Методы окраски бактерий:

1.Окраска по методу Грамма

Метод окраски по Грамму является самым универсальным из сложных методов окраски. Все бактерии по своему отношению к этому методу распределяются на грамположительные и грамотрицательные.

1.Фиксированный мазок окрашивают генцианвиолетом 1-2 мин.

2. Наносят раствор Люголя на 1-2 мин.

3.Обесцвечивают этиловым спиртом в течение 30-60с.

4.Промывают водой.

5.Окрашивают водным фуксином 1-2 мин.

Различное отношение к окраске по Грамму зависит от разницы в физико-химическом составе микробных клеток. Грамположительные бактерии окрашиваются в тёмно-фиолетовый цвет, грамотрицательные в красный. Отношение бактерий к окраске по Граму определяется их способностью удерживать образовавшийся в процессе комплекс генцианового фиолетового и йода. У грамположительных бактерий основным веществом клеточной стенки являются пептидогликан (муреин) до 90%. У гармотрицательных бактерий однослойный муреин распространяется внутри стенки, значительно больше содержит белков и липидов, которые вместе, которые вместе с полисахаридами образуют поверхностный слой в виде мозаики. Кроме того проницаемость клеточной стенки у гармположительных бактерий меньше, чем у грамотрицательных. Это объясняется большим содержанием мукопептