Лабораторные критерии(Подчерняева Н.С., Солнцева О.А., Соболева М.К., 2006):

1.Антикардиолипиновые АТ IgG- и/или IgM-изотипы в крови в средних или высоких титрах в двух или более исследованиях с промежутком не менее 6 нед., определяемые стандартным иммуноферментным методом для бета2-гликопротеин-I-зависимых антикардиолипиновых АТ.

2. Волчаночный антикоагулянт в плазме крови в двух или более исследованиях с промежутком не менее 6 нед., определяемый согласно руководству Международного общества тромбозов и гемостаза (исследовательская группа по волчаночному антикоагулянту/фосфолипид-зависимым АТ) следующими этапами:

· удлинение времени свертывания плазмы в фосфолипид-зависимых коагуляционных тестах: активированное парциальное тромбопластиновое время (АПТВ), каолиновое время свёртывания, протромбиновое время, тесты с ядом гадюки Рассела, текстариновое время;

· отсутствие коррекции удлинения времени свёртывания скрининговых тестов в тестах смешивания с донорской плазмой;

· укорочение или коррекция удлинения времени свёртывания скрининговых тестов при добавлении фосфолипидов;

· исключение других коагулопатий, например наличия ингибитора VIII фактора или гепарина.

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы исследования

Был проведен ретроспективный анализ 35 историй болезней с хроническим течением и достоверным диагнозом системная красная волчанка (не менее 4-х критериев Американской коллегии ревматологов, 1997), проходивших лечение в 1-ом терапевтическом отделении ГБУЗ РХ «Республиканская клиническая больница им. Г.Я. Ремишевской» с января 2013 года по декабрь 2016 года и не получавших глюкокортикоидные (ГК) препараты и цитостатики на момент обследования. В группу сравнения вошли 22 пациента с ревматодным артритом (РА). Группу контроля составили 30 здоровых доноров, посетивших ревматолога, которые были отобранны по амбулаторным картам в ГБУЗ РХ «Республиканская клиническая поликлиника им. Г.Я. Ремишевской». Все отобранные пациенты были сопоставимы по полу и возрасту.Анализировали иммунологические показатели (ANA-detect,ds-DNK, LE-феномен) и показатели общего анализа крови (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, гемоглобин, СОЭ).

Иммунологические показатели определяли с помощью автоматического иммуноферментного анализатора для лабораторной диагностики аутоиммунных заболеваний – ALEGRIA, который характеризуется высокой чувствительностью и воспроизводимостью.Забор крови осуществляется из локтевой вены натощак утром, в объеме не менее 10 мл.

Показатели общего анализа крови определяли с помощью автоматического гематологического анализатора.Для проведения анализа производился забор капиллярной крови (внутренняя сторона среднего пальца или конец безымянного пальца), натощак утром, в объеме не менее 30 мкл.

Методы исследования

Антитела к нуклеосомам

Нуклеосомы, представляют собой структурные единицы хроматина, состоящие из ДНК и гистоновых белков. Вокруг ядра нуклеосомы, состоящего из белков гистонов Н2А, Н2В, Н3 и Н4, обернуто 146 пар нуклеотидов ДНК, что составляет два с половиной витка. Между нуклеосомами находится промежуток из линейной ДНК и гистона Н1. Такая структура укладки ДНК позволяет компактно упаковать генетический материал в составе хромосом клетки. Значительное количество свободных нуклеосом может образоваться при программированной клеточной гибели (апоптозе). Свободные нуклеосомы рассматриваются в качестве основного иммуногена, стимулирующего иммунные ответ Т- и В-клеток при системной красной волчанке (СКВ). Вероятно, источником свободных нуклеосом при этом заболевании являются эпителиоциты и лимфоциты, которые подвергаются избыточному апоптозу.Совокупная частота выявления антитела к нуклеосомам при СКВ составляет 60-90%, причем антитела к нуклеосомам отмечаются несколько чаще, чем антитела к ДНК (40-50%), поэтому могут позволить диагностировать СКВ у пациентов без антител к двуспиральной ДНК. Антитела к нуклеосомам отмечаются у 40-70% пациентов с классической красной волчанкой с поражением кожи и внутренних органов и у 80% больных СКВ с поражением почек. Антитела к нуклеосомам являются одними из первых аутоантител, формирующихся в организме в ходе развития СКВ. Для выявления антител к нуклеосомам используется иммуноферментный тест второго поколения, основным отличием которого является применение высокоочищенных нуклеосом, что обеспечивает специфичность определения данных анутоантител для диагностики СКВ превышающую 95% (Лапин С.В., Тотолян А.А.,2010).

Антитела к ds - DNK

Для выявления антител к дсДНК методом ИФА сложно сохранить нативную структуру молекулы. Молекула дсДНК несет отрицательный заряд и не может быть непосредственно нанесена на отрицательно заряженный пластик иммуноферментного планшета. Для того, чтобы нанести дсДНК в дно лунок, необходимо использовать положительно заряженный белок протамин. Облучение дсДНК позволяет сделать ее более реактоспособной и сенсибилизировать ИФА-планшеты. Оба этих метода сенсибилизации проводят к деспирализациидсДНК с образованием значительного числа односпиральных молекул. Это приводит к тому, что большинство твердофазных иммуноферментных систем для обнаружения антител к дсДНК оказываются относительно неспецифичными. При СКВ антитела к дсДНК могут быть обнаружены у 40-50% больных и характеризуются гомогенным типом свечения ядра НЕр-2 клеток при выявлении АНФ. Причиной их появления является сенсибилизация к компонентам ядерного материала, высвобождающегося из ядер клеток в ходе апоптоза. Антитела к дсДНК включены в состав 10 критериев СКВ Американской Ассоциации Ревматологов (в настоящее время Американского Колледжа Ревматизма)(Лапин С.В., Тотолян А.А.,2010).