При типичном течении краснухи диагноз устанавливают на ос­новании клинических проявлений, иногда лабораторные исследова­ния проводят при атипичных формах заболевания. Но, прежде всего, лабораторные методы применяют для уточнения диагноза краснухи у беременных и у новорожденных детей, а также для выяснения причин гибели плода или новорожденного, подозреваемых на инфицированность вирусами краснухи.

Используются вирусологические и серологические методы ис­следования, иногда ПЦР.

Серологические методы направлены на выявление вирусспецифических сывороточных антител. Применяются РТГА, РСК, ИФА и РИА с парными сыворотками. Выявление преимущественно IgG гово­рит о перенесенном ранее заболевании. Наличие IgM свидетельствует о       текущем заболевании или недавно перенесенном (свежее заражение краснухой - острая форма).

Молекулярно-генетические методы. Применяют полимеразную цепную реакцию (ПЦР), главным образом при исследовании секционного материала.

7. Особенности вирусологического метода диагностики (культивирование, индикация, идентификация вируса)

Вирусологические исследования. Материалом для исследования служат носоглоточное отделяемое и кровь, взятые до появления сыпи. При подозрении на врожденную краснуху исследуют также мочу, кал и секционный материал. Вирус краснухи размножается в первичных культурах клеток амниона человеческого эмбриона, приматов и по­чек кроликов.

Вирус обладает ЦПД, проявляющимся в образовании эозинофильных включений, содержащих РНК. При взаимодействии с другими культурами клеток вирус краснухи не проявляет ЦПД, а вызывает эф­фект интерференции (защита клетки от действия другого цитопатогенного вируса при суперинфекции). Вирус обладает агглютинирующими свойствами по отношению к эритроцитам птиц, проявляет гемолитическую активность.

Для идентификации используют PТTA, РН с учетом по ЦПД, непрямой ИФ-метод, реакцию радиального гемолиза.

Противовирусный иммунитет

После перенесенного заболевания формируется стойкий, пожизненный гуморальный иммунитет.

Специфическая профилактика

Для специфической профилактики используют живые и убитые вакцины.

Полученная в России живая краснушная вакцина «Ленинград-8» пока широко не производится нашей промышленностью, хотя не уступает зарубежным вакцинным препаратам. В России зарегист­рированы и используются для вакцинации:

- комбинированные живые вакцины против кори, краснухи и паро­тита «ММР» (США) и «Приорикс» (Франция);

- краснушная живая моновакцина «Рудивакс» (Франция).

Проводят плановую вакцинацию детей в 12-15 месяцев, ревакци­-
нацию в 6 лет (обычно вакциной «ММР»). Девочек дополнительно
иммунизируют в возрасте 12-14 лет при отсутствии у них антител к
вирусу краснухи. Вакцинацию женщин детородного возраста следует проводить с осторожностью, при обязательном соблюдении условий: интервал между вакцинацией и наступлением беременности должен быть не менее 3-х месяцев (иначе вакцинный вирус может повредить развивающийся эмбрион). Пассивная иммунизация беременных женщин не предупреждает размножение вируса в организме.  

Этиотропное лечение

Специфическое лечение отсутствует. Применяется симптоматическое и патогенетическое лечение.

III. План практической работы

1. Учесть и зарисовать раннюю реакцию торможения гемагглютинации (РТГА) в диагностике гриппа. 

Метод диагностики: вирусологический

Компоненты: типоспецифические противогриппозные сыворотки (содержащие антитела к вирусам гриппа А, А1, А2 и В), вирусологический исследуемый материал, изотонический раствор хлорида натрия, 1% суспензия куриных эритроцитов.

Постановка: Разведение соответствующих типоспецифических противогриппозных сывороток в ряде лунок, используя 0,9% раствор NaCl (см. разведения на планшетке). В каждую лунку вносят по 0,2 мл исследуемого вирусологического материала. Выдерживают 60 мин. при комнатной температуре. Затем в каждую лунку вносят по 0,4 мл. 1% суспензии куриных эритроцитов. Инкубация в течение 2-х часов при температуре t +37 °C.

Учет: Положительная реакция «+» – осадок с ровными краями в виде красной пуговки. Отрицательная реакция «-» - осадок с неровными краями в виде красного зонтика. Титр РТГА определяют по максимальному разведению, при котором наблюдается торможение гемагглютинация (красная пуговка)    

Заключение: Вирусологический материал содержит вирус гриппа А2 в титре 1/320 (пример).

Реакция торможения гемагглютинации основана на блокаде, подавлении антигенов (гемагглютининов) вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты. РТГА применяют для диагностики многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

2. Учесть и обосновать заключение по ретроспективной РТГА с парными сыворотками в серодиагностике гриппа. 

Метод диагностики: серологический

Компоненты: исследуемые парные сыворотки (первая парная сыворотка берется на 2 неделе заболевания, вторая – на 3-4 неделе), вирусологический материал –диагностикумы, содержащие антигены вирусов гриппа А, А1, А2 и В), изотонический раствор хлорида натрия, 1% суспензия куриных эритроцитов.

Постановка: Разведение исследуемых парных сывороток в ряде лунок, используя 0,9% раствор NaCl (см. разведения на планшетке). В каждую лунку вносят по 0,2 мл вирусологического материала в соответствующий ряд. Выдерживают 60 мин. при комнатной температуре. Затем в каждую лунку вносят по 0,4 мл. 1% суспензии куриных эритроцитов. Инкубация в течение 2-х часов при температуре t +37 °C.

Учет: Положительная реакция «+» – осадок с ровными краями в виде красной пуговки. Отрицательная реакция «-» - осадок с неровными краями в виде красного зонтика. Титр РТГА определяют по максимальному разведению, при котором наблюдается торможение гемагглютинация (красная пуговка)    

Заключение: Нарастанием титра антител в парных сыворотках в 4 раза свидетельствует о свежем случае заболевания гриппом А2 (пример).

3. Выписать схему микробиологической диагностики гриппа (см. базовый текст).

IV. Примеры ситуационных задач

Ситуационная задача № 1:

В инфекционную больницу поступил больной М., 65 лет, с жалобами на озноб, лихорадку (40⁰С) в течение 3-х дней, мучительную головную боль, ломящие боли во всем теле, сильную слабость, тошноту, рвоту. Больной заторможен. При обследовании выявлены, что больной обезвожен, тургор кожных покровов снижен. Из анамнеза известно, что члены семьи недавно переболели гриппом. После осмотра больного врач поставил предварительный диагноз: «Грипп, тяжелая форма».

1. Укажите таксономическое положение вируса гриппа:

1. Семейство Picornaviridae

2. Семейство Hepadnaviridae

3. Семейство Togaviridae

4. Семейство Orthomyxoviridae

5. Семейство Flaviviridae

2. Геном вируса представлен:

1. Минус-нитевой фрагментированной РНК

2. Двунитевая линейная ДНК

3. Плюс-нитевой фрагментированной РНК

4. Однонитевая ДНК

5. Двунитевая РНК

3. Что является входными воротами вируса гриппа:

1. Эпителий слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта

2. Эпителий слизистых обо­ лочек верхних дыхательных путей

3. Эпителий слизистых оболочек мочевыделительных путей

4. Эпителий слизистых оболочек половых путей  

5. Конъюнктивальный мешок