Определение производится в нативной крови, взятой в консервант, в крови, взятой без консерванта, в том числе взятой из пальца. Используется метод прямой гемагглютинации на плоскости и на пластине или планшете. Определение группы крови производится В помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С.
На планшет или пластину наносят индивидуальными пипетками цоликлоны анти-А, анти-В и анти-АВ по одной большой капле (0,1 мл) под соответствующими надписями. Рядом с каплями антител наносят по одной маленькой каплe исследуемой крови (0,01-0,03 мл). Смешивают кровь с реагентом. Наблюдают за ходом реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании пластины или планшета с течение 3 мин. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-6 с, но наблюдение следует вести в течение 3 мин ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.
Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
группа 0 (I) II III IV Группа A(II)
Группа В (III) Группа АВ (IV)
Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами представлена в таблице.
| Результат реакции с цоликлоном* | Исследуемая кровь принадлежит к группе** | ||
| анти-А | анти-В | анти-АВ | |
| - | - | - | 0(I) |
| + | - | + | А (II) |
| - | + | + | В (III) |
| + | + | + | АВ (IV) |
* Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) - отсутствие агглютинации.
** Окончательно АВ0 - принадлежность устанавливается только по результатам перекрестного определения: антигенов А и В на эритроцитах и изогемагглютининов в сыворотке.
В составе цоликлонов нет высокомолекулярных добавок, способных вызвать неспецифическую полиагглютинацию эритроцитов, поэтому не требуется проведение контроля с растворителем. При положительном результате реакции агглютинации со всеми тремя цоликлонами необходимо исключить спонтанную неспецифическую агглютинацию исследуемых эритроцитов. Для этого смешайте на плоскости одну каплю исследуемой крови (эритроцитов) с каплей физиологического раствора. Кровь можно отнести к группе АВ(IV) только при отсутствии агглютинации эритроцитов в физиологическом растворе.
Дата: 2019-03-05, просмотров: 247.
