Возбудитель мелиоидоз (ложный сап, болезнь Уитмора).Инфекционное заболевание животных (лошади, собаки, кролики, мелкий рогатый скот) и человека, протекающее в форме острой или хронической септицемии или септикопиемии.

Возбудитель- Pseudomonas pseudomallei семейство Pseudomonadaceae.История. Открыли в 1911 г в Рангуне Уайтмор и Кришнасвами. Вызывает сапподобное заболевание. В естественных условиях болеют грызуны.Морфология. Возбудитель полиморфная Гр- палочка, размеры (1,5 –6 х9,5-10) мкм. с закругленными концами, спори капсул не образует. В мазках отпечатках из органов располагается одиночно или компактными скоплениями.Культуральные свойства. Возбудитель аэроб, температурный оптимум 37ºС. К питательным средам нетребователен. На плотных средах через 24 ч образуются мелкие, прозрачные, позднее мутнеющие беловатые колонии с металлическим блеском, могут появляться R-формы колонии. На КА, средах с глицерином колонии кремово-оранжевого цвета. На жидких средах помутнение среды, образование пленки, характерен затхлый запах.

Биохимические свойства. Ферментируют лактозу, глюкозу, мальтозу, маннит до кислоты. Образуют сероводород, разжижают желатин.

Антигенная структура. О и Н антигены.

Патогенность связана с эндотоксином, гемолизином.

Резистентность. В почве, воде сохраняются до 40 дней, в моче –17 дней, в трупах грызунов – 8 дней. Погибают при кипячении, при обработке дез. растворами.Патогенез. Возбудитель попадает в кровь через кожные покровы, органы дыхания, жкт, где происходит его размножение. В местах размножения микробы выделяют токсины, которые повреждают клетки и вызывают некроз. В поврежденных органах возникают мелкие некротические очажки, которые подвергаются казеозному распаду, а также абсцессы в регионарных лимфоузлах и мышцах. На коже и слизистых оболочках образуются мелкие узелки и гноящиеся язвы, развивается септицемия и животное погибает.Лабораторная диагностика основана на результатах бактериологического исследования. Выделенную культуру идентифицируют в серологичеких реакциях: РА, РНГА, РП. В качестве признаков для дифференциации Pseudomonas mallei и Pseudomonas pseudomallei используют морфологические критерии, а также способность

Pseudomonas pseudomallei синтезировать на КА кремово-оранжевый пигмент, пептонизировать молоко, гидролизировать желатину, при заражении вызывать гибель крыс.Материал для исследования: кровь, мокроту, моча, гнойное отделяемое из абсцессов, участки пораженных органов.

Биопроба. Суспензией из материала заражают в/б (0,5-1 мл) крыс и морских свинок. В положительных случаях животные погибают в зависимости от вирулентности штамма на 3-15 сутки. У самцов морских свинок развивается орхит (феномен Штрауса).Иммунитет изучен слабо. Специфическая профилактика не разработана.

Возбудитель псевдомоноза норок

Остро протекающее инфекционное заболевание. Характеризуется геморрагической пневмонией, признаками сепсиса. Кроме норок восприимчивы лисицы, песцы; у животных других возбудитель может служить причиной пневмоний, послеродовых, постхирургических осложнений.

Возбудитель псевдомоноза норок - Pseudomonas aerugeinosa.

Морфология. Гр- прямая или изогнутая палочка, подвижная, спор и капсул не образует. Располагается одиночно или короткими цепочками.

