Возбудитель, попав в организм, гематогенным и лимфогенным путем проникает в легкие и другие органы; в местах локализации возбудителя формируется гранулема, на коже и слизистых оболочках образуются язвы с изрытыми краями и саловидным дном; основным фактором вирулентности являются эндотоксины. Антигены возбудителя вызывают гиперчувствительность замедленного типа

       Методы диагностики

I. Бактериологический метод  

Морфология: для окрашивания возбудителя используют простой метод окраски (метиленовая синь), а также метод  Романовского-Гимза и по Граму.

Микрокартина: полиморфные палочки прямые или слегка изогнутые, длиной до 5 мкм; Гр. «–»; СПОРЫ «–»; КАПСУЛА «–» ПОДВИЖНОСТЬ «–»; ЗЕРНИСТОСТЬ, ИНОГДА БИПОЛЯРНОСТЬ.

Культивирование: посев на питательные среды: среды с глицерином МПА, МПБ, глицериновый картофель; Особенности выделения чистой культуры возбудителя сапа: аэробы; оптимальная температура 37^oC срок культивирования 18-20 часов. Элективные среды с фуксином и бриллиантовым зелёным.

Культуральные свойства: на жидких средах вызывает равномерное помутнение среды, образование пристеночного кольца и пленки; на плотных средах: слизистый серовато-белый налет, который приобретает коричневый цвет на глицериновом картофеле – вначале мелкие полупрозрачные с желтоватым оттенком колонии, затем они сливаются, образуя медообразный налет янтарно-жёлтого цвета. На глицериновом МПА – круглые плоские колонии с перламутровым блеском.

Биохимические свойства: расщепляют многие углеводы с образованием кислоты; ИНДОЛА не образуют, МПЖ разжижают.

Биопроба: заражают 2-3 самцов золотистых хомячков или самца морской свинки, вводя материал подкожно. У животных развивается орхит (воспаление яичек). Этот характерный эффект называют «эффектом Штрауса». При введении материала кошкам под кожу затылка - гибель через 7 суток.

  II Серологический метод: является основным методом и осуществляется путем постановки РСК, МФА, ИФА, РНГА. Также используется пластинчатая РА с сапным цветным антигеном.

Аллергическая диагностика нашла широкое применение в виде маллеинизации: маллеин (аллерген на сап) вводят (закапывают пипеткой) при проверке лошадей под нижнее веко глаза в конъюнктивальный мешок (окулярный метод). Положительная реакция характеризуется воспалением конъюнктивы и истечением гнойного секрета из внутреннего угла глаза.

Лечебных и профилактических препаратов нет.

Задания для самостоятельной работы:

1. Изучить морфологию возбудителя в атласе и зарисовать в практикуме.

2. Изучить характер роста возбудителя  на жидких, и плотных питательных средах по рисункам и фотографиям в атласе.

Контрольные вопросы:

1. Какие поражения вызывает возбудитель?

2. Расскажите, какой патологический материал направляют в лабораторию для исследования.

3. Опишите морфологию возбудителя.

4. Опишите характер роста возбудителя на питательных средах.

5. Какие дифференцирующие тесты применяют в лабораториях?

6. Какие биопрепараты применяют для диагностики сапа?  

Занятие № 6.
СИБИРСКАЯ ЯЗВА

Цель занятия:

1. Ознакомить студентов с правилами отбора и исследования патологического материала на наличие возбудителя.

2. Изучить морфологию микроорганизма.

3. Изучить характер роста возбудителя на жидких и плотных питательных средах.

Материалы и оборудование : Набор готовых красок во флаконах в штативе, йодированный спирт, раствор Люголя, малахитовая зелень, дистиллированная вода,  предметные стекла, фильтровальная бумага, бактериологические петли, пинцеты, пробирки с микробными культурами в штативе. Микроскопы. Пробирки и чашки Петри с характерным ростом возбудителя на жидких и плотных питательных средах.

Сибирская язва (антракс) - острая инфекционная болезнь животных и людей, ООИ (особо опасная инфекция). Заражение происходит при контакте, при ранениях, укусах насекомых, алиментарно, редко аэрогенно. Характеризуется признаками септицемии, интоксикации. Условно различают 3 формы сибирской язвы: кожная – образование отёков и карбункулов (нарывов с чёрным центром), кишечная и легочная (в этих случаях очаги воспаления образуются в кишечнике или лёгких, быстро возникает септицемия, что ведёт к гибели). Наиболее восприимчивы к сибирской язве К.Р.С., М.Р.С. верблюды, дикие травоядные, лошади. Собаки, кошки и другие плотоядные животные мало восприимчивы. У свиней чаще наблюдаетя атипичная хроническая форма в виде ангины.

 Материал для лабораторной диагностики. При подозрении на сибирскую язву (отсутствие трупного окоченения, вздутие трупа, истечения из естественных отверстий, несвертываемость крови). ТРУПЫ ВСКРЫВАТЬ НЕЛЬЗЯ - ПОЧВЕННАЯ ИНФЕКЦИЯ (т.к. споры возбудителя во внешней среде сохраняются столетиями).

1. При жизни у больного животного берут капли крови (из уха) для приготовления на предметных стёклах 10-12 толстых мазков с целью дальнейшего получения культуры и ее бактериологического исследования, а также несколько тонких мазков для окрашивания на капсулу (их фиксируют). Толстые мазки высушивают, складывают мазками внутрь (между ними кладут спички), герметично упаковывают, подписывают: «Мазки не фиксированные!».

2. От павшего животного берут ухо с той стороны, на которой лежит труп. Для этого под голову подкладывают поддон, на ухо у его основания накладывают 2 лигатуры и отрезают между ними ухо, место отреза прижигают; ухо заворачивают в слегка увлажнённую дезинфектантом ткань и помещают в герметичную тару. Дополнительно желательно взять мазки крови из уха (см. выше).

3. Если подозрение на сибирскую язву возникло уже в ходе вскрытия трупа, вскрытие немедленно прекращают, берут для исследования кусочек селезёнки и помещают его в герметичную упаковку. После этого предпринимают все меры по недопущению распространения особо опасной инфекции.

4. От трупов и туш свиней берут участки отёчной соединительной ткани гортани, миндалин, заглоточные и подчелюстные лимфоузлы, кровь.

Патологический материал и мазки помещают во влагонепроницаемую тару, опечатывают, отправляют в лабораторию с нарочным и сопроводительным документом.

В лаборатории такой материал исследуют вне очереди. Для исследования принимается материал любой степени свежести.

КЛАССИФИКАЦИЯ: сем. Bacillaceae, род Bacillus,

· вид Bacillus anthracis

Факторы вирулентности: образование капсулы и экзотоксина.

            Методы диагностики

I . Бактериологический метод

Морфология :  Окраска по Граму, на капсулу по Ребигеру  (ратвором формалинизированного генцианвиолета 30-60 сек.) и на спору. КАПСУЛА«+», общая для всей цепочки. СПОРЫ «+». ПОДВИЖНОСТЬ «–». Располагаются цепочками.

Морфология Bacillus anthracis зависит от материала, из которого сделаны мазки.

· В мазках из крови и свежего пат. материала  наблюдают крупные Гр. «+» палочки в виде коротких цепочек, по 2-3, окружённых общей капсулой. Концы клеток, обращенные в цепочке друг  к другу, как бы «обрублены», а снаружи – закруглены. Спор в таких мазках нет.

· В мазках из молодой культуры бациллы антракса образуют длинные переплетающиеся цепочки из крупных Гр+ палочек, которые иногда напоминают «бамбуковую трость» (концы клеток утолщены). Капсул и спор у молодой культуры антракса нет.

· В старых культурах антракса при доступе О₂ образуются округлые эндоспоры, затем вегетативные части микробных клеток отмирают, остаются только споры.

· В несвежем пат.материале и в материале от свиней форма клеток B.anthracis может быть атипичной: Гр+ палочки толстые, изогнутые, зернистые, со вздутиями; + «тени микробов»- грамотрицательные мёртвые клетки.                                                                                                   

 Культуральные свойства: Bac. anthracis – факультативный аэроб. Оптимальная температура культивирования 35-36^оС. Растет в течение 18-24 часов, неприхотлив к питательным средам.

 На МПБ – среда прозрачная, на дне осадок в виде «комочка ваты».

 На МПА – средние и крупные, матовые серо-белые колонии R-формы с локонообразным, бахромчатым краем; под малым увеличением микроскопа край колонии характеризуются как «голова Медузы», «львиная грива».

На кровяном агарегемолиза нет.

Для выявления способности образовывать капсулы – производят пересев на специальные кровяные среды типа среды ГКИ. На них антракс образует  гладкие колонии в S-форме, есть капсула.

 Биохимические свойства.  На МПЖ рост в виде «перевёрнутой ёлочки», лецитиназа-, уреаза+.

· Тест «феномен жемчужного ожерелья» (+). Для этого делают посев на пенициллиновый агар. Чувствительные к пенициллину клетки B. anthracis через 1-3 часа культивирования принимают форму шара (образуя сферопласты), цепочки имеют вид «ожерелья», что видно при просмотре в микроскоп.

· Тест на фосфатазную активность: посев на среду с ФФФ-агар
(фенолфталеин-фосфатом). После получения колоний на этой среде под крышку вносят каплю нашатырного cпирта. Фосфатазаположительные колонии розовеют, а колонии B.anthracis остаются белыми.