 1-2% раствором йода. Необходимо дождаться полного высыхания дезинфицирующего средства и провести манипуляцию, не касаясь места обработки кожи. После венепункции следует удалить оставшийся йод с поверхности кожи, чтобы избежать ожога.

После взятия крови пробирку следует несколько раз (6-8) плавно перевернуть вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась. Пробирку поместить в штатив.

Хранение образца:

В пробирке с антикоагулянтом:

- при комнатной температуре + 20 + 25º С – до 6 ч. (с количественной оценкой результата);

- при комнатной температуре + 20 + 25º С – до 12 ч. (для обнаружения нуклеиновых кислот без учета их количества);

- при температуре холодильной камеры + 2 + 8º С – до 24 ч. (качественный и количественный анализ);

Не допускается замораживание цельной крови!