Поможем в ✍️ написании учебной работы

Имя

Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

Выберите тип работыЧасть дипломаДипломная работаКурсовая работаКонтрольная работаРешение задачРефератНаучно - исследовательская работаОтчет по практикеОтветы на билетыТест/экзамен onlineМонографияЭссеДокладКомпьютерный набор текстаКомпьютерный чертежРецензияПереводРепетиторБизнес-планКонспектыПроверка качестваЭкзамен на сайтеАспирантский рефератМагистерская работаНаучная статьяНаучный трудТехническая редакция текстаЧертеж от рукиДиаграммы, таблицыПрезентация к защитеТезисный планРечь к дипломуДоработка заказа клиентаОтзыв на дипломПубликация статьи в ВАКПубликация статьи в ScopusДипломная работа MBAПовышение оригинальностиКопирайтингДругое

Нажимая кнопку "Продолжить", я принимаю политику конфиденциальности

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ

ДЕПАРТАМЕНТ НАУЧНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ ПОЛИТИКИ
И ОБРАЗОВАНИЯ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ
АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

ПРАКТИКУМ ПО ДИАГНОСТИКЕ

БАКТЕРИАЛЬНЫХ БОЛЕЗНЕЙ

 ЖИВОТНЫХ

учебно-методическое пособие

К лабораторно-практическим занятиям

По частной ветеринарной микробиологии

Санкт-Петербург

2015

                                           

УДК: 619-:616.98:579-078.(075.8)

Сухинин А.А., Смирнова Л.И., Тулева Н.П., Белкина И.В.,
Приходько Е.И. , Макавчик С.А., Бакулин В.А. Практикум по диагностике бактериальных болезней животных. Учебно-методическое пособие.  – СПб. Издательство СПбГАВМ, 2015.– 90 с.

 

Учебно-методическое пособие предназначено для студентов ветеринарных факультетов, ветеринарных врачей лабораторий и курсов повышения квалификации, проводящих диагностические исследования. Написано в соответствии с новым учебным планом и программой по ветеринарной микробиологии для ветеринарных факультетов. В учебном пособии содержатся современные сведения по бактериологическим методам исследования. Изложение материала каждого занятия дается по определенному плану: цель занятия, оборудование и материалы, методические указания по проведению самостоятельной работы и контрольные вопросы для самоподготовки. Каждое занятие рассчитано на 2 часа.

 

Учебно-методическое пособие утверждено на методическом совете
Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины

протокол №  6 от 16  июня 2015 г.

 

 

© Санкт-Петербургская государственная                                                                                                                                                                                                 

академия ветеринарной медицины, 2015г.                                                   

ПРЕДИСЛОВИЕ

Мы закончили изучать общую микробиологию. И теперь, используя эти знания, приступаем к изучению характерных особенностей микроорганизмов, вызывающих заболевания животных (зоонозы), а также болезни, общие для животных и людей (зооантропонозы).

Среди микроорганизмов, изучаемых в курсе ветеринарной микробиологии, есть возбудители особо опасных инфекций (ООИ), таких, как сибирская язва, бруцеллез, туляремия; возбудители зоонозов – рожи свиней, кампилобактериоза. Есть и такие, которые вызывают пищевые токсикозы и токсикоинфекции у людей и животных: ботулизм, сальмонеллёз.

Для того, чтобы их правильно диагностировать, идентифицировать и дифференцировать, необходимо помнить, что:

Диагноз на инфекционные болезни ставят комплексно, учитывая эпизоотологические данные, клинические признаки болезни, патологоанатомические изменения в органах, в некоторых случаях - результаты аллергической диагностики. На основании этих данных ставят предварительный диагноз, который затем подтверждают в лабораторных условиях.

При лабораторном исследовании патологического материала, содержащего микроорганизмы, с целью их выявления и идентификации используют бактериологический, серологический и молекулярно-генетический методы диагностики.

I . Бактериологический метод – изучение биологических свойств бактерий. Метод включает в себя:

1. Бактериоскопию (микроскопию) – просмотр препаратов с помощью различных микроскопов для изучения морфологических особенностей микроорганизмов: (формы, размера, особенностей внутренней структуры, расположения в мазках, подвижности, наличия спор и капсул) и их тинкториальных свойств (способности воспринимать ту или иную окраску, отношения к растворам спиртов, кислот, щелочей).

2. Собственно бактериологический метод исследования (метод чистых культур) – посев исследуемого материала на питательные среды, культивирование микроорганизмов, получение чистой культуры и изучение её биохимических свойств с целью идентификации.

3. Биологический метод (биопробу) – заражение биомоделей выделенной культурой микроорганизма с целью изучения её вирулентности, для подтверждения того, что в медицинской или ветеринарной лаборатории выделен и идентифицирован именно микроорганизм, вызвавший болезнь.

II . Серологический метод – использование иммунологического принципа взаимодействия специфических антигенов и антител, в результате чего с помощью серологических реакций можно идентифицировать микроорганизм или обнаружить антитела к нему в сыворотке крови исследуемых животных или людей.

III . Молекулярно-генетическийметод – выявление в исследуемом материале фрагментов ДНК, строго специфичных для каждого вида микроорганизмов (полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Исходя из вышесказанного, в данном учебно-методическом пособии изучаемый материал изложен по следующей схеме:

1. Название возбудителя, в т.ч. и на латыни.

2. Краткие сведения о поражениях, вызываемых данным возбудителем.

3. Патологический материал для лабораторной диагностики

4. Классификация возбудителя.

5. Бактериологический метод, включающий в себя:

- микроскопию;

- особенности культивирования и роста на питательных средах;

- в некоторых случаях дифференцирующие тесты;

- биопробу;

6. Серологическая диагностика;

7. Биопрепараты, используемые для диагностики, лечения и профилактики болезней, вызываемых данным возбудителем.

 

К лабораторно-практической работе на занятиях по микробиологии можно приступать только при условии соблюдения правил техники безопасности.

ПРОЦЕССОВ

Цель занятия:

1. Ознакомить студентов с методами исследования патматериала на наличие синегнойной палочки, протея.

2. Изучить морфологию возбудителей.

3. Изучить характер роста бактерий на питательных средах.

Материалы и оборудование : Набор готовых красок во флаконах в штативе, йодированный спирт, раствор Люголя, дистиллированная вода, предметные стекла, фильтровальная бумага, бактериологические петли, пинцеты, пробирки с микробными культурами в штативе. Микроскопы. Пробирки и чашки Петри с характерным ростом возбудителя на питательных средах.

СИНЕГНОЙНАЯ ПАЛОЧКА

Широко распространена в природе. Очень устойчива к дезинфектантам и антибиотикам. Поражает макроорганизм при снижении иммунитета. Вызывает септическую болезнь норок – псевдомоноз. Осложняет течение ожоговой болезни, онкологич. процессов, заживление ран у животных и людей. Вызывает отиты, экземы, маститы, эндометриты, пневмонии, сепсис. Может быть причиной пищевых токсикоинфекций. Возбудитель одной из наиболее опасных госпитальных инфекций.

Материал для лабораторной диагностики : гной и экссудат из очагов поражения, моча, сперма, молоко, паренхиматозные органы, трубчатая кость, трупы мелких животных и т.д.

 

КЛАССИФИКАЦИЯ

сем. Pseudomonadaceae, род Pseudomonas,

· вид Pseudomonas aeruginоsa

         Методы диагностики

Бактериологический метод

Морфология : Мелкая полиморфная, Гр «–» - палочка, располагается одиночно, или беспорядочно, СПОРЫ «–», КАПСУЛА «–», ПОДВИЖНОСТЬ «+».

Культивирование.Аэроб. Растёт при температуре от 20 до 44^оС на простых питательных средах. Очень неприхотлива, растёт даже при пересеве на физиологический раствор.

           Культуральные свойства. При росте выделяет водорастворимые пигменты: сине-зелёный - пиоцианин; флуоресцирующий желтый - пиовердин; красный - пиорубин; чёрно-коричневый - пиомеланин. Выделяет запах жасмина или земляничного мыла.

    На МПБ интенсивное помутнение, постепенное окрашивание среды в зеленоватый цвет. На дне слизистый осадок, при встряхивании он поднимается в виде косички. На поверхности может быть пленка.

    На МПА средние и крупные, серые, плоские колонии с матовой поверхностью, неровными краями. Колонии и среда прокрашиваются в зелёный цвет, иногда с радужным отблеском.

Биохимические свойства. Синегнойная палочка обладает оксидазной активностью. Имеет протеолитическую активность (вызывает порчу пищевых продуктов). Выделяет аммиак. Н₂S и индол не образует. МПЖ – разжижает воронкой. Молоко – свертывает и пептонизирует. На кровяном агаре часто гемолиз. Сахаролитическая активность слабая – окисляет  глюкозу, а большинство других сахаров не изменяет, поэтому относится к группе так называемых  «неферментирующих» микробов.

ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИЕ ТЕСТЫ

· рост при 44^оС и отсутствие роста при 4^оС.

· тест с хлороформом (в МПБ хлороформ растворяет пиоцианин и опускается на дно в виде голубой жидкости);

· положительный тест на окисление глюкозы в аэробных условиях и отрицательный - на ферментацию глюкозы в анаэробных условиях  (О/Ф тест).

Биопроба : заражение белых мышей (п/к, в дозе 0,2 мл) смывом с МПА – гибель.

II . Серологический метод:

РА на стекле с поли- и моновалентными сыворотками и живой культурой.

БИОПРЕПАРАТЫ: Псевдомонозная формолвакцина для норок; Диагностические сыворотки. Псевдомонозный лечебный бактериофаг, пиобактериофаг.

ПРОТЕЙ

Широко распространён в природе. Типичный гнилостный микроорганизм. Вызывает гниение органических веществ, порчу пищевых продуктов. При ослаблении защитных сил макроорганизма может вызывать гнойно-септические процессы (у новорожденных, недоношенных, у старых животных, при онкологических процессах). Выделяется при циститах, пиелонефритах, эндометритах, энтероколитах, при запущенных раневых процессах (гниение ран). При употреблении в пищу несвежих, испорченных пищевых продуктов может быть причиной токсикоинфекций. Является санитарно-показательным микроорганизмом – индикатором гнилостного загрязнения воды, почвы.

Материал для лабораторной диагностики: раневой экссудат, моча, истечения из влагалища, фекалии, содержимое кишечника, паренхиматозные органы, аборт. плод. Пищевые продукты – при исследовании на свежесть. Корма. Смывы с поверхностей.

КЛАССИФИКАЦИЯ: сем. Enterobacteriaceae, род. Proteus, виды:

· Proteus vulgaris (протей обыкновенный)

· Proteus mirabilis (протей удивительный)

· Proteus mixofaciens

             Методы диагностики

ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИЕ ТЕСТЫ

· Посев по Шукевичу в конденсационную воду скошенного МПА (ползучий рост)

· Рост на трёхсахарном агаре Олькеницкого (скос малиновый, столбик чёрный)

· Расщепление фенилаланина; зелёное окрашивание при нанесении реактива хлорида железа на агар с фенилаланином, где выросла культура протея.

Биопроба :  Белым мышам вводят подкожно или внутрибрюшинно 0,5 мл бульонной культуры. Наличие патогенного возбудителя вызывает гибель животных.

II Серологический метод: РСК; РА со специфическими сыворотками.

Биопрепараты.

 Диагностические сыворотки. Аг-диагностикумы для постановки РА. Протейные лечебные бактериофаги; пиобактериофаг.

Задания для самостоятельной работы

1. Приготовить мазки из культуры и окрасить их по Граму.

2.Изучить морфологию возбудителей под микроскопом и зарисовать в практикуме.

3. Изучить характер роста возбудителя на жидких и плотных питательных средах.

 

Контрольные вопросы

1. Какие поражения вызывают гноеродные бактерии?

2. Расскажите, какой патматериал направляют в лабораторию для исследования.

3. Опишите морфологию возбудителей.

4. Опишите характер роста возбудителей на питательных средах.

5. Какие дифференцирующие тесты применяют в лабораториях?

6. Какие биопрепараты применяют для диагностики, лечения и профилактики болезней, вызываемых, изучаемыми возбудителями?

Занятие № 2.
Кокки - возбудители гнойно-септических процессов

 

Цель занятия:

1. Ознакомить студентов с методами исследования патологического материала на наличие кокков - возбудителей гнойно-септических процессов.

2. Изучить морфологию возбудителей

3. Изучить характер роста кокков на питательных средах.

Материалы и оборудование : Набор готовых красок во флаконах в штативе, йодированный спирт, раствор Люголя, дистиллированная вода, предметные стекла, фильтровальная бумага, бактериологические петли, пинцеты, пробирки с микробными культурами в штативе. Микроскопы. Пробирки и чашки Петри с характерным ростом возбудителей на питательных средах.

ПАТОГЕННЫЕ СТАФИЛОКОККИ

Патогенные стафилококки вызывают гнойно-воспалительные процессы различной локализации. Местные – пиодермию, фурункулы, абсцессы, экземы. В отдельных органах – ангины, отиты, маститы, эндометриты, циститы, пневмонии. Общее поражение – пиемию и септицемию. При накоплении в пищевых продуктах - пищевые токсикозы. Восприимчивы все виды животных, а также человек.

Материал для лабораторной диагностики: раневой экссудат, гной абсцессов, ран, молоко при маститах, выделения из половых органов при эндометритах, кровь при септицемии;

КЛАССИФИКАЦИЯ: сем. Micrococcaceae , род Staphylococcus -
более 25 видов.

· S. aureus - наиболее патогенный, чаще других вызывает гнойные процессы. Является санитарно-показательным микроорганизмом – индикатором воздушно-капельного и контактного загрязнения.

· S. epidermidis – условно патогенный;

· S. saprophyticus – гнилостный микроорганизм, очень редко вызывает болезни.

· S. intermedius, S.haemoliticus, S.hyicus и др.

Патогенез и факторы вирулентности:

Микроорганизм проникает в организм через поврежденную кожу и слизистые оболочки; энтеротоксины стафилококков накапливаются  в пищевых продуктах (мясо, молоко и др.). Стафилококки  образуют и выделяют экзотоксины: гематоксин, лейкоцидин, энтеротоксин, некротоксин; ферменты вирулентности: коагулазу, фибринолизин, гиалуронидазу, ДНК-азу, лецитиназу.

       

             Методы диагностики

I. Бактериологический метод

 Морфология:  метод окраски - простой метод

и по Граму; микрокартина: шаровидные клетки

располагаются беспорядочно и в виде скоплений,

напоминающих «виноградные грозди»,                         Гр» «+»; СПОРЫ «–»;

ПАТОГЕННЫЕ СТРЕПТОКОККИ

Патогенные стрептококки – возбудители гнойно-воспалительных процессов различной локализации (ангина и скарлатина у человека, мыт лошадей, маститы у животных, стрептококковая септицемия птиц, кроликов, стрептококковый полиартрит), а также смешанных и вторичных инфекций (абсцесс, фурункул, нефрит, пиемия, сепсис и др.). Фекальные стрептококки (энтерококки) могут вызвать воспаление кишечника и мочеполовых путей. При накоплении в пищевых продуктах стрептококки вызывают пищевые токсикозы (токсикоинфекции).

 Материал для лабораторной диагностики: при жизни – гной, молоко, слизь, соскобы эпителия, раневой экссудат, моча, кровь, кал; посмертно – пораженные органы.

КЛАССИФИКАЦИЯ сем. Streptococcaceae, род. Streptococсus, включает 17 серологических групп по Лендсфилд (A,B,C,D,E и т.д.).

Важнейшие виды:

· гр. А. Str.pyogenes (гнойно-воспалительные процессы, ангина)

· гр. B. Str . agalactiae (мастит коров); 

· гр.С. Str. equi (мыт у лошадей).

· гр.D Enterococcus faecalis(энтероколиты, циститы), 

· без группы Str . pneumoniae (диплококковая септицемия, пневмонии).

ДИФФЕРЕНЦИРУЮЩИЕ ТЕСТЫ

Применяются особые биохимические тесты для дифференциации отдельных видов стрептококков, в том числе:

· для Str.pyogenes – гидролиз гиппурата натрия; 

· для Str.agalactiae – свёртывание молока и CAMP-тест на скрытую гемолитическую активность;

· для Str. equi – отсутствие роста на среде с добавлением мытного анатоксина;

· для Str. pneumoniae – лизис 10%-й желчью;

· для патогенных энтерококков– редукция (обесцвечивание) метиленового молока, рост на среде с 40% желчи и т.д.

Биопроба: заражают подкожно или внутрибрюшинно белых мышей, кроликов, наблюдают гибель.

II Серологический метод: РП в капиллярах для определения серогруппы стрептококков по Ленсфилд, РА в латексе.

САЛЬМОНЕЛЛЕЗЫ

 – группа инфекционных болезней преимущественно молодняка с.х. животных, мелких домашних, промысловых животных, грызунов, птиц, характеризующихся при остром течении лихорадкой и диареей. При хроническом течении – воспалением легких, плевритами, артритами. У взрослых животных и птиц болезнь может протекать бессимптомно (сальмонеллоносительство), у беременных самок возможны аборты. У людей при употреблении продуктов, содержащих сальмонеллы, могут возникать пищевые инфекции. При оценке пищевых продуктов, в которых обнаружены сальмонеллы, важно знать, что эти микроорганизмы устойчивы к нагреванию, при 60^оС погибают в течение часа, при 80^оС – за 5-10 мин (то есть могут сохраняться, например, при изготовлении варёной колбасы)

Материал для лабораторной диагностики: при жизни – кал, сыворотка крови; посмертно – трупы мелких животных и птиц, паренхиматозные органы, мезентериальные лимфатические узлы, отрезок кишечника, аботированный плод.

 КЛАССИФИКАЦИЯ сем. Enterobacteriaceae, род: Salmonella;

вид Salmonella enterica, включает более 2 500 серовариантов, таких как:

· S . Е nteritidis , S . Dublin – у телят (у людей возбудитель пищевой инфекции)

· S. Choleraesuis, S. Typhisuis - у свиней .

· S . Typhimurium – у водоплавающей птицы (у людей возбудитель пищевой инфекции)

· S . Abortus equi – у лошадей (аборт у кобыл).

· S . Abortus ovis – у овец (аборт у овец).

· S . Pullorum , S . Gallinarum – пуллороз-тиф у птиц.

ПАТОГЕНЕЗ И ФАКТОРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ: основные пути заражения – алиментарный, аэрогенный, возможно внутриутробное и трансовариальное. Возбудители размножаются в тонком кишечнике и гематогенным и лимфогенными путями разносятся в паренхиматозные органы, где вновь размножаются. При распаде их высвобождаются эндотоксины, которые вызывают патологические процессы. Сальмонеллы образуют два вида токсинов: экзо- и эндотоксины.

Методы диагностики

I. Бактериологический метод

Морфология: мелкие короткие палочки  с                                            закругленными концами, располагаются одиночно или

попарно, беспорядочно; Гр. «–». ^-; СПОРЫ «–»;

КАПСУЛА «–» ; ПОДВИЖНОСТЬ «+»  

(за исключением S. P ullorum).

Культивирование: сальмонеллы - факультативные анаэробы; оптимальная температура 37^oС; срок культивирования 18-20 часов. Культивирование проводят в 3 этапа: 1-й этап- посев исследуемого материала в накопительные среды (Килиана, Мюллера, селенитовый бульон);

2-й этап - Пересев на элективные, дифференциально-диагностические среды (Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфит агар и др.);

3-й этап – пересев на дифференциально-диагностические среды «пестрого ряда» для биохимического тестирования.

Культуральные свойства: Все энтеробактерии, в т.ч. сальмонеллы имеют сходные культуральные признаки: на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка, на МПА – сочные, круглые с ровными краями серо-белого цвета колонии.

· на среде Эндо (среда розового цвета с лактозой и фуксином) – мелкие и средние, нежные, прозрачные бледно-розовые колонии,

· на среде Левина (среда красновато-фиолетового цвета, цвета «гнилой вишни» с лактозой, эозином и метиленовым синим) –  колонии цвета среды;

· на среде Плоскирева (высокоселективной среде кирпичного цвета с лактозой, нейтральным красным и бриллиантовым зелёным) – серо-желтые колонии;

· на среде висмут-сульфит-агар (высокоселективная среда молочно-зеленоватого цвета) – блестящие антрацитово-чёрные колонии.

· на трехсахарном агаре Олькеницкого – скос красный, столбик желтый, черные пятна, разрывы среды («3-х сахарный агар становится трехцветным»).

 Биохимические свойства: Сальмонеллы обладают пониженной сахаролитической активностью: ферментируют глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа. Важным дифференцирующим биохимическим свойством сальмонелл является отсутствие способности ферментировать лактозу. МПЖ - не разжижают, Н₂ S +, индол - ; реакция с метиловым красным +: (среда окрашивается в розово-красный цвет), реакция Фогеса-Проскауэра отрицательная – (желтое окрашивание среды). Растет на среде Симмонса с цитратом, изменяя её цвет с зелёного на синий.

Биопроба . Заражают подкожно белых мышей (гибель) в дозе 0,2 см³.

  II . Серологический метод: 1. Экспресс-метод диагностики – постановка РИФ (МФА) с флюоресцирующей диагностической сывороткой и пат. материалом.

2. РА с исследуемой сывороткой крови (или кровекапельная) при диагностике паратифозного аборта кобыл, пуллороза у кур (т.е. ищут антитела в исследуемой сыворотке крови животных с помощью антигена-диагностикума).

3. РА с исследуемой живой культурой с агаровой среды с целью определения вида и сероварианта сальмонеллы (т.е. определяют антиген полученной культуры бактерий с помощью диагностических сывороток). 

Антигенное строение сальмонелл очень сложно. На основе антигена, общего для нескольких серовариантов, они подразделяются на серологические группы по схеме Кауфмана-Уайта, обозначаемые заглавными буквами латинского алфавита (серогруппы A, B, C, D и т.д.). Кроме того, разные сероварианты сальмонелл различаются по набору соматических О-антигенов и жгутиковых Н-антигенов. Поэтому идентификацию исследуемых культур проводят в 3 этапа.

1-й этап: культуру испытывают с групповыми (поливалентными) сальмонеллезными агглютинирующими О-сыворотками в РА на стекле для подтверждения принадлежности к роду Salmonella.

2-й этап: при положительном результате с групповой сывороткой проводят испытания этой же культуры с отдельными О-сыворотками, входящими в состав поливалентной групповой О-сыворотки, и определяют серологическую группу сальмонеллы по Кауфману-Уайту.

3-й этап: культуры испытывают с монорецепторными О- и Н-сыворотками, соответствующими  установленной серогруппе и устанавливают серовариант сальмонеллы, то есть идентифицируют.

Фагодиагностика – с набором сальмонеллёзных бактериофагов

Биопрепараты

Диагностические – наборы агглютинирующих сывороток для постановки РА; флюоресцирующая сыворотка для РИФ; бактериофаги.

 Лечебные – сыворотки и гамма-глобулины.

Разнообразные вакцины, такие как:

· Концентрированная формолвакцина для стельных коров;

· Живая или инактивированная вакцина для телят от вакцинированных коров;

· Формолвакцина против паратифа поросят – для супоросных свиноматок за 1,5 мес. до опороса.

· Сухая живая вакцина против паратифа свиней из аттенуированного штамма S. choleraesuis ТС-177 – для поросят с 2-недельного возраста

· Поливалентная формолтиомерсаловая вакцина против сальмонеллёза овец.

· Ассоциированная вакцина против паратифа, пастереллёза и диплококковой септицемии поросят – в неблагополучных хозяйствах.

 Задания для самостоятельной работы

1. Приготовить мазки из культуры и окрасить их по Граму.

2. Изучить морфологию возбудителя под микроскопом и зарисовать в практикуме.

3. Изучить характер роста возбудителя на жидких, плотных и дифференциально-диагностических питательных средах.

Контрольные вопросы

1. Какие поражения вызывают сальмонеллы?

2. Расскажите, какой патматериал направляют в лабораторию для исследования.

3. Опишите морфологию возбудителя.

4. Опишите характер роста возбудителя на простых и дифференциально-диагностических средах.

5. Какие дифференцирующие тесты применяют в лабораториях?

6. Какие биопрепараты применяют для диагностики, лечения и профилактики болезней, вызываемых изучаемыми возбудителями?

Занятие № 4.
Возбудитель КОЛИБАКТЕРИОЗА

Цель занятия:

1. Ознакомить студентов с методами исследования патматериала на наличие возбудителя.

2. Изучить морфологию микроорганизма.

3. Изучить характер роста возбудителя на простых и дифференциально-диагностических питательных средах.

Материалы и оборудование : Диагностические наборы сывороток. Набор готовых красок во флаконах в штативе, йодированный спирт, раствор Люголя, дистиллированная вода, предметные стекла, фильтровальная бумага, бактериологические петли, пинцеты, пробирки с микробными культурами в штативе. Пробирки и чашки Петри с характерным ростом возбудителя на простых и дифференциально-диагностических питательных средах.

 

КОЛИБАКТЕРИОЗ

- острая инфекционная болезнь всех видов сельскохозяйственных и мелких домашних животных, птиц и пушных зверей, главным образом молодняка. Широко распространена. Заражение происходит алиментарным, реже аэрогенным путём (у птиц).При размножении возбудителя в кишечнике наблюдается энтеротоксическая и энтеритная формы. Они характеризуются диареей, обезвоживанием, интоксикацией (слабость, потеря аппетита, угнетённое состояние); у взрослых - маститами, эндометритами. У ослабленных животных, а также у птиц возникает колисептицемия – сепсис, при этом E.coli проникает во все органы и ткани, размножается в крови и вызывает гибель. У поросят некоторые серовары E.coli вызывают «отёчную болезнь» - отёк всего тела, головы, интоксикацию и гибель. При попадании в пищевые продукты вирулентные E.coli могут в них накапливаться, выделяя токсины, и вызывают пищевое отравление (токсикоинфекцию) у людей. Факторы вирулентности–термолабильный экзотоксин и термостабильные эндотоксины, гемолизины. Обладают адгезивными свойствами.

Материал для лабораторной диагностики: при жизни – кал, сыворотка крови; посмертно – трупы мелких животных и птиц, паренхиматозные органы, мезентериальные лимфатические узлы, отрезок кишечника, головной мозг.

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ сем: Enterobacteriaceae, род: Escherichia, вид:Escherichia сoli (энтеропатогенные штаммы); серовары 01,02,08, 026, О55,078, О111, О157 и др.      

      

             Методы диагностики

I. Бактериологический метод

Морфология:   мелкие, короткие, толстые, полиморфные(1-2 мкм) палочки с закруглёнными концами, располагаются одиночно, реже попарно, беспорядочно; Гр. «–». ^-; СПОРЫ «–»; КАПСУЛА «–» ; (иногда образуют капсулу сероварианты - возбудители «отёчной болезни поросят» - O8, О9, О101, О119);

 ПОДВИЖНОСТЬ «+» (почти всегда).   

Культуральные свойства: E . coli - факультативные анаэробы; оптимальная температура 37^oС; рост в течение 18-20 часов.

на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося хлопьевидного осадка;

на МПА – сочные, круглые, с ровными краями, серо-белого цвета колонии, мелкие или средней величины;

на кровяном МПА может быть гемолиз.

· на среде Эндо – тёмно-малиновые колонии, часто с металлическим блеском

· насреде Левина – фиолетовые или черные колонии, часто с металлическим блеском.

· на среде Плоскирева – скудный рост, розовые колонии.

· на среде висмут-сульфит агар не растёт или мелкие зеленоватые колонии.

· 3-х сахарный агар Олькеницкого полностью меняет цвет с розового на жёлтый.

Биохимические свойства : Е.coli обладают высокой сахаролитической активностью; для её выявления проводят посевы на «цветной ряд» (среды Гисса). Сбраживают с образованием кислоты и газа глюкозу, сбраживают лактозу (изредка могут быть лактозоотрицательные штаммы E . coli), маннит и другие сахара. Не разжижают МПЖ, Н₂S не образуют, образуют индол, реакция с метиловым красным (на полное расщепление глюкозы) +: (среда окрашивается в розово-красный цвет); реакция на ацетоин (на неполное расщепление глюкозы) (Фогеса-Проскауэра)«-» (жёлтое кольцо).На среде Симмонса с цитратом не растёт (среда остаётся зелёной).

Биопроба . Подкожно заражают выделенной микробной культурой белых мышей. При исследовании пат. материала от птиц -заражают цыплят интраорбитально.

  II . Серологический метод: 1. РА (пробирочная и на стекле) для серотипизации  полученного антигена (микробной культуры). Антиген для РА должен быть убит прогреванием на водяной бане.

2. РА с антиадгезивными диагностическими сыворотками.

3. МФА

Биопрепараты:   

В качестве биопрепаратов, которых создано большое количество, используют диагностические, лечебные и профилактические. Наиболее известными являются следующие:

Диагностические:

1. Групповые и монорецепторные О-колиагглютинирующие сыворотки;

2. Люминесцентные сыворотки для МФА;

3. Адгезивные коли-сыворотки.      

Лечебные:

1. Сыворотка поливалентная против колибактериоза и Salm сельскохозяйственных животных.

2. Колипротектант ВИЭВ (взвесь убитой культуры E.coli, отмытой от токсина и консервированного формалином для пассивной иммунизации новорожденного молодняка – per os за 30 минут до первой выпойки молозива.

3. Антиадгезивные гипериммунные сыворотки

4. Бактериофаг против колибактериоза и паратифа. Антибиотики.

Профилактические:

1.Вакцина «коли-вак». Для получения колострального иммунитета у молодняка вакцинируют стельных коров, супоросных свиноматок, суягных овец.

2. Вакцина поливалентная против колибактериоза и сальмонеллёза пушных зверей. Вакцинируют беременных самок для получения колострального иммунитета.

3.Гидроокисьалюминевая  (ГОА) формолтиомерсаловая вакцина для К.Р.С., М.Р.С. и свиней).

4. Инактивированная формолвакцина против колибактериоза кур.

 

 

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ

сем. Pseudomonadaceae, род: Burkholderia, вид: B. mallei

Биопрепараты:   

1. Живая вакцина из безкапсульного эталонного штамма СТИ.

2. Живая вакцина из штамма 55.

3. Вакцина ГНКИ.

4. Ассоциированная живая жидкая вакцина против сибирской язвы и эмкара К.Р.С.

Гипериммунная лечебно-профилактическая сыворотка и гамма-глобулин.

Диагностические биопрепараты: преципитирующая сыворотка и стандартный Аг для РП, люминесцирующие сыворотки для МФА, диагностические бактериофаги.

ТУБЕРКУЛЕЗ

- инфекционная, хронически протекающая болезнь человека и животных. Патологоанатомически характеризуется образованием туберкул (бугорков) в органах и тканях и творожисто-перерожденных туберкулезных очагов. Болеют практически все виды животных и птиц, в т.ч. пресмыкающиеся. (к.р.с., м.р.с., свиньи, лошади, кошки, собаки, олени, маралы, куры, индейки, цесарки, фазаны, павлины, голуби, утки и др.). При аэрогенном заражении первичный очаг инфекции развивается в легких, а при алиментарном - в мезентериальных лимфатических узлах. Из первичных фокусов микобактерии могут попасть в кровь, что приводит к генерализации процесса; факторы вирулентности-эндотоксины-туберкулины. Жирные кислоты способствуют распаду тканей. Корд-фактор нарушает дыхание и фосфорилирование клеток. L-формы возбудителя (без клеточной стенки) устойчивы к антибиотикам, обладают способностью к реверсии в типичные микобактерии. Клинические признаки туберкулёза - истощение, слабость, кашель (или понос), субфебрильная температура, гибель.

Микобактерии туберкулеза обладают значительной устойчивостью к химическим и физическим воздействиям. В высушенной мокроте, кусочках пораженной ткани, пыли микобактерии жизнестойки от 2-х до 7 мес. и более,в воде - 5 мес.,в почве - 7 мес.,при гниении материала более 160 суток.

Материал для лабораторной диагностики: при жизни - молоко, моча, слизь, посмертно - пораженные органы и ткани (бронхиальные и средостенные лимфоузлы, плевра, отрезки кишечника и т.п.). Доставляют свежим, замороженным или после консервации 30-40% водным раствором глицерина (1:5).

КЛАССИФИКАЦИЯ:

M. b ovis (бычий тип),

M. a vium (птичий тип).

и другие.

                    Методы диагностики

I. Бактериологический метод

Метод окраски мазка: по Цилю-Нильсону, по Граму, МФ по Бойю. Морфология:  Прямые или слегка изогнутые палочки 1,5 до 4мкм. Грам  «+», СПОРЫ «-», КАПСУЛЫ «-», ПОДВИЖНОСТЬ «-» ; кислото-спирто-щелочеустойчивые, в мазках часто располагаются скоплениями.

При окраске по Цилю-Нильсону - красные палочки на синем фоне.

 Культивирование.  Патматериал измельчают и обрабатывают химическим способом – 6-10%-м раствором серной кислоты, отмывают физ.раствором, затем делают мазки и посевы на питательные среды (метод Гона, метод Аликаевой и т.д.). Для жидкого материала используют метод флотации с NaОН и ксилолом.

Для выделения из патматериала используют специальные элективные яично-картофельно-глицериновые  плотные среды: Петраньяни, Гельберга, Левенштейна-Йенсена, а также синтетические среды типа «ФИНН-1». Для пересева и сохранения культуры применяют Мясо-пептонный глицериновый бульон (МПГБ), глицериновый картофель.

Микобактерии - строгие аэробы; Первые признаки роста возбудителя птичьего типа появляются на средах через 15-25 дней, человеческого типа – через 25-35 дней, бычьего типа – через 40-70 дней.

При культивировании приходится дифференцировать патогенные и непатогенные микобактерии. Имеется группа быстрорастущих непатогенных микобактерий (рост за 24-72 часа). Имеется группа непатогенных микобактерий, образующих на свету различные пигменты, и др.

Культуральные свойства : На жидких питательных средах - рыхлая, матовая, морщинистая пленка. На плотных питательных средах колонии R-формы: сухие, шероховатые, цвета слоновой кости или сплошной сухой налёт. У Mycobacterium avium – колонии гладкие, слизистые, светло-жёлтого цвета.

Метод Прайса: Было установлено, что возбудитель может размножаться и образовывать микроколонии на стекле. Для этого пат.материал наносят на узкие длинные стерильные предметные стекла, обрабатывают H₂SO₄ и погружают мазки в жидкую кровяную среду. После инкубирования при 37^оС на 1-е, 15-е и 30-е сутки мазки вынимают из пробирки, высушивают, фиксируют, окрашивают по Цилю-Нильсену, микроскопируют.

Выявляют микроколонии, в которых бактерии расположены в виде «жгутов» или «кос». Это явление получило название «корд-фактор», его образуют только патогенные микобактерии.

Биохимические свойства определяют только при углублённом изучении свойств микобактерий.  Учитывают такие показатели, как рост на среде с салицилатом натрия, устойчивость к 5 %-ному NaCl, пикриновой кислоте, сахаролитическая активность, а также синтез уреазы, редукция нитратов, синтез каталазы и др.

Биопроба. Определение вирулентности культуры проводят параллельно для морских свинок, кроликов и птиц. Лабораторных животных используют и для идентификации видов возбудителей туберкулёза.

                                                                       Таблица №5

Возбудитель	Морские свинки	Кролики	Птицы
M.tuberculosis	Генерализованная форма	Очаговая форма	Непатогенен
M.bovis	Генерализованная форма	Генерализованная форма	Непатогенен
M.avium	Непатогенен	Сепсис	Генерализованная форма

        II Серологический метод:

Используют реакцию связывания комплемента (РСК); реакцию пассивной или непрямой гемагглютинации (РНГА); реакцию кольцепреципитации; реакцию диффузионной преципитации в геле (РДП).

Аллергическая диагностика. Для изготовления аллергенов-туберкулинов для млекопитающих используют штаммы вида Mycobacterium bovis. Применяют сухой очищенный туберкулин (протеин-пурифитед-дериват-ППД). Это сухой очищенный экстракт из туберкулёзных бактерий бычьего вида. Сухой очищенный туберкулин (ППД) для птиц готовят по той же технологии, из культурального фильтрата микобактерий туберкулеза птичьего вида. Его применяют для диагностики туберкулёза у птиц и свиней. Туберкулин инъецируют КРС, верблюдам, оленям в толщу кожи в области средней трети шеи, свиньям на наружной поверхности основания уха, курам в толщу кожи бородки. Учитывают реакцию через 72 ч. по результатам измерения толщины кожной складки с помощью кутиметра.  Положительная реакция проявляется в виде разлитого отека.

Парааллергические реакции на туберкулин – результат сенсибилизации крупного рогатого скота атипичными микобактериями, живущими в торфяной подстилке.

Псевдоаллергические реакции – результат воздействия возбудителей паразитарных болезней и других факторов.

Для дифференциации таких реакций животным одновременно с туберкулинизацией (с другой стороны шеи) внутрикожно вводят «КАМ» - комплексный аллерген на микобактерии. Если на КАМ реакция будет сильнее – это парааллергическая реакция.

Биопрепараты:   

При туберкулезе иммунитет нестерильный. Фагоцитоз имеет незавершенный характер, и фагоцитированные микобактерии не погибают.

В 1924 г. французские ученые Кальметт и Герен предложили вакцину против туберкулеза. Этот штамм назван культурой BCG (Bacterium Calmett - Guerin),в русской транскрипции – БЦЖ, им вакцинируют людей. Биопрепараты для специфической профилактики и терапии у животных не разработаны.

ПАРАТУБЕРКУЛЕЗ

 - хроническая инфекционная болезнь, характеризующаяся сначала периодическим, затем постоянным расстройством деятельности желудочно-кишечного тракта, истощением и летальным исходом.

Восприимчивые животные. M. paratuberculosis поражает КРС (особенно молодняк), буйволов, верблюдов, овец, коз. Заражение происходит алиментарным путем; возбудитель проникает в ворсинки кишечника, где фагоцитируется (фагоцитоз незавершенный), вызывает деструктивные изменения, приводит к нарушениям функции желез кишечника. Основные факторы вирулентности - эндотоксины.

Патологический материал для лабораторной диагностики: при жизни - фекальные массы, комки слизи, посмертно -пораженные участки слизистой тонкого отдела кишечника, брыжеечные лимфатические узлы.

 

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ.

Сем. Mycobacteriaceae Род: Mycobacterium.

· Вид: Myc. p aratuberculosis (палочки Ионе)

                Методы диагностики

I. Бактериологический метод

Морфология: Методы окраски: по Цилю-Нильсену (красные на синем фоне) и  по Граму. (+). Myc. paratuberculosis – мелкие кислотоспиртощелочеустойчивые палочки длиной 0,5-1,5. Располагются в виде скоплений, кучек, редко поодиночке или по 2-4 клетки. СПОРЫ «-», КАПСУЛЫ «-», ПОДВИЖНОСТЬ «-».

 

Культуральные свойства.

На простых питательных средах палочка Ионе не растёт! Посев на специальные пит. среды с добавлением особого стимулятора роста - экстракта бактерийной массы микобактерий тимофеевой травы (M y c. phlei). Экстракт добавляют к средам для возбудителя туберкулёза - Петраньяни, Гельберга, Левенштейна-Йенсена, но лучше использовать специальные среды Данкина, Вишневского. 

 Myc. paratuberculosis - аэроб. Оптимальная температура роста - 38^o С; срок культивирования - от 6 недель до 7 месяцев. Поэтому данный микроорганизм культивируют только в специализированных лабораториях.

На плотных питательных средах вначале возникают изолированные серовато-желто-белые маленькие колонии. С течением времени появляется складчатое наложение. На жидких средах Myc. paratuberculosis образует нежную беловато-сероватую пленку, которая через 3-4 мес культивирования увеличивается в объеме и опускается на дно пробирки.

Дифференциация. Для дифференциации Myc. paratuberculosis от других кислотоустойчивых микобактерий  патологический материал, после обработки 5 %-м раствором серной кислоты, высевают также на элективные среды для возбудителей туберкулёза без экстракта M y c. phlei и обычные питательные среды (МПА, МПБ). Культуры атипичных сапрофитных быстрорастущих микобактерий вырастают на простых средах в течение первых 3-10 суток. Микобактерии туберкулеза растут на элективных средах, таких,  как среда Петраньяни. Микобактерии паратуберкулёза не растут на средах без добавления экстракта палочки тимофеевой травы.

Биопроба

Лабораторные животные невосприимчивы. Биопроба нерезультативна.

  II Серологический метод:  РСК с ионином или птичьим альттуберкулином.

Аллергический метод

Для постановки аллергической пробы применяют паратуберкулин(ионин) – фильтрат  убитой кипячением 2-3-х месячной культуры паратуберкулёзных микобактерий.

Крупный рогатый скот исследуют внутрикожной аллергической пробой (2 раза). Реакцию учитывают через 48 ч с помощью измерения величины кожной складки кутиметром.

Биопрепараты:   

 для специфической профилактики и терапии: не разработаны.

ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗ

-  болеют до 60 видов млекопитающих (грызуны, пушные звери), 27 видов птиц (куры, индейки, голуби). К.р.с., лошади, собаки, кошки – менее восприимчивы. Переносчиками являются грызуны.

К псевдотуберкулезу относится ряд заболеваний, вызываемых некислотоустойчивыми микроорганизмами, в отличие от типичных туберкулезных палочек Инфекционная болезнь характеризуется цикличным течением и интоксикацией.
При этом заболевании на лимфатических узлах, легких, печени, селезенке отмечают узелковые поражения.

Материал для лабораторной диагностики: трупы грызунов и птиц целиком, лимфатические узлы, измененные участки паренхиматозных органов погибших животных

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ.

1.Yersinia pseudotuberсulosis            

 2. Corinebacterium pseudotuberculosis.

   Методы диагностики.

I. Бактериологический метод

Микроскопия.

Yersinia – полиморфная палочка из семейства

Биопрепараты:   

. Специфическая профилактика не разработана. Применяют антибиотикотерапию.

 

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить морфологию возбудителей под микроскопом и зарисовать в практикуме.

2. Используя атлас, изучить характер роста возбудителей на питательных средах.

Контрольные вопросы

1. Какие животные восприимчивы к туберкулезу, паратуберкулезу и псевдотуберкулезу?

2. Какие поражения вызывают эти возбудители?

3. Расскажите, какой пат.материал направляют в лабораторию для исследования.

4. Опишите морфологию возбудителей.

5. Опишите характер роста возбудителей на питательных средах.

 

Занятие № 8.
Возбудители БРУЦЕЛЛЕЗА и ТУЛЯРЕМИИ

Цель занятия:

1. Ознакомить студентов с методами исследования пат. материала на наличие возбудителя бруцеллеза и туляремии.

2. Изучить морфологию микроорганизмов.

3. Изучить характер роста возбудителей на питательных средах.

Материалы и оборудование : Единый бруцеллезный антиген для постановки РА и РСК. Набор готовых красок во флаконах в штативе для окраски мазков по Козловскому, дистиллированная вода, предметные стекла, фильтровальная бумага, бактериологические петли, пинцеты, пробирки с разведенным антигеном в штативе. Микроскопы.

 

БРУЦЕЛЛЕЗ

– хроническая инфекционная болезнь животных и человека. Особо опасная инфекция. У животных протекает чаще в скрытой форме, происходят массовые аборты, задержание последа, метриты, а также поражения суставов (бурситы), поражения нервной системы (полиневриты, радикулиты). Бруцеллёз – особо опасная инфекция, профессиональное заболевание животноводов, работников мясокомбинатов, ветеринарных врачей.

 Материал для лабораторной диагностики: молоко, абортированный плод с оболочками, желудок плода, печень, почки плода. От убитых животных – лимфоузлы, матка, яичники, вымя, семенники и др.

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ

 Род: Brucella. Виды:

· Br . melitensis (овец и коз, наиболее опасен для людей),

· Br. abortus (крупного рогатого скота)

· Br. suis (свиней),

· Br. ovis (инфекционного эпидидимита баранов),

· Br . canis (собак).

· Br. neotome (южноамериканских кустарниковых крыс)

Патогенез и факторы вирулентности:

Возбудитель в организм проникает алиментарным, контактным, половым, аэрогенным путями; может проникать даже через неповреждённую кожу. Очень опасно заражение через молоко больных животных, особенно молоко коз. Бруцеллы вначале размножаются в ближайших лимфоузлах, затем проникают во внутренние органы, инфекция принимает генерализованный характер. Бруцеллы являются внутриклеточными паразитами. Наиболее благоприятную среду для размножения они находят в беременной матке, что приводит к эндометриту, нарушению питания плода и аборту; факторы вирулентности у бруцелл - эндотоксины и ферменты патогенности – гиалуронидаза, каталаза, уреаза.

           Методы диагностики

Биопрепараты:   

Диагностические - см. серологические исследования. Иммунитет при бруцеллезе вначале нестерильный, формируется медленно. Роль антител – неэффективна. Для профилактики применяются:

1. Живая вакцина из штамма 19 Br.abortus.

2. Вакцина из слабоагглютиногенного штамма 82 Br.abortus, против бруцеллёза КРС.

3. Живая вакцина из штамма Рев-1 Br. melitensis.

4. Инактивированная адъювант-вакцина из штамма Br.abortus КВ 17/100 для КРС

                                    

ТУЛЯРЕМИЯ

 - природно-очаговая инфекционная болезнь, особо опасная инфекция. Характеризуется лихорадкой, увеличением лимфатических узлов (бубоны). У сельскохозяйственных животных обычно проявляется в септической форме. Проявляется симптомами поражения ЦНС, параличами, у КРС - маститами, у лошадей - абортами. Наиболее чувствительны зайцы (заячья чума), полёвки, хомяки, домовые мыши. Спорадически заболевают поросята, ягнята, лошади. КРС, пушные звери. Восприимчивы люди. Переносчики – грызуны, клещи, комары, москиты.

Материал для лабораторной диагностики: печень, почки, лимфатические узлы, трупы грызунов. Желательно транспортировать в замороженном виде или в 30%-м глицерине.

Методы диагностики

I . Бактериологический метод может быть применён только в специализированной противочумной лаборатории!

Морфология. Францизеллы – полиморфные, очень мелкие коккоподобные палочки. В мазках из жидких культур – изогнутые палочки, иногда нити. Часто образуются фильтрующиеся L-формы (не видны под микроскопом и проходят через бактериальные фильтры). Гр. «-», но по Граму окрашиваются плохо. По Романовскому-Гимзе – красновато-фиолетового цвета, иногда – биполярны. СПОРЫ  «-». КАПСУЛА «+» небольшая. ПОДВИЖНОСТЬ «-».

Культивирование.

Строгий аэроб. На простых питательных средах не растет! Культивируют на специальных средах: желточных, содержащих цистин. Практикуется также посев материала в желточный мешок развивающихся 12-дневных куриных эмбрионов – как в среду накопления.

Культуральные свойства. На среде Френсиса (с цистином, глюкозой и дефибринизированной кровью кролика) – образует беловатые, гладкие, блестящие колонии 1-2 мм с ровными краями или молочно-белый налёт. Вокруг колоний – характерная зеленоватая зона гемолиза. На желточной среде Мак-Коя образует нежный, сочный извилистый налёт – «шагреневая кожа»). Колонии – слизистой консистенции. На полужидкой желточной среде Дрожевкиной – слизистая плёнка. 

Биохимические свойства францизелл изучить очень трудно, так как возбудитель растёт только на специальных средах. В научных целях применяют специальные плотные среды с сахарами: на них францизеллы образуют кислоту из мальтозы, сахарозы, глицерина. Выделяют сероводород, редуцируют тионин, метиленовый голубой, малахитовый зелёный.

Биопроба

Заражают белых мышей и морских свинок подкожно, внутрибрюшинно или путем скарификации кожи на животе и втирания материала.

II . Серологический метод:

РА пробирочная и кровекапельная, с сывороткой крови больных. Антиген - тулярийный диагностикум (францизеллы, убитые формалином).

МФА (прямой и непрямой метод) – очень хороший экспресс-метод диагностики.

РП (по Асколи) – для исследования разложившихся трупов грызунов.

(Также применяют РНГА (реакция непрямой гемагглютинации), РН (Реакция нейтрализации антител), ИФА (иммуно-ферментный анализ).

Аллергический метод – внутрикожно людям вводят в предплечье тулярин – взвесь микробов, инактивированных при 70^о С. Реакцию учитывают через 24-48 часов.

II. Молекулярно-генетический метод  - ПЦР.

 

Биопрепараты :

1. Формолвакцина эмульгированная против пастереллёза К.Р.С.;

2. Полужидкая гидроокись алюминиевая формолвакцина против пастереллёза К.Р.С. и буйволов;

3. Сухие живые вакцины против пастереллёза птиц из штаммов АВ и К.

РОЖА СВИНЕЙ

 – инфекционная болезнь, которой болеют все виды животных, птицы, рыбы, дельфины, но чаще свиньи в возрасте от 3 до 12 месяцев, иногда болеет и человек. Источник возбудителя - больные животные, грызуны, загрязненные корма и вода.

Течение: молниеносная, острая, подострая и хроническая формы. Молниеносная – «белая рожа»: у животных наблюдается удушье, ослабление сердечной деятельности отек легких. Гибель через сутки. Острая – возбудитель проникает в кровь, размножается, выделяет токсины, увеличивается порозность сосудов и развиваются эритемные пятна, часто правильной геометрической формы – при надавливании на них кожа бледнеет, (при чуме свиней – кровоизлияния, кожа не бледнеет). Поражаются легкие, бронхи и паренхим. органы. Подострая (крапивница) – легкое течение, после появления пятен самочувствие животного улучшается. Хроническая – возбудитель локализуется в суставах и на клапанах сердца.

Материал для лабораторной диагностики: Кусочки паренхиматозных органов, трубчатая кость, сердце, сыворотка крови.

КЛАССИФИКАЦИЯ: род Erysipelothrix

· вид Erysipelothrix rhusiopathia е [эризипелотрикс рузиопатиэ]

Методы диагностики:

Биопрепараты:   

1.Противорожистая лечебная гипериммунная сыворотка.

2. Живая вакцина из штамма (не образующего Н₂S) ВР-2.

3.Концентрированная ГОА формолвакцина (убитая)

4. Ассоциированная вакцина против рожи и чумы свиней.

5.Противорожистая люминесцирующая сыворотка для МФА.

                        ЛИСТЕРИОЗ

 Листериоз -  зооантропонозная болезнь. У овец и коз - аборты, поражение ЦНС, слепота, «вертячка»; у коров – единичные аборты и маститы. У людей – моноцитарная (увеличение количества моноцитов) ангина, конъюнктивиты, может быть поражение ЦНС, сепсис; особенно опасен листерииоз беременных (внутриутробное заражение и гибель новорожденных).

Материал для лабораторной диагностики: паренхиматозные органы, голова, трупы мелких животных, абортированный плод.

КЛАССИФИКАЦИЯ: род Listeria

· Вид Listeria monocytogenes , (изредка у животных болезнь вызывает Listeria iwanovii )

Методы лабораторной диагностики отличаются при ветеринарном бактериологическом исследовании патологического материала и санитарно- микробиологическом исследовании пищевых продуктов.

В первом варианте материал на литериоз исследуют по следующее схеме.

I . Бактериологический метод

Готовят суспензию на физ. растворе 1:5 высевают на питательные среды. (Остальной пат.материал – мозг-  хранят при 4^оС 10 суток, затем, при необходимости, повторяют посев).

Морфология. Короткая, толстая палочка, в мазках из пат.материала часто в виде «палисада» \\\\ или римской цифры \/, в мазках из культур – кучками. Гр «+», СПОРЫ «-». КАПСУЛЫ «-». ПОДВИЖНЫ в молодой культуре при 20^оС (неподвижны при 37^оС).

Культивирование. Психрофил, рост при температуре от 4^о С до 38^оС, хорошо растёт на печёночных средах с глюкозой, глицерином, кровью. Элективная среда-МПА с 0,05% теллурита калия и 2-3% глицерина

Культурально-биохимические свойства . МПБ–слабое помутнение, осадок при встряхивании поднимается в виде косички. Н₂ S –.МПА – мелкие росинчатые, голубоватые колонии, со временем серо-белого цвета. На кровяных средах – узкая зона β гемолиза. МПЖ - не изменяет, Молоко – не изменяет, каталаза +, салицин +.

При посеве в жидкие среды с красками (лакмус, метиленовый синий, амидо чёрный и т.д.) листерии вызывают их редукцию, обесцвечивание.

Биопроба
    1. Конъюнктивальная проба на морских свинках: при введении капли культуры под нижнее веко - развивается кератоконъюнктивит.

2. Дерматонекротическая проба: Кроликам или морским свинкам внутрикожно в ухо вводят бульонную культуру – возникает очаговый некроз.

 3. Проба на мышатах-сосунках – при введении подкожно культуры – гибель.

II . Серологический метод:

Исследуют сыворотку больных животных в РСК и РА с Аг+ первой и второй серогрупп. Идентификацию агаровой культуры проводят в РА на стекле с диагностическими агглютинирующими сыворотками. Экспресс-метод - МФА.

Биопрепараты:

1.Листериозные диагностические агглютинирующие сыворотки.

2. Бактериофаги для лечения и диагностики L-2a, L-4a.

3. Сухая живая вакцина из штамма АУФ (авирулентная ослабленная УФ).

4. Антибиотики.

 

Методы диагностики

СТОЛБНЯК

 1.Антитоксическая сыворотка.

 2.Столбнячный анатоксин – для профилактики(токсин + формалин + квасцы + фенол).

БОТУЛИЗМ

1. Фармолквасцовая вакцина против ботулизма норок.

2. Гидроокисьалюминиевый анатоксин.

3. Антитоксическая сыворотка для людей.

4. Ассоциированная вакцина против ботулизма и пастереллеза.

 

ЭМКАР

1.Гидроокись алюминиевая формолвакцина (ГОАФВ) против ЭМКАРА КРС и овец.

 2. Ассоциированная вакцина против ЭМКАРА и лептоспироза.

 3. Ассоциированная вакцина против ЭМКАРА и сибирской язвы.

 

 ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЙ ОТЕК

1. Поливалентная анатоксическая сыворотка.

2. Концентрированная поливалентная вакцина против дизентерии, брадзота и энтеротоксимии.

 

АНАЭРОБНАЯ ДИЗЕНТЕРИЯ ЯГНЯТ

1. Концентрированная ГОА вакцина.

2. Сыворотка против дизентерии ягнят.

3. Сыворотка антитоксическая против дизентерии и энтеротоксимии.

 

             БРАДЗОТ

1. Поливалентная концентрированная вакцина против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отёка овец и анаэробной дизентерии ягнят.

2. Поливалентный анатоксин против клостридиозов овец.

 

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить морфологию возбудителя под микроскопом и зарисовать в практикуме.

2. Изучить характер роста возбудителя на жидких и плотных питательных средах.

 

Контрольные вопросы

1. Какие поражения вызывают возбудители анаэробных инфекций?

2. Расскажите, какой патматериал направляют для исследования в лабораторию при подозрении на анаэробные инфекции.

3. Опишите морфологию возбудителей.

4. Опишите характер роста возбудителей на питательных средах.

5. Как дифференцируют в лабораториях возбудителей анаэробных инфекций?

6. Какие биопрепараты применяют для диагностики, лечения и профилактики болезней, вызываемых изучаемыми возбудителями?

 

Занятие № 12.
Возбудители ЛЕПТОСПИРОЗА и КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА (вибриоза)

Цель занятия:

1. Ознакомить студентов с методами исследования пат материала на наличие возбудителя.

2. Изучить морфологию микроорганизма.

3.Изучить характер роста возбудителя питательных средах.

Материалы и оборудование : Набор готовых красок во флаконах в штативе, йодированный спирт, раствор Люголя, дистиллированная вода, предметные стекла, фильтровальная бумага, бактериологические петли, пинцеты, пробирки с микробными культурами в штативе. Микроскопы. Атлас.

ЛЕПТОСПИРОЗ

– природно-очаговая болезнь животных и человека. Характеризуется кратковременной лихорадкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Под действием эндотоксинов, повышается проницаемость сосудов, лизируются эритроциты, происходят кровоизлияния, развиваются гематурия и желтуха, поражается нервная система. Токсикоз может привести к гибели животного. Однако часто лептоспироз может протекать бессимптомно.

Основные носители лептоспир в природе - грызуны. Основной фактор передачи болезни – вода (в воде открытых водоемов патогенные лептоспиры сохраняются от 7 до 30 дней и более; во влажной почве выживают до 280 дней) Входные ворота инфекции - поврежденные кожа и слизистые оболочки. Наиболее восприимчивы: К.Р.С. свиньи, лисицы, песцы, менее - лошади, козы, овцы, буйволы, верблюды, олени, ослы, собаки, кошки, куры, утки. После переболевания у животных формируется иммунитет, характеризующийся серовариантной специфичностью, поэтому возможны реинфекции. Характерно длительное носительство. При вакцинации беременных животных - у молодняка формируется колостральный иммунитет.

Материал для лабораторной диагностики: При жизни: кровь, моча. Мочу необходимо исследовать в течение 3 часов с момента взятия. Посмертно - абортированный плод, кусочки паренхиматозных органов, почку, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с мочой, отбирают не позже 2 часов после гибели животных.

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ.

Род: Leptospira, Вид: Leptospira interrogans .

Наибольшее значение имеют серогруппы:

· Pomona,

· Tarassovi,

· Hebdomadis,

· Grippotyphosa,

· Icterohaemorrhagiae,

· Canicola.

Методы диагностики

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД

Микроскопия.  Лептоспиры плохо окрашиваются по Граму, хотя по строению клеточной стенки они Гр-. по Романовскому-Гимзе – также плохо красятся, розовые. Также их можно обнаружить в срезах из органов после импрегнации серебром по методу Левадити, но этот метод сложен и применяется только в научных целях. Поэтому  основной метод микроскопирования лептоспирпроводятв живом виде, в раздавленной капле, с конденсором «темного поля». Лептоспиры - спиралевидные бактерии длиной 6-30 мкм, имеют около 20 мелких, первичных завитков и 1-2 вторичных, придающих клетке форму букв «г, s, с». В темном поле - вид тонких, серебристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами. Гр. «-», СПОРЫ «-». КАПСУЛЫ«-». ПОДВИЖНЫ «+-» .

Культивирование и культуральные свойства.

Посев на жидкие водно-сывороточные питательные среды: (Уленгута, Ферворта-Вольфа, Терских, Любашенко,  и др.); факультативные анаэробы; оптимальная температура 28-30^oС; культивирование от 7 суток до 1-2 мес. При культивировании среда не изменяется, и наличие роста определяют микроскопией в темном поле. На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) лептоспиры образуют колонии S- и R-форм. S-форма - типичная для вирулентных лептоспир: колонии прозрачные, в виде диска с ровным краем.

Биохимические свойства.

Ферментация углеводов у лептоспир не доказана; обнаружены каталаза, оксидаза, липаза. 

Биопроба . Заражают золотистых хомячков 20-30-суточного возраста и крольчат-сосунов в возрасте 10-20 суток. На каждую пробу берут 2 животных; на 4-5-й сутки убивают одно животное и из органов готовят препарат «раздавленная капля». Второе животное убивают на 14-16-й сутки. Из сердца, печени и почек убитого или павшего животного, проводят посевы на питательные среды, готовят препарат «раздавленная капля» и ставят РМА.  

II . Серологический метод:

1. Реакция микроагглютинации (РМА). Пробы крови берут на 5-7-й день болезни, а при исследовании отдельных животных - повторно через
7-10 дней (парные сыворотки). РМА ставят в лунках агглютинационных планшет.Компоненты: Ат - исследуемая сыворотка в разведении 1:100, 1:500, 1:2500 (при необходимости - в разведениях 1:100, 1:200 и т. д. до титра) в объеме 0,1 мл; антиген - живые5-15-суточные культуры лептоспир 13-16 серогрупп в объеме 0,1 мл; контроль - антиген с физ. р-ром по 0,1 мл. Смесь выдерживают при t 30 ^oС 1 ч. PMA проявляется в склеивании лептоспир и образовании «паучков», включающих от 3-5 до нескольких десятков и более бактерий. Оценивается реакция в плюсах по 4-балльной системе под микроскопом в препарате «раздавленная капля». Положительная – РМА не менее ++.

РМА + в титре 1:50….1:100 и выше свидетельствуют об инфицированности данной особи лептоспирами и о возможном лептоспироносительстве.

2. РА ставят на стеклянной пластинке. Компоненты реакции: Ат-исследуемая сыворотка в разведении 1:100; Аг – лептоспирозные антигены 6 серогрупп.

3. МФА - для выявления лептоспир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве .

Биопрепараты

Для специфической профилактики:

 1. Депонированная поливалентная вакцина ВГНКИ против лептоспироза  с/х животных (в т.ч. лошадей) из штаммов Pomona, Tarassovi, Icterohemorragiaе, Canicola, Grippotyphosa, Hebdomadis. Иммунитет после вакцинации наступает через 14-20 суток и длится у молодняка до 6 месяцев, у взрослых животных – до 1 года. Также имеется вакцина против лептоспироза лошадей концентрированная, изготовитель ООО"Ветбиохим", Россия. Иногда вакцины могут вызвать побочные реакции у животных: повышение температуры, отёк, болезненность в месте введения.

2. Для собак – инактивированные вакцины типа «Nobivaс», Биокан, «Vanguard 5/L», «Eurican» которые защищают животных от серовариантов  L. icterohaemorrhagiae и L. сanicola. Особенно интересны с точки зрения профилактики лептоспироза собак такие вакцины, как «Duramune Max»  (США). В связи с изменением эпизоотологической ситуации фракция лептоспир  в этой вакцине была расширена: к прежним сероварам: Leptospira icterohaemorrhagiae и Leptospira canicola добавлены новые серовары: Leptospira grippotyphosa и Leptospira pomona.

Для специфической терапии: иммунная сыворотка против лептоспироза с/х и промысловых животных (из крови волов-продуцентов). Иммунитет сохраняется в течение 10-14 суток.

Прививка для собак против лептоспироза не является обязательной, но она одна из самых важных. Вакцинацию собак от этого заболевания делают внутримышечно через иглу, диаметром не менее 1,0 мм. Прививку для собак не делают беременным животным в первую неделю после родов, а также в течение 7 дней после дегельминтизации и 14 дней после обработки хлор-фосфорсодержащими препаратами, этих животных вакцинируют по истечении указанных сроков. Прививки для собак против лептоспироза делают животным, начиная с 1 месяца.

КАМПИЛОБАКТЕРИОЗ

1. Генитальный кампилобактериоз (энзоотический аборт). Болезнь поражает репродуктивную систему животных. Часто встречается у К.Р.С. реже у М.Р.С., иногда мелких животных – собак. У самцов кампилобактер длительное время сохраняется в организме и выделяется со спермой. Передаётся половым путём и при искусственном осеменении. Во влагалище у самок быстро размножается, попадает в матку, вызывая вагиниты и эндометриты, гибель эмбрионов в 2-4-недельном возрасте, аборты, бесплодие. 

2. Кишечный кампилобактериоз. Болезнь молодняка животных (щенков, котят, телят, ягнят, поросят, жеребят) и людей, проявляется энтеритами. Передается фекально-оральным путём. У людей кампилобактериоз – острая кишечная инфекция, встречается очень часто, связана с потреблением воды и пищи (мяса, молока, птицепродуктов, овощей), обсемененой возбудителем.

Материал для лабораторной диагностики: при абортах - абортированный плод (желудок плода, печень, легкое), плодовые оболочки, часть плаценты. При бесплодии К.Р.С. у коров берут влагалищную слизь с помощью специальных приспособлений (полистироловых стерильных пипеток или стерильным марлевым тампоном при помощи инструментов Жабоедова, Павловского).  От быков, баранов, кобелей – сперму, препуциальные смывы. Транспортировка смывов – в транспортных средах (тиогликолатном бульоне, среде Cary-Blair, щелочной пептонной воде). При подозрении на кишечный кампилобактериоз – фекалии, ректальные мазки.

КЛАССИФИКАЦИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ.

Возбудители генитального кампилобактериоза –

8 видов рода Campylobacter, в т.ч:

Вид Campylobacter fetus подвид venerealis,

Вид  Campylobacter fetus подвид fetus.

    Возбудители кишечного кампилобактериоза

Вид Са mpylobacter jejuni

Вид Са mpylobacter coli (коли-вибрион)

очень редко - Campylobacter fetus

 

Методы диагностики

I . Бактериологический метод

Морфология. Кампилобактеры имеют форму вибрионов или спирилл. Это Грам«-», полиморфные, тонкие, извитые микроорганизмы (спирально изогнутые палочки), имеют 1-2 крупных завитка, «~~»; «S» . Активно ПОДВИЖНЫЕ «+». СПОРЫ «-». КАПСУЛЫ «-». В мазке располагаются одиночно, беспорядочно или короткими цепочками: «крылья летящей чайки». Для ускоренной ориентировочной диагностики тонкий, фиксированный над пламенем мазок из пат. материала окрашивают водным раствором основного фуксина(1:5) 10-20с. Большая часть находящейся в мазке сопутствующей микрофлоры прокраситься за такой короткий срок не успевает, в отличие от кампилобактера.

Культивирование. Микроаэрофилы. Любят 10% концентрацию СО₂. На простых питательных средах не растут. Используют ПЖА на печеночной и сердечной воде, эритрит-агар с 5% гемолизированной крови барана, специальные фирменные среды с селективными добавками типа «Campylobac Аgar Skirrow (среда Скирроу)». Посев обильный, уколом.

На ПЖА рост кампилобактеров проявляется в виде серо-голубоватого диска или кольца на 0,1-0,4 см ниже поверхности среды. Со временем диск поднимается вверх, образуя на поверхности пленку. Сама среда остается прозрачной. На плотных специальных средах мелкие - (1мм) округлые, прозрачные, бесцветные влажные колонии. 

Чистую культуру получить очень трудно. Для ограничения роста посторонней микрофлоры применяют специальные методики:

1. Используют элективные среды различных фирм с селективными добавками-ингибиторами (рифампицин, фузидин и др.), сафранино-железо-новобиомициновую среду СЖН). Если культура кампилобактера  чистая – СЖН розового цвета, если нет - желтого.

2. Используют способность кампилобактеров проходить через мембранные фильтры с диаметром пор 0,5-0,6 мкм. Стерильные мембранные фильтры помещают на поверхность плотной питательной среды и наносят на них несколько капель 10%-й суспензии исследуемого материала. Через 30 мин фильтры убирают, чашки инкубируют.

 3. «Метод пастеровских пипеток»: стерильной пастеровской пипеткой набирают в капилляр ПЖА и немного смешанной культуры. Нижнюю часть пипетки запаивают. Инкубируют. Через 3-4 суток кампилобактеры растут в пипетке под поверхностью среды в виде кольца. Затем полученную ЧК, берут другой пипеткой и пересевают на МППА.

4. Метод Шаталова. В пробирку помещают стеклянную трубку и заливают ПЖА. В трубку вносят смешанную культуру кампилобактеров. Вследствие подвижности кампилобактеры проникают из трубки в среду и растут в ПЖА в виде кольца, остальные микробы останутся в трубке.

Биопроба

Выделенной ЧК заражают морских свинок, хомячков, кроликов (у беременных самок – аборт).Для освежения, выделенной ЧК заражают куриные эмбрионы, после чего кампилобактер восстанавливает свои свойства.

II . Серологический метод:

1. Серологическая идентификация культур – в пластинчатой, а затем в пробирочной РА со стандартными моноспецифическими сыворотками.

2. Для обнаружения кампилобактеров в патматериале и культуре – МФА

3. Для обследования коров - РАВС (РА с влагалищной слизью). Влагалищную слизь берут тампоном и помещают в пробирку с формалинизированным 3% раствором NaCl. Тампон отжимают, а жидкость центрифугируют. С полученным экстрактом ставят РА (в слизи ищут Ат), используя биофабричные антигены-диагностикумы. (у овец так же ставят реакцию с сывороткой крови).

4. У людей при кишечной форме кампилобактериоза применяют РСК, РДСК.

БИОПРЕПАРАТЫ

Диагностические сыворотки и антигены.

Для профилактики:

1.Эмульсининактивированная вакцина против кампилобактериоза К.Р.С. и овец.

2.Ассоциированные вакцины против кампилобактериоза, лептоспироза и сальмонеллёза.

 

Задания для самостоятельной работы

1. Изучить морфологию возбудителей по атласу и зарисовать в практикуме.

2. Используя атлас изучить характер роста возбудителей на питательных средах.

Контрольные вопросы

1.Какие поражения вызывают возбудители лептоспироза и кампилобактериоза?

2. Расскажите, какой патматериал направляют в лабораторию для исследования.

3. Опишите морфологию возбудителей.

4. Опишите характер роста возбудителей на питательных средах.

 

Занятие № 13. МОРФОЛОГИЯ И КЛАССИФИКАЦИЯ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ГРИБОВ

Видоизменения мицелия

Мицелиальные гифы могут видоизменяться, образуя:

· ризоморфы (ризоиды)  -  горизонтальные и вертикальные выросты, которые    служат для прикрепления к субстрату и потребления из него питательных веществ.

· анастомозы - боковые выросты грибницы, представляющие своеобразные мостики соединения гиф между собой.

· тяжи, или шнуры - шнуровидные образования, состоящие из параллельно расположенных и часто сросшихся в продольном направлении гиф. Тяжи характерны для базидиальных грибов (например, белый домовой гриб и др.).

· склероции - многоклеточные покоящиеся органы грибов, покрытые         многослойной оболочкой, предназначенные для распространения и переживания неблагоприятных условий. Склероции, как правило, темноокрашенные, чаще черные, состоят из толстостенных гиф. Внутренняя часть склероция белая и состоит из обычных тонкостенных, богатых питательными веществами гиф.

· мицелиальные стромы - сплетение и уплотнение мицелия склероцилиального типа, пронизывающего субстрат. На поверхности или внутри стром образуются спороносящие органы или плодовые тела или другие органы спороношения. Стромы могут быть мягкими или деревянистыми, различной формы и окраски.

· Плодовые тела.

· Артроспоры или оидии– мелкие, прямоугольные, многогранные или овальные, спороподобные мицелиальные клетки с тонкой оболочкой, образующиеся в результате фрагментации мицелия, располагаются часто в виде цепочек (рис. 1 а)  

· Хламидоспоры  – крупные, овальные, спороподобные мицелиальные клетки, окруженные толстой оболочкой, образующиеся в результате распада мицелия при наступлении неблагоприятных условий. Хламидоспоры способны долго сохраняться, устойчивы к неблагоприятным воздействиям (рис.1 б).

· Геммы - мицелиальные клетки, по способу образования напоминающие хламидоспоры, но отличающиеся от них непостоянством формы и величины.

· Бластоспоры – округлые клетки, формирующиеся на мицелии путём почкования.  Бластоспоры способны к дальнейшему почкованию и отпадают, достигнув размера материнской клетки. Чаще всего встречаются у дрожжевых грибов.

Размножение грибов.

Существуют три способа размножения грибов.

1.Вегетативное размножение.

Вегетативное размножение осуществляется без специальных органов размножения – участками мицелия и спорами, образующимися при распаде мицелия: артроспорами (оидиями), хламидоспорами, геммами, бластоспорами и др (см. выше). Все виды таких вегетативных спор, а точнее спороподобных видоизменений мицелия, являются формами изменённого мицелия и способны при благоприятных условиях прорастать в мицелий.

 

                 

а)                                                   б)

Рис. 1. Видоизменения мицелия при вегетативном размножении:
а - оидии; б - хламидоспоры.

2. Бесполое размножение с образованием спор.

На определенном этапе вегетативного размножения грибов образуются специальные плодоносящие гифы воздушного мицелия.

У низших грибов споры формируются внутри шаровидных мешочков – спорангиев. Такие споры называются спорангиоспорами и являются внутренними спорами - эндоспорами. Плодоносящий гиф низших грибов, на котором образуются спорангии, называется спорангиеносцем (рис.2).

4; 3; 2; 1.

 Рис. 2. Плодоносящие гифы низших грибов (мукор): 1 -  спорангиоспоры;
2 - спорангии; 3 - спорангиеносцы; 4 -  гифы.

 

У высших грибов стадия бесполого размножения называется         анаморфой. Грибы, в размножении и распространении которых анаморфа играет главенствующую роль, а стадия полового размножения практически не встречается, называются анаморфными. В стадии бесполого размножения на кончиках плодоносящих гифов образуются утолщения (везикулы), а на них – расходящиеся в разные стороны удлинённые цилиндрические клетки - стеригмы (или метулы). На стеригмах размещаются особые вытянутые клетки – фиалиды, которые продуцируют цепочки из спор – конидий. Конидии – это споры, находящиеся снаружи плодоносящего гифа – то есть экзоспоры. Плодоносящий гиф высших грибов, на котором образуются конидии, называется конидиеносцем.

Конидиеносцы отходят вверх от особых клеток мицелия – опорных клеток (рис.3).

Рис. 3. Плодоносящие гифы высших грибов: a - аспергилл; б - пеницилл;
1 – конидии; 2 - фиалиды; 3 - стеригмы (или метулы); 4 - вздутие (везикула), 5 - конидиеносцы; 6 - опорная клетка.

Конидии и конидиеносцы у разных видов микромицетов могут быть очень разнообразны. Они бывают окрашены в различные цвета, варьируют в размерах, бывают круглые, овальные, цилиндрические, игловидные, звездчатые и др.; состоят из разного числа клеток - от одной до множества. Многоклеточные конидии называют макроконидиями. Перегородки между конидиями могут располагаться поперечно и продольно, могут иметь придатки. Конидии могут агрегироваться (объединяться) в тесные группы, образуя коремию; располагаться тесным слоем на специальной поверхности из переплетения гиф, образуя ложе; формироваться в спе­циальных вместилищах разнообразной формы и строения – пикнидах, и т.д.

Кроме конидий у микромицетов могут образовываться также         микроконидии – алейрии. Это мелкие образования круглой либо грушевидной формы. Они возникают на месте выпячивания стенки мицелия, куда переходит  его содержимое  (протоплазма, ядро), то есть вне клетки гриба. Располагаются алейрии часто по бокам мицелия на равном расстоянии друг от друга; для своего роста используют весь материнский мицелий, от которого остаются лишь обрывки, лишенные развития.

3.Половое размножение.

Грибы, обладающие способностью к половому размножению, называют совершенными. Грибы, которые не способны размножаться половым путем, называют несовершенными.

 Половое размножение грибов состоит из трех этапов: плазмогамия, кариогамия, мейоз. При половом размножении у грибов появляются специализированные гифы,  на которых образуются органы полового спороношения – сумки (аски) у грибов-аскомицетов, базидии у грибов-базидиомицетов. Внутри асков развиваются аскоспоры, на поверхности базидии – базидиоспоры.

 

Рис 4                                                     Рис. 5

Рис. 4. Строение грибов рода Mucor : 1. спорангиоспоры; 2. спорангии;
3. спорангиеносец; 4. зрелые спорангиеспоры в спорангии; 5. общий вид мукора
при микроскопии; 6. колумелла (колонка); 7. распространение спорангиеспор.

Рис. 5. Строение грибов рода Rhizopus : слева - мицелий при большом
увеличении; справа, внизу - мицелий при малом увеличении; вверху - спорангий
в разрезе; а - спорангиеносец; б - ризоиды; в – столоны.

Род Rhizopus - «хлебная плесень».  Вызывают так называемую «мягкую гниль» ягод, плодов и овощей. Rhizopus  распространен в сырых помещениях, часто обитает на мучных, крупяных и кондитерских изделиях. У ризопуса от мицелия отходят стелющиеся нити - столоны, посредством которых плесень прикрепляется к субстрату толстыми корневидными образованиями - ризоидами, напоминающими корневые волоски. При развитии волосков образуется узел, из которого отходят спорангиеносцы, располагающиеся пучками.

 

Высшие грибы:

 Большое значение в хозяйственной деятельности человека имеют несовершенные анаморфные микроскопические грибы класса гифомицетов  

               

Род пенициллиум – Penicillium ( «кистевик») . Конидиеносцы на вершине кистевидно разветвлены, конидии в цепочках, поэтому гифа напоминает по внешнему виду кисточку (рис.6). 

Пенициллиумы широко распространены в почве. Большое зна­чение имеют представители рода, синтезирующие биологически активные вещества. Обитают на сырах, испорченных продуктах и органических отходах, развиваются в виде серовато-голубовато-зеленоватого налета на продуктах, хранящихся в сырых плохо вентилируемых помещениях. Колонии грибов этого рода на питательной среде плотные, чаще бархатистые, иногда пушистые. Окраска разнообразная, но большинство имеют голубовато-зеленый, зеленый и серо-зеленый оттенки. Многие виды издают острые запахи, в частности плесенный, затхлый. Грибы этого рода продуцируют опасные микотоксины.

Рис.6. Penicillium : а - конидии; б - прорастающие конидии
и раз­витие мицелия; в - развитие конидиеносца;
г - различные конидиеносцы.

Род аспергиллус - Aspergillus (аспергиллюс, «леечная плесень»).

 Конидиеносцы у аспергиллуса отходят вверх от особых клеток мицелия – опорных клеток. Верхние части конидиеносцев образуют  «пузыри», от которых отходят стеригмы. На стеригмах или радиально, или только в верхней части размещаются фиалиды, продуцирующие одноклеточные конидии, располагающиеся цепочками. Чем выше по цепочке, тем конидии крупнее, массивнее окрашены и более зрелые, имеют шаровидную форму серовато-сине-зеленого, желто-зеленого или другого цвета, что и придаёт цвет плесневой колонии на субстрате.

Грибы из рода аспергилл – одни из наиболее распространённых гифо- мицетов. Естественное местообитание их – верхние горизонты почвы, особенно в южных широтах. 

Рис. 7. Схема строения гриба Aspergillus.

 

Аспергиллы, как и пенициллиум, являются возбудителями порчи различных пищевых продуктов, и в частности, плодов и овощей, особенно при хранении (различные гнили). Кроме того, некоторые аспергиллы являются патогенными для человека и животных, вызывают заболевания верхних дыхательных путей, слизистой рта, кожи (аспергиллез). Другие виды аспергиллов выделяют ядовитые вещества - микотоксины, вызывающие пищевые отравления.

Аспергиллы являются продуцентами органических кислот и применяются для промышленного получения лимонной кислоты. Многие аспергиллы используются также для получения ферментных препаратов.

 

Род кладоспориум – Cladosporium ( гроздевидная плесень). Имеет слаборазвитый мицелий, на воздушных гифах которого формируются крупные оливково-зеленые овальные или круглые конидии, группирующиеся в гроздевидные скопления. Эта плесень продуцирует темный пигмент и окрашивает субстрат, вследствие чего под ее колониями появляются черные пятна. Конидии одноклеточные или с одной-двумя перегород­ками, овальные, окрашенные. Фитопатогенные виды: C . fulvum - возбудитель бурой пятнистости листьев томата, С. cucumerinum - возбудитель бурой пятни­стости плодов огурца (рис.8).

Рис. 8. Грибы рода Cladosporium: спороносные структуры – тонкие,
древовидные ветвящиеся гифы, заканчивающиеся гладкими
или шероховатыми сферическими или овальными спорами.

Cladosporium herbarum поражает мясо, колбасы, хлопковое во­локно, пшеницу и другие хлебные злаки, особенно ослабленные растения в период их дозревания, проявляется в виде оливково-черного бархатистого налета (спороношение гриба). При холодильном хранении на различных пищевых продуктах обнаруживается в виде бархатистых темно-оливковых (до черного цвета) пятен. Встречается на сыре, яйцах, масле и внутри масла, так как может развиваться при малом доступе воздуха.

 

Род фузариум - Fusarium . Конидиальное спороношение чрезвычайно разнообразно по морфологии конидий. Грибы этого рода имеют два типа ко­нидий: макро- и микроконидии. Макроконидии многоклеточные, серповидно изогнуты. Микроконидии чаще одноклеточные. Мицелий чаще белый, бело-розовый, розово-сиреневый или бурый. У отдельных видов образу­ются хламидоспоры, в некоторых случаях – склероции (рис. 9).

Большую опасность представляют возбудители корневых гнилей и сосудистых микозов сельскохозяйственных и лесных культур (например, «сухая гниль» картофеля). Некоторые представители фузариев образуют токсические для человека и животных вещества. Наиболее известные заболевания – фузариотоксикозы - «пьяный хлеб» (возбудитель F. graminearum) и алиментарно-токсическая алейкия (возбудитель F. sporotrichioides) – связаны с употреблением в пищу продуктов из пораженного зерна.

 

Рис. 9. Спороносные структуры рода Fusarium: мелкие микроконидии
и крупные макроконидии серповидной формы.

 

Род ботритис - Botrytis. Конидиеносцы древовидно разветвленные, кони­дии эллиптические, собраны в головки (рис. 10). Многие виды паразитируют на растени­ях и вызывают гнили. В. cinerea - возбудитель серой гнили плодов, ягод и ово­щей, В. allii - возбудитель шейковой гнили лука.
Род Botrytis вызывают порчу капусты, моркови, помидоров, а вместе с другими грибами – гниль сахарной свеклы, может вызывать микотоксикозы.

 

Рис. 10. Род Botrytis древовидно разветвленные кони­дии

 

Рис . 11 . Trichophyton       Рис . 12. Microsporum       Рис . 13. Фавусное поражение волоса.            

Микроспорию можно дифференцировать от трихофитии также с помощью лабораторного  люминесцентного  анализа, который дает возможность проводить раннюю диагностику заболевания. Для этого чашки Петри с исследуемым материалом помещают на расстоянии 20 см. от ртутно-кварцевой лампы (ПРК-2 или ПРК-4 с фильтром Вуда) и через 3-5 минут после включения лампы просматривают в затемненной комнате под ультрафиолетовыми лучами. При поражении микроспорией волосы дают яркое зеленоватое свечение.

При фавусном поражении  в пораженных чешуйках,  волосах и перьях птиц элементы гриба  полиморфны и расположены внутри волоса, но не заполняют всей его толщи (рис. 14). Полиморфизм элементов заключается в том, что могут встречаться длинные и короткие, тонкие и толстые, булавовидные нити мицелия, крупные, мелкие, круглые, овальные или полигональные споры. Характерным является обнаружение внутри волоса, кроме элементов гриба, пузырьков воздуха различной величины. Щитки при микроскопическом исследовании состоят из массы спор различной величины и формы и коротких, извитых нитей мицелия.

Коли-титр молока.

Коли-титр чаще всего определяют в пастеризованном молоке. Для его определения используется среда Кесслера, так как содержащийся в ней генцианвиолет подавляет размножение молочнокислых бактерий и не препятствует росту кишечной палочки.

Для определения коли-титра цельное пастеризованное молоко засевают в 6 пробирок со средой Кесслера: в 3 пробирки вносят по 1 см³ цельного молока, а в остальные 3 – по 1 см³ разведения молока 1:10. Посевы инкубируют при 44°С в течение 24 часов, после чего из забродивших проб делают пересевы на среду Эндо и инкубируют при 37°С. Из выросших колоний красного цвета готовят мазки, окрашивают по Граму, тестируют бактерии на наличие оксидазы и идентифицируют как E. сoli. Определяют величину коли-титра и проводят оценку молока, пользуясь специально составленными таблицами.

Для обнаружения в молоке патогенных бактерий делают посевы на соответствующие элективные и дифференциально-диагностические среды с последующим выделением чистых культур и их идентификацией. Молоко исследуют на обнаружение патогенных стафилококков, патогенных стрептококков, синегнойной палочки, возбудителей туберкулеза и бруцеллеза.

 

По существующим ГОСТам при отсутствии в молоке патогенных микробов допускается содержание в 1 см³ молока 75000 бактерий при коли-титре 3 см³ (сорт А) или 150000 при коли-титре 0,3 (сорт Б)

 

Задания для самостоятельной работы:

1. Отобрать пробу водопроводной воды и посеять ее в МПА для определения общего микробного числа воды.

2. Определить коли-титр в демонстрационных посевах на среде КОДА.

3. Подсчитать колонии в чашках Петри на МПА.

 

Контрольные вопросы:

1. Как в воде определяют общее микробное число?

2.Что такое ОКБ и ТКБ.

2. Что такое коли-титр и коли-индекс? Как их определяют?

3. Какое санитарное значение имеет определение коли-титра воды, молока?

4. Какие патогенные микробы могут присутствовать в молоке.

5. Назовите санитарные показатели чистой водопроводной воды, воды открытых водоемов, молока.

 

 

ЗАНЯТИЕ № 16

Цель занятия:

1. Ознакомить студентов с санитарно-бактериологическими методами исследования воздуха и почвы.

2. Оценить санитарное и практическое значение этих исследований.

Материалы и оборудование : Чашки Петри с МПА, набор пробирок со средой Кода, Кесслера, стерильный физраствор; демонстрация бродильного (титрационного) метода в среде Кода, колонии воздушной микрофлоры в чашках Петри; пробы стерильные градуированные пипетки; аппарат Кротова, фильтр Зейтца, мембранные фильтры, счетная камера.

   

 

 

СОДЕРЖАНИЕ

ПРЕДИСЛОВИЕ. 3

 

Занятие № 1. БАКТЕРИИ ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ.. 5

 

Занятие № 2. КОККИ ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ 9

 

Занятие № 3. ВОЗБУДИТЕЛИ САЛЬМОНЕЛЛЁЗОВ.. 13

 

Занятие № 4. ВОЗБУДИТЕЛЬ КОЛИБАКТЕРИОЗА.. 16

 

Занятие № 5. ВОЗБУДИТЕЛЬ САПА.. 20

 

Занятие № 6. СИБИРСКАЯ ЯЗВА.. 22

 

Занятие № 7. ВОЗБУДИТЕЛИ ТУБЕРКУЛЕЗА, ПАРАТУБЕРКУЛЕЗА, ПСЕВДОТУБЕРКУЛЕЗА.. 26

 

Занятие № 8. ВОЗБУДИТЕЛИ БРУЦЕЛЛЕЗА и ТУЛЯРЕМИИ.. 32

 

Занятие № 9. ВОЗБУДИТЕЛИ ПАСТЕРЕЛЛЁЗА, РОЖИ и ЛИСТЕРИОЗА.. 36

 

Занятие № 10–11. ВОЗБУДИТЕЛИ АНАЭРОБНЫХ ИНФЕКЦИЙ.. 41

 

Занятие № 12. ВОЗБУДИТЕЛИ ЛЕПТОСПИРОЗА
И КАМПИЛОБАКТЕРИОЗА (вибриоза) 49

 

Занятие № 13. МОРФОЛОГИЯ И КЛАССИФИКАЦИЯ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ГРИБОВ.. 55

 

Занятие № 14. МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ МИЦЕЛИАЛЬНЫХ ГРИБОВ.. 69

 

Занятие № 15. САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОБЪЕКТОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ.. 78

 

Занятие № 16. БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ, МОЛОКА, КОРМОВ.. 81

  СЛОВАРЬ ТЕРМИНОВ И АББРЕВИАТУР……………………………….. 88

Исправить содержание

Подписано в печать 09.07.13г. Зак. № 34

Объем 5,8 п.л. Тираж 100 экз.

Издательство СПбГАВМ, ул. Черниговская, д.5

 

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ

ДЕПАРТАМЕНТ НАУЧНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ ПОЛИТИКИ
И ОБРАЗОВАНИЯ

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ
АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ

ПРАКТИКУМ ПО ДИАГНОСТИКЕ

БАКТЕРИАЛЬНЫХ БОЛЕЗНЕЙ

 ЖИВОТНЫХ

учебно-методическое пособие

к лабораторно-практическим занятиям