Для определения резус-принадлежности крови человека используется экспресс-метод в пробирках без подогрева с универсальным реагентом, а также метод с использованием анти-D моноклонального реагента, экспресс-метод на плоскости без подогрева.

Экспресс-метод определения резус-принадлежности в пробирках без подогрева стандартным универсальным реагентом. Для исследования может быть использована свежая несвернувшаяся кровь, взятая из пальца непосредственно перед использованием, или консервированная кровь без всякой предварительной обработки, а также эритроциты из пробирки после сформирования сгустка и отстаивания сыворотки. Допустимо хранение крови в течение 2-3 суток при температуре 4-8⁰с.

Исследование проводят в пробирках объемом не менее 10 мл. На дно пробирки вносят 1 каплю стандартного универсального реагента, представляющего собой сыворотку антирезус группы АВ(IV), содержащую 18% раствор декстрана. Затем в нее добавляют 1 каплю исследуемой крови (или эритроцитов). Пробирку встряхивают и несколько раз переворачивают таким образом, чтобы содержимое ее растекалось по стенкам. Это значительно ускоряет агглютинацию и делает ее крупнолепестковой.

                                              I                                 II

I                           II

Универсальный реагент антирезус

серия I                                               серия II

Rh+ Rh-                                             Rh+    Rh-

  контроль

Агглютинация на стенках пробирки наступает, как правило, в течение первой минуты, но для, образования устойчивого комплекса «антиген - антитело» и четкой агглютинации, а также учитывая возможность замедленной реакции или наличие выраженного резус-антигена, наблюдать следует не менее 3 мин. Затем для исключения неспецифической агрегации эритроцитов в пробирку добавляют 2-3 мл 0,9% раствора хлорида натрия и перемешивают путем одно- двухкратного перевертывания пробирки. Взбалтывать запрещено!

Оценка результатов проводится визуально. Наличие агглютинации (крупные хлопья на фоне просветленной жидкости) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови. Отсутствие агглютинации (в пробирке гомогенно-окрашенная жидкость) свидетельствует о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови.

Для проверки активности и специфичности реагента антирезус следует использовать контрольные резус-положительные и резус-отрицательные эритроциты. Для контроля в пробирку вносят по одной капле 0,9% раствора хлорида натрия и исследуемой крови или эритроцитов. Агглютинации не должно быть.

Экспресс-метод определения резус-принадлежности на плоскости без подогрева. На белой пластинке со смачиваемой поверхностью пишут фамилию и инициалы лица, кровь которого исследуется. На левом краю пластинки делают надпись «сыворотка антирезус., на правом - «контрольная сыворотка». Соответственно надписям на пластинку слева помешают 1-2 капли (0,05-0,1 мл) реактива антирезус, справа - такое же количество контрольной сыворотки. К обеим каплям добавляют исследуемые эритроциты. При использовании крови, полученной при проколе пальца, ее добавляют в количестве, равном объему реактива антирезус, а при использовании взвеси эритроцитов - в половинном объеме. Кровь смешивают с реактивом сухой стеклянной палочной, размазывая на пластинке до образования капли диаметром 1,5см. Пластинку слегка покачивают. Через 3-4 мин для снятия возможной неспецифической агглютинации к каждой капле добавляют 5-6 капель 0,9% раствора хлорида натрия. Затем пластинку слегка покачивают в течение 5 мин.

Результат оценивают по наличию или отсутствию агглютинации невооруженным глазом. Наличие хорошо выраженной агглютинации в левой капле (эритроциты склеены в комочек на обесцвеченном фоне) указывает на резус-положительную принадлежность исследуемой крови (Rh+). Отсутствие агглютинации в левой капле (гомогенная окраска) говорит о резус-отрицательной принадлежности исследуемой крови (Rh-). Результат считается истинным лишь при отсутствии признаков агглютинации в правой (контрольной) капле.

Определение резус-принадлежности крови с использованием анти- D-моноклонального реагента (цоликолон анти- D-cyпер). Цоликлон анти - D-супер предназначен для выявления D-антигена системы резус в эритроцитах человека. Он изготовлен на основе культуральной жидкости, кондициониpoванной клетками - продуцентами анти - D антител.

Определение D-антигена про изводится в нативной крови, стабилизированной консервантом, а также в крови, взятой без консерванта, и в крови, взятой из пальца.

Техника определения. На пластинку со смачиваемой поверхностью наносят каплю (0,1 мл) реагента. Рядом помещают маленькую каплю (0,01-0,05 мл) исследуемой крови и смешивают с реагентом. Наиболее крупная агглютинация наблюдается при использовании эритроцитов в высокой концентрации. Реакция агглютинации начинает развиваться через 10-15 с, четко выраженная агглютинация наступает через 30-60 с. Использование подогретой до 37-40°·С пластинки сокращает время наступления агглютинации. Пластинку после смешивания реагента с кровью рекомендуется покачивать не сразу, а через 20-30 с, что позволяет за это время развиться более полной крупнолепестковой агглютинации. Результаты реакции учитывают через 3 мин. Наличие агглютинации свидетельствует о резус-положительной принадлежности крови, а ее отсутствие - о резус-отрицательной.

13. Оценить пригодность крови и ее компонентов к трансфузии. Перед переливанием крови и ее компонентов врач проводит визуальную оценку флакона и гемакона. Любые виды нарушения герметичности емкости являются противопоказанием к использованию трансфузионной среды. На этикетке должны быть указаны: наименование станции или отделения переливания крови, дата заготовки, название трансфузионной среды, вид консерванта, резус-принадлежность, Ф.И.О. донора, Ф.И.О. производившего заготовку трансфузионной среды врача, объем трансфузионной среды, срок .годности, отметка об отсутствии инфицирования сифилисом, гепатитом, вирусом иммунодефицита человека. Трансфузии крови и эритроцитной массы допустимы в течение .21 дня со дня заготовки при хранении на консервирующих растворах. Эритроцитную массу, обедненную лейкоцитами и тромбоцитами, необходимо использовать не позднее 24 ч после заготовки. Концентрат тромбоцитов хранят при постоянном помешивании в течение 3-5 дней, а концентрат тромбоцитов должен использоваться в ближайшие часы после заготовки или подвергаться криоконсервированию. Нельзя использовать кровь и ее компоненты при наличии в них гемолиза (порозовение плазмы), свертывания (появления сгустков) и гниения (помутнение плазмы, образование в ней хлопьев, пленок).

А     Б