Культуральные свойства. Возбудитель аэроб, оптимум роста – 37С. Растет на МПА, МПБ. В МПБ - помутнение, поверхностная пленка, серовато-белый осадок. На МПА - 2-а типа колоний: крупные, круглые и мелкие шероховатые. За счет пигмента колонии окрашены в сине-зеленый цвет. Штаммы выделенные из респираторного и мочеполового тракта, могут образовывать слизистые колонии. Возбудитель синтезирует 4 типа пигмента: пиоцианин (сине-зеленый), флуоресцин, пиорубин и черно-бурый пигмент.Антигенные свойства. По О антигену делятся на серогруппы. Для идентификации используют РА на стекле.Лабораторная диагностика основана на результатах бактериологического исследования. Материал для исследования: пораженные участки легких, регионарные лимфоузлы, селезенка, печень, почки.Специфическая профилактика. Используют моновалентную формолквасцовую вакцину (вакцинный штамм Pseudomonas aerugeinosa шестой серотип).

28 билет. 35. Санитарная микробиология, цель и задачи. Санитарно-показательные микроорганизмы и требования к ним.

Для оценки санитарно-гигиенического состояния объектов окружающей среды проводят санитарно-микробиологические исследования, которые позволят оценить опасность воды, воздуха, почвы и других объектов. Показателем неблагополучия является выявление патогенных микроорганизмов.

Санитарно-микробиологическое состояние объектов окружающей среды оценивают по ОМЧ (общему микробному числу микроорганизмов, содержащихся в единице объема или массы – 1мл воды, 1г почвы, 1м3 воздуха) объекта и обнаружение в нем санитарно-показательных микроорганизмов.

Содержание санитарно-показательных бактерий определяют по двум показателям: титру и индексу. Титр – это минимальный объем или масса, в котором выявляют бактерии. Индекс – это количество санитарнопоказательных бактерий, содержащихся в соответствующем количестве среды.

К санитарно-показательным микроорганизмам относятся представители облигатной микрофлоры организма человека и животных, для которых средой обитания является кишечник или дыхательные пути. Они характеризуются следующими свойствами:

-постоянно выделяются с фекалиями или капельками слизи из дыхательных путей;

-не имеют других мест обитания;

-способны сохраняться в окружающей среде то же время, что и патогенные бактерии, паразитирующие в кишечнике или воздушно-дыхательных путях;

-не способны размножаться вне организма хозяина и изменять свои свойств.

28.Реакция преципитации(РП). Реакция преципитации (РП), как и реакция агглютинации, принадлежит к разряду серологических реакций осадочного типа, но в отличие от РА в ней используют не корпускулярные, а растворимые антигены микроорганизмов. Образование комплек­сов антиген — антитело сопровождается изменением оптической плотности среды (помутнением) — преципитацией (от лат. praecipitatio — падение вниз), что расценивают как положитель­ный результат реакции.

Антиген для РП готовят из чистых культур микроорганизмов, если антиген предназначен для серодиагностики, или из ткане­вого материала, содержащего микроорганизмы, если РП ставят, чтобы при помощи известной иммунной сыворотки обнаружить возбудитель в патологическом материале.Физические методы экстрагирования антигенов основаны на механическом разрушении микробных клеток посредством рас­тирания с кварцевым песком, встряхивания на шюттель-аппарате в колбе со стеклянными шариками, многократного заморажи­вания и оттаивания или воздействия ультразвуком. Полисахаридные термостойкие антигены выделяют термической обработкой (кипячением, автоклавированием).

Из химических методов получения антигенов достаточно ши­роко используют экстрагирование трихлоруксусной кислотой (полный антиген Буавена); кислотный или щелочной термогид­ролиз—прогревание материала, например, в 1%-м растворе ук­сусной кислоты или 0,1 н. растворе гидроксида натрия; экстраги­рование при помощи ацетона, мочевины, этилового спирта, эфира и других растворителей; часто применяют различные детергенты — дезоксихолат натрия, лаурилсульфат натрия и т.д.; используют методы ферментативного разрушения микробных клеток, например, посредством воздействия трипсином.

Выбор того или иного способа выделения растворимого анти­гена зависит от его химической природы. Главное требование к любому из методов — эффективное извлечение антигена без его денатурации.На основе феномена преципитации разработаны реакция кольцепреципитации (РКП), реакция диффузионной преципита­ции (РДП), радиальной иммунодиффузии; принцип реакциипреципитации использован в иммуноэлектрофорезе и встречном имщноэлектрофорезе.Реакция кольцепреципитации (РКП). Известна по имени автора как реакция Асколи (1911); разработана для диагностики сибирс­кой язвы. РКП используют в ветеринарной диагностической практике преимущественно для выявления микробных антиге­нов в тканевом материале. Обязательное условие постановки РКП — прозрачность раствора антигена и иммунной сыворотки, поэтому при необходимости компоненты реакции освобождают от взвешенных частиц фильтрованием, например, через асбесто­вую вату. Техника постановки РКП включает в себя три варианта.Метод «наслаивания» антигена. В уленгутовские пробирки (диаметр 2...3 мм) вносят пастеровской пипеткой с тонким ка­пилляром, не смачивая стенок пробирки, 0,3...0,4 мл иммунной преципитирующей сыворотки. Затем по стенке пробирки осто­рожно наслаивают на поверхность сыворотки 0,1...0,2 мл раство­римого исследуемого антигена (преципитиногена). Смешивания компонентов не происходит благодаря различию плотности сы­воротки и экстракта.

Учет результатов проводят на фоне темной бумаги. Через 1...2мин в зоне взаимной диффузии антигена и антител, на гра­нице контакта компонентов, происходит помутнение среды, ви­димое сбоку как серо-белый диск (преципитат).

Метод «подслайвания» антител. В пробирку вначале вносят антиген, а затем осторожно при помощи пастеровской пипетки на дно пробирки, под антиген, «подслаивают» иммунную сыво­ротку.

При постановке кольцевой РП в ходе исследования тканевого материала необходимы следующие контроли: 1) иммунная сыво­ротка + стандартный антиген; 2) иммунная сыворотка + физио­логический раствор; 3) иммунная сыворотка + экстракт из тка­ней здоровых животных.Показания РП считают достоверными, если в первом контро­ле получают положительный, а в остальных — отрицательный ре­зультат. Микровариант РКП. Разработан для экономии компонен­тов. В этом случае используют стеклянные капилляры или тонко оттянутые кончики пастеровских пипеток диаметром 0,5... 1 мм. Капилляр опускают одним концом во флакон с пре­ципитирующей сывороткой, набирают ее на высоту 1...1,5 см, закрывают верхнее отверстие капилляра указательным паль­цем. Затем ватой удаляют излишек сыворотки с наружной сто­роны капилляра, погружают его в раствор антигена и набира­ют равное количество антигена. Капилляр переворачивают с таким расчетом, чтобы смесь сыворотки и антигена оказалась в середине капилляра, после чего закрепляют вертикально в пластилиновой пластинке. Результаты учитывают, как и при обычной РКП.

Реакция диффузионной преципитации (РДП). Основана на встречной диффузии антител (иммунной сыворотки) и раствори­мых антигенов в агаровом геле (двойная диффузия). Если анти­ген состоит из смеси моноантигенов, то каждый из них диффун­дирует с различной скоростью и точки эквивалентных соотноше­ний каждого антигена и гомологичных антител будут находиться в различных участках агарового геля, где и формируется преци­питат в виде линий. Таким образом, каждая пара антиген — ан­титело образует свою линию преципитации. При помощи РДП можно анализировать сложные антигенные смеси, поскольку каждый антиген дает свою линию преципитации. В ряде случаев РДП используют как метод серологической диагностики инфек­ционных болезней.Из очищенного агара фирмы «Дифко» готовят 1,5%-й раствор агара в физиологическом растворе (рН 7,2...7,4) с добавлением мертиолата (конечное разведение 1:10 000) как консерванта.

На хорошо обезжиренное стекло, лежащее строго горизон­тально, наливают расплавленный агар в количестве, достаточном для формирования слоя геля толщиной 3...4 мм. Затем штампами вырезают лунки в агаровом геле; агар из лунки удаляют с помо­щью трубочек. На дно лунки вносят каплю горячего агара с пос­ледующим его удалением, что создает «дно» лунки и предотвра­щает подтекание компонентов под гель.В зависимости от конкретной задачи применяют штампы с различным количеством пробойников, обеспечивающие полу­чение лунок разного диаметра и на разном расстоянии. При изучении неизвестных реагентов оптимальное расстояние меж­ду лунками необходимо установить в предварительных опытах. В зависимости от конкретной задачи в центральную лунку вно­сят иммунную сыворотку, в периферические — анализируемые нтигены или наоборот. Сыво­ротка и антиген не должны выходить за пределы лунки на поверхность агара. Затем плас­тины помещают в эксикатор. На дно эксикатора наливают небольшое количество воды с антисептиком. Пластины с компонентами выдерживают при комнатной температуре 10..,72 ч

Учет результатов: полосы преципитации образуются только в зоне эквивалентнос­ти, т. е. там, где все антитела связаны с антигеном. (Если в жидкой среде соединить экви­валентные количества реаген­тов, то в надосадочной жидко­сти после формирования пре­ципитата не будет свободных антигена и антител.)

При изучении в РДП раз­личных антигенов возможны три варианта результата реакции (рис. 63, 64, 65).

1. Реакция идентичности: слияние линий преципитации, от­носящихся к двум соседним антигенам (у сравниваемых антиге­нов гомологичные детерминанты — антигены оценивают как идентичные)2. Реакция неидентичности: пересечение линий преципита­ции (у сравниваемых антигенов нет гомологичных антигенных детерминант).3. Реакция неполной идентичности: неполное пересечение линий преципитации с формированием так называемой «шпо­ры». Такая картина возникает, когда у одного из антигенов по­мимо гомологичных есть и специфические детерминанты, кото­рые второй антиген в составе своей молекулы не несет. С помощью реакции диффузионной преципитации можно об­наруживать антитела в сыворотке крови и определять их титр. В этом случае в центральную лунку вносят известный растворимый антиген (бактериальный, вирусный), а в периферические — раз­личные разведения исследуемой сыворотки крови (рис. 66).

Чтобы полосы преципитации стали более выраженными, плас­тины обрабатывают солями кад­мия: пластины с готовым гелем отмывают в физиологическом растворе и заливают 0,65%-м ра­створом сульфата кадмия. В ре­зультате через несколько минут полосы преципитации стано­вятся более ярко выраженными (в несколько раз).

Иммуноэлектрофорез (ИЭФ). Метод электрофоретического разделения антигенных смесей в агаровом геле с последующим выявлением отдельных антиге­нов при помощи реакции диффузионной преципитации. Иммуноэлектофорез применяют для изучения состава сложных антигенных смесей, например микробных растворимых антигенов, белков сыворотки крови и т.д.Для приготовления агарового геля и заполнения кювет электрофоретической камеры используют различные буферные ра­створы: 1) веронал-мединаловый (барбитуратный) буферный ра­створ, рН 8,6, ионная сила 0,05; веронал — 1,84 г, мединал— 10,3 г, дистиллированная вода —до 1000 мл; 2) трис-буфер, рН 8,9; трис (оксиметил)-аминометан — 60,5 г, этилендиаминотетра-уксусная кислота — 6 г, борная кислота — 4,6 г, дистиллирован­ная вода — до 1000 мл.

Существует много других буферных растворов, различающих­ся по значениям рН и ионной силе. Ионная сила (р.) равна поло­вине суммы произведения концентрации каждого иона, присут­ствующего в растворе, на квадрат его валентности. Чем ниже ионная сила буфера, тем быстрее двигаются белки, но чрезмер­ное снижение ионной силы ухудшает разделение компонентов.

Для проведения электрофореза расплавленный гель наливают на стеклянные пластины размером (13...18) х (18...24) см (макро­метод) или на предметные стекла (микрометод) слоем толщиной 2...4 мм. Затем в агаровом геле с помощью пробойников выреза­ют лунки для растворов, подлежащих электрофоретическому раз­делению. Если объем жидкости достаточно велик (макрометод), то ее предварительно диализируют против буферного раствора, который используют для электрофореза.Подготовленную пластину помещают в камеру для электро­фореза (рис. 67, 68). Слой агара на пластине благодаря агаровым «мостикам» или полоскам хроматографической бумаги сообщает­ся с анодной и катодной кюветами, заполненными буферным раствором. Ток через выпрямитель поступает на пластину с агаром (напряжение обычно 300...500 В и силой тока 30...40 А). Если гра­диент потенциала на агаровой пластине составляет 5...6 В/см, то на пластине длиной 18 см разгонка белков завершается за четыре-пять часов, при меньших размерах пластины разгонка проис­ходит быстрее.

По истечении указанного времени пластину с гелем вынима­ют из камеры, в агаре по длине пластины прорезают траншею, которую заполняют иммунной сывороткой. Пластины помещают во влажную камеру. Образование дуг преципитации завершается через несколько сугок-(рис. 69). Электрофореграммы можно вы­сушивать на стеклах, окрашивать или при помощи специальных реактивов определять химическую природу веществ в дугах пре­ципитации.

28. Возбудители Риккетсиозы.гр- бактерии, облигатные внутриклет паразиты.по морфологии кокковидные(диам 0,3-1 мкм) окрашиваются по романовскому гимзе в красный цвет, палочковидн биполярные1-1,5 в красно-голуб), удлин биполярные(3-4),нитевидные полизернистые(10-40)в красно-голубой.Риккетсии размножаются делением,в не организма развиваются только в культуре растущей и переживающей ткани,на оболочках куриных эмбрионов. Ку-риккетсиоз. Природно-очаговая болезнь домашних,промысловых и диких живх-х.Протекает бессимптомно,но встреч в острой и хронич формах.Клинич признаки бол-ни:повыш температуры, возбудитель-Coxiella burneti, род Coxiella, семейство Rickettsiaceae. Лаб диагностика. Основана на результатах бактериологического и серологич исследований.Бактер включ в себя обнаружение возудителя в исходном материале методом световой микроскопии, биопробы, выдел чистой культуры и идентификации возбудителя по морфологическим и серологическим св-вам.Мат для исслед.кровь из вены,клещи,выдеения из матки и влагалища, головной мозг,селезенка.Микроскопия препаратов из исх материала. По ром-гимзе обнаружив коккопобны(красные),палочковидные,нитевидны формы(красно-голуб).Выделение и идентицикация культуры возбудителя.из исходного матриала готовят суспензию на физиологич раст-ре, в кот добавл-т антибиот и вводят в желточный мешок курин эмбрионов.для обнаруж и идентификации использ р-цию Имуннофлюоресценции .Биопроба. заражают 2 молодых морск свинок или 4 бел мышей. Внутрибрюшинно свинкам 3-5 мл.появляется лихорадка,затем смерть,увелич печень,селез,лимфозлы.Серол диагн. Основана на р-циях рск. Эрлихиоз собак. Трансмиссивная лихорадочная болезнь(истощение,панцитопения,гемморагия на коже,слиз.возбудитель-Е Санис., род Erlichia. Наиб восприимчивы нем овчарка,лиы,койоты.лаб жив-е не чувствительны.лаб диагн. Заклчается в световой микроскиопии мазков крови по ром-гимзе,для определения морул возбудителя в лейкоцитах собак.окраш в голуб цвет по гимзе,романовскому-в роз.применяют реакцию непрям имунофлуор,с использованием зараженной культуры моноцитов в качестве антигена.Эрлихиоз крс и мрс. Трансмисс лихорадочная болезнь,у овец развив пневмонии, аборты, у коров лихорадка,вялость.возбудитель-Erlichia phagocytophila. Лаб диагн. Основана на микроскопическом изучении окрашенных препаратов из материала.