Иммунологические методы (ИМ) используют для выявления титра АТ в сыворотке крови (серодиагностика) и для обнаружения АГ в биологических жидкостях. Общие закономерности ИМ: 1)исследование производится in vitro; 2)проявляются при иммунологическом соответствии (гомологичности) АГ и АТ; 3)протекают в 2 фазы (невидимая и видимая). Для количественной хар-ки ИМ исследования используют понятия чувствительность и специфичность. Чувствительность=число положительных реакций у истинных больных:число обследованных больных с подтвержденным диагнозом. Специфичность=число отрицательных реакций в контрольной группе:число обследованных в контрольной группе. ИМ делят на 3 группы: 1)ИМ, основанные на прямом взаимодействии АГ с АТ (феномены агглютинации, преципитации, гемагглютинации, иммобилизации); 2)ИМ, основанные на опосредованном взаимодействии АГ с АТ (реакции непрямой гемагглютинации, коагглютинации, латекс-агглютинации, угольной агломерации, бентонит-агглютинации, связывания комплемента); 3)ИМ с использованием меченых АТ или АГ (метод флюоресцирующих АТ, иммуноферментный и радиоиммунный анализы, спиниммунологический методы).

Реакция агглютинации (РА)

Р-ция основана на взаимодействии поверхностных АГ бактерий и др. корпускулярных частиц с АТ и протекает в 2 фазы: 1)специфическая фаза – связывание детерминантной группы (эпитопа) АГ с паратопом – активным центром иммуноглобулина (невидимая фаза); 2)неспецифическая (видимая) фаза – образующийся комплекс (АГ+АТ) утрачивает растворимость и выпадает в осадок в виде хлопьев. РА применяют для обнаружения специфических АТ в сыворотке крови и, наоборот, при помощи стандартной агглютинирующей сыворотки можно идентифицировать выделенные микробы. Для постановки реакции необходимо: 1)исследуемая сыворотка крови; 2) 0,85% раствор NaCl (физиологический раствор); 3)антигенный диагностикум, т.е. взвесь микроба определенной концентрации.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА)

Сущность реакции в том, что молекулы АГ адсорбируются на поверхности эритроцитов. Такие «нагруженные» АГ эритроциты приобретают способность агглютинироваться иммунной сывороткой, специфичного для данного АГ. Эритроциты склеиваются и выпадают в осадок, образуя на дне пробирки гемагглютинат. В положительном случае эритроциты оседают на дне лунки в виде ровного слоя кл-к со складчатым или зазубренным краем (перевернутый зонтик), в отрицательном – оседают в виде пуговки или колечка.

Реакция преципитации

В реакции участвуют мелкодисперсные АГ (преципитиногены), кот. связываются с соответствующими АТ (преципитинами). Чаще всего эту реакцию применяют для выявления АГ по известной иммунной преципитирующей сыворотке, содержащей АТ-преципитины. Это-качественный метод исследования. В узкую преципитационную пробирку добавляют стандартную иммунную сыворотку и на нее осторожно наслаивают жидкость, содержащую определяемый АГ. Появление на границе двух жидкостей кольца (преципитина) говорит о наличии АГ возбудителя сибирской язвы в исследуемой жидкости.

Реакция иммунного лизиса

АТ-лизины способны расвторять микробы или др. клеточные элементы. Но свое действие лизины могут проявлять только в присутствии комплемента. Для постановки реакции готовят ряд разведений инактивированной нагреванием сыворотки, затем добавляют живую микробную взвесь и комплемент. После инкубации в термостате реакцию оценивают с помощью повторных количественных высевов. В качестве контроля используют исследуемую культуру микробов, нормальную сыворотку и комплемент.

Реакция связывания комплемента (РСК)

РСК используют для лабораторной диагностики венерических болезней, риккетсиозов, вирусных инфекций. Реакция протекает в 2 фазы. Первая фаза – взаимодействие АГ и АТ при обязательном участии комплемента, вторая – выявление результатов реакции при помощи индикаторной гемолитической с-мы. Разрушение эритроцитов гемолитической сывороткой происходит в случае присоединения к гемолитической системе комплемента. Если комплемент адсорбировался ранее на комплексе АГ-АТ, то гемолиз эритроцитов не наступает.

Метод флюоресцирующих антител (МФА)

Этот метод явл. экспрессным и высокочувствительным. При прямом методе к исследуемой взвеси микробов, фиксированной на стекле, добавляют сыворотку, меченную флуорохромом. Образующийся комплекс АГ-АТ при освещении ультрафиолетовыми лучами дает ярко-зеленое свечение. При непрямом методе МФА используют обычные диагностические сыворотки против какого-либо вида микробов. Добавление этой сыворотки к испытуемой взвеси микробов вызывает образование комплекса АГ-АТ. Этот комплекс выявляется с помощью универсальной флуоресцирующей сыворотки, содержащей АТ гамма-глобулиновой фракции крови того вида животного, от кот. была получена диагностическая сыворотка.

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Принцип ИФА: 1)АТ или АГ фиксируются не на стеклах, а на внутренней поверхности синтетических планшетов для иммунологических реакций; 2)в качестве метки используется не флюорохром, а фермент (пероксидаза, щелочная фосфатаза, уреаза); 3)реакция учитывается не под микроскопом, а визуально, после добавления в лунку субстрата для данного фермента.