При диагностике бруцеллеза используют бактериологический, биологический и серологический методы, аллергическую пробу и полимеразную цепную реакцию (ПЦР).

В связи с высокой контагиозностью возбудителей, бактериологическая диагностика, а также другие исследования с живыми бруцеллами, выполняются только в специальных лабораториях с соблюдением правил работы с особо опасными инфекциями.

Материал для исследований: кровь, моча, грудное молоко, костный мозг, суставная жидкость, ликвор, желчь и др.

Бактериологический метод. Принимая во внимание системный характер поражений, в первую очередь исследуют кровь. Образцы культивируют в МПБ при 37°С, засевают 2 флакона и в одном создают повышенную концентрацию углекислого газа. Через 4-5 суток в этом флаконе наблюдают рост бруцелл; среда может оставаться слегка мутной или прозрачной. После пересева на твердые среды отмечают характерный рост колоний, из которых отсеивают чистые культуры с последующей идентификацией видовых свойств. Хорошие результаты дают посевы костного мозга, которые выполняют аналогично.

Ускорения и увеличения высеваемости бруцелл удается достичь при посеве исследуемого материала в желток свежих куриных яиц или в желточный мешок куриного эмбриона. Зараженные куриные эмбрионы выдерживают в термостате при 37°С 5 дней, после чего желтки высевают на плотные и жидкие среды.

Биологический метод. Его используют для выделения возбудителя при отрицательном результате бактериологического метода. Метод заключается в заражении исследуемым материалом восприимчивых лабораторных животных – морских свинок или белых мышей – подкожно или внутрибрюшинно. Через 20-25 дней животных забивают и проводят бактериологическое исследование.

Идентификация выделенной культуры. Для отличия бруцелл от других бактерий используют окраску мазков из испытуемой культуры по способу Козловского. Мазки окрашивают раствором сафранина (красного цвета) при подогревании, промывают водой, докрашивают раствором малахитового или бриллиантового зеленого и снова промывают водой. В результате окраски бруцеллы сохраняют красновато-розовый цвет, а остальные бактерии приобретают зеленую окраску.

Испытуемая культура должна агглютинироваться диагностической противобруцеллезной сывороткой в реакции агглютинации на стекле (ориентировочной) и в развернутой реакции агглютинации с возрастающими разведениями сыворотки (до ее титра), причем агглютинация культуры должна достигать не менее 2/3 сыворотки.

Если испытуемая культура обладает вышеперечисленными свойствами, ее относят к бруцеллам и у больного диагностируют бруцеллез.

Для установления вида и биовара бруцелл проводят тестирование выделенной культуры по комплексу дифференциальных признаков: потребность в СО₂, образование Н₂S, бактериостатическое действие анилиновых красителей тионина и фуксина, агглютинация монорецепторными сыворотками А и М, способность к метаболическому окислению некоторых кислот и углеводов.

Серологический метод. Серологический метод заключается в постановке серологических реакций с целью выявления в исследуемой сыворотке антител против бруцелл. Чаще всего применяют реакции агглютинации Хеддельсона и Райта.

Реакция Хеддельсона (ускоренная, ориентировочная). Ее ставят на стекле с неразведенной сывороткой и единым бруцеллезным диагностикумом. Обезжиренное стекло расчерчивают на 6 квадратов (4х4 см), затем в первом квадрате ставят номер испытуемой сыворотки, на 2,3 и 4 опытные квадраты микропипеткой наносят сыворотку в объемах 0,04-0,02-0,01 мл и добавляют в каждую каплю по 0,03 мл диагностикума. 5-й квадрат – контроль сыворотки (0,02 мл сыворотки + 0,03 мл изотонического раствора NaCl), 6-й квадрат – контроль антигена (0,03 мл диагностикума + 0,03 мл изотонического раствора NaCl). При положительной реакции во всех трех опытных дозах сыворотки или в дозах 0,02 и 0,04 мл появляются хлопья, окрашенные в синий цвет. Реакцию Хеддельсона используют при массовых обследованиях, например в бруцеллезном очаге. С сыворотками, давшими положительный результат, обязательно ставят реакцию Райта.

Реакция Райта – развернутая реакция агглютинации, которую проводят в пробирках с разведениями сыворотки от 1:50 до 1:800. Для разведения сыворотки используют изотонический раствор NaCl, в который добавлен фенол (0,5%). В качестве антигена берут единый бруцеллезный диагностикум, разведенный 1:10. Диагностический титр реакции Райта 1:200.

Более надежные результаты дает исследование парных сывороток, взятых с интервалом 7-10 дней, что позволяет выявить динамику выработки антител (у вакцинированных титр сыворотки не изменяется). Используют и другие серологические реакции – РНГА, РСК, непрямую РИФ, ИФА.

Внутрикожная аллергическая проба Бюрне. Выявляет аллергизация организма к бруцеллезу, становится положительной к концу первого месяца болезни и сохраняется в течение жизни, поэтому ее используют для распознавания различных форм бруцеллеза, в том числе и хронических. Пробу ставят на сгибательной поверхности предплечья, куда внутрикожно вводят 0,1 мл бруцеллина (фильтрат 3-х недельной бульонной культуры бруцелл). При положительной реакции через 24 часа на месте введения появляется гиперемия и отечность диаметром 3-6 см, при резко положительной реакции диаметр отека превышает 6 см. Положительный результат пробы Бюрне наблюдают и у вакцинированных людей.

Лечение и профилактика

В остром и подостром периоде назначают антибиотики широкого спектра действия: препараты группы тетрациклина, рифампицин, гентамицин и др. Рекомендуется проводить лечение одновременно 2-3 различными антибиотиками, их сочетание с бактримом (бисептол). Для предупреждения рецидивов назначают противобруцеллезный иммуноглобулин.

При бруцеллезе обязательна патогенетическая терапия - десинсибилизирующие препараты, дезинтоксикационные средства. Назначают и симптоматические средства, физиотерапию, санаторно-курортное лечение.

Для предупреждения заболеваемости бруцеллезом проводят противоэпидемические и противоэпизоотические мероприятия с привлечением ветеринарной службы.

В настоящее время вакцинация населения показана только в активных очагах бруцеллеза мелкого рогатого скота. Используют живую бруцеллезную вакцину (вакцинный штамм B.abortus 19 ВА), эффективность которого недостаточна, и при попадании в организм больших доз возбудителя может возникнуть заболевание. В то же время отмечено, что у привитых людей, заразившихся бруцеллезом козье-овечьего типа, снижается острота развития инфекционного процесса. В выраженных очагах бруцеллеза крупного рогатого скота вакцинация не рекомендуется, так как вакцина способствует сенсибилизации населения.

Возбудители туляремии

Классификация и таксономия

Туляремия (от названия местности Tulare в Калифорнии) – зоонозная инфекционная болезнь с природной очаговостью, вызываемая Francisella tularensis, характеризующаяся лихорадкой и поражением лимфатических узлов. Возбудитель болезни открыт в 1911 г. Г.Мак-Коем и Х.Чепином в районе озера Туляре в Калифорнии, изучен Э.Френсисом.

F. tularensis относится к отделу Gracilicutes, семейство не определено. Выделяют подвиды tularensis, holarctica, mediasiatica.

Нозологические формы

Francisella tularensis вызывает туляремию у человека.