1. Бактериоскопический метод - выявление хламидий, их морфологических структур и антигенов в пораженных клетках (клиническом материале).

Материал - соскобные препараты с доступных исследованию слизистых оболочек мочеполового (уретра, шейка матки и т.п.) и других органов (конъюнктива, прямая кишка и пр.) при экстрагенитальных формах. Из материала готовят мазки, которые окрашивают по Романовскому-Гимзе. Цитоплазматические включения хламидий (тельца Гальберштедтера-Провачека) содержат или крупные ретикулярные тельца или мелкие элементарные   тельца. По цвету и внутренней структуре отличаются от ядра клетки и цитоплазмы. Метод характеризуется сравнительно низкой чувствительностью, позволяет диагностировать от 10-20% случаев урогенитальной инфекции; при хламидийной патологии глаз чувствительность 90-100%.

Применение люминисцирующих поликлональных и моноклональных антител для выявления антигенов хламидий в цитоплазматических включениях в соскобных препаратах урогенитального тракта значительно увеличивает чувствительность и специфичность метода. Используется как прямой, так и непрямой метод иммунофлуорисцентный метод. При люминесцентной микроскопии антигены хламидий выявляют на красном или оранжевом фоне (при контрастировании синькой Эванса или родамином) цитоплазмы эпителиальных клеток в виде внутриклеточных включений ярко-зелёного цвета. По информативности и чувствительности уступает только бактериологическому методу.

При диагностике орнитоза и других зоонозных хламидиозов бактериоскопический метод не применяется.

2. Бактериологический метод. Выделение хламидий из инфекционного материала проводится заражением куриных эмбрионов, лабораторных животных или клеточных культур с последующей индикацией возбудителя. Материал тот же, что и при бактериоскопии. При орнитозе кровь или мокрота. Кровь из вены (не менее 5 мл) исследуют в первые 7-10 дней заболевания, мокроту - до 14 дня заболевания. Для удаления сопутствующей микрофлоры добавляют антибиотики, не действующие на хламидии. (стрептомицин, нистатин, гентамицин).

При заражении  куриного эмбриона исследуемый материал вводят по 0,25-0,5мл в желточный мешок 6-7 суточного развивающегося эмбриона. Обычно заражают 8-10 эмбрионов на 1 исследуемую пробу. При отсутствии специфической гибели эмбрионов спустя 4-10 суток после заражения под контролем бактериоскопии делают до 3 слепых пассажей.

Идентификация. Первичную идентификацию хламидий проводят на основании обнаружения типичных цитоплазматических включений, содержащих элементарные, ретикулярные тельца, и выявлении в их составе родоспецифического антигена (мазки-отпечатки из желточных мешков куриных эмбрионов - окраска по Маккиавелло, прямая и непрямая РИФ).

При выделении хламидий в культурах клеток (L-929, HeLa), идентификация основана на выявлении в зараженных клетках типичных цитоплазматических включений (микроскопия с окраской по Гимзе, Май-Грюнвальду), и родоспецифического антигена (РИФ). Оценку заражения клеток проводят через 48-72 часа.

При диагностике орнитоза кроме культур клеток можно заражать лабораторных животных в мозг или внутрибрюшинно.

3. Серологический метод исследования. Антитела выявляют в сыворотке крови (исследуют 2-3 раза с интервалом 10-14 дней) и секретах мочеполовых органов. Используют РСК, РПГА, РИФ.

Диагностически значимыми являются титры 1:32 - 1:64 при урогенитальных хламидиозах, 1:160 - при генерализованных инфекциях. Наиболее достоверным является нарастание титра антител в 4 и более раза. Специфические IgM и IgA обнаруживаются в секретах половых желез в титрах >1:8, IgG - > 1:256.

Вообще все применяемые лабораторные методы можно разделить на две основные группы - методы выявления антител и методы выявления антигенов.

Методы выявления антител наиболее эффективны при генерализованных формах хламидиозов, сопровождающихся выработкой антител в высоких титрах (орнитоз), и мало эффективны при локальных (особенно хронических) формах (урогенитальные хламидиозы). Большинство методов выявляет антитела к группоспецифическому липополисахариду хламидий, что не позволяет определить вид хламидий. Среди используемых методов:

- РСК - достаточно специфичный, но мало чувствительный метод;

- РНГА - более эффективный метод для диагностики текущего инфекционного заболевания;

- ИФА - наиболее чувствительный метод серологической диагностики. Некоторые варианты тест - систем ИФА позволяют дифференцировать C.pneumoniae от хламидий других видов;

- РНИФ - обладает наибольшей степенью видоспецифичности.

Методы выявления возбудителя, его ДНК и антигенов

1. Цитологические методы с окраской мазков по Романовскому - Гимзе и другими методами мало чувствительны и специфичны, имеют преимущественно историческое значение.

2. Метод флюоресцирующих антител (МФА) с моноклональными антителами (МКА) к группоспецифическому липополисахариду хламидий - наиболее распространенный, чувствительный и специфичный метод, позволяет выявлять локализацию возбудителя (урогенитальные мазки), морфологию (характер гранул, преобладание РТ или ЭТ). Метод требует высокой квалификации микроскописта и качества мазка - отпечатка (достаточное количество клеток с учетом внутриклеточного расположения возбудителя).

3. ИФА для выявления антигена применяется относительно реже, требует большого количества материала (соскоб), связана с получением суспензии и опасностью инфицирования персонала.

4. ПЦР для выявления ДНК хламидий - наиболее чувствительный метод. Однако и при нем возможны ложноположительные (при недостаточной чистоте работы - при контаминации) и ложноотрицательные (наличие в пробах материала ингибиторов Tag - полимеразы) результаты.

Недостатки чувствительных методов выявления антигенов возбудителя - возможность получения положительных результатов даже через 1 - 1,5 месяца после излечения. Нужна полная замена эпителия слизистой, содержащего поверхностные антигены разрушенных хламидий, для получения отрицательных результатов. Особенно это относится к ИФА, ПЦР, для МФА - в меньшей степени (этот метод позволяет оценить морфологию включений хламидий).

Лечение и профилактика

Лечение комплексное. Назначают антибиоти­ки с направленной фармакокинетикой, которые способны длительно сохраняться внутри клеток. Наиболее эффективен с этой точки зрения азит-ромицин из группы макролидов. В связи с тем, что хламидии лишены полноценного пептидогликана, недопустимо использование β-лактамов. Одновременно с антибиотиками назначают иммуномодуляторы, эубиотики (лактобактерин в свечах или в виде аппликаций, местно), а также местные антисептические средства. Эффективному лечению часто препятствует одновременное наличие у больных гонококков и трихомонад (в трихомонадах хламидии могут находиться внутриклеточно). Эффективность современных методов лечения урогенитальных хламидиозов не превышает в идеале 98 - 99%, т.е. часть пациентов эффективно освободить от хламидий не удается, даже после нескольких циклов лечения. У этих больных часто развиваются дисбактериозы, присоединяется кандидоз, снижается резистентность к различным инфекционным агентам.

Профилактика только неспецифическая. Должна быть направлена на своевременное вы­явление и лечение больных урогенитальным хламидиозом. Для профилактики хламидиоза новорожденных беременным женщинам с хла­мидийной инфекцией назначают эритромицин (под контролем врача). К сожалению, закапыва­ние в глаза новорожденным сульфацил-натрия, практикуемое для профилактики бленнореи, а также применение глазных мазей с эритро­мицином и тетрациклином не защищают от хламидийного конъюнктивита. Немаловажное значение имеет соблюдение правил личной ги­гиены, использование презервативов при по­ловом контакте и выполнение других мероп­риятий, рекомендованных для профилактики ЗППП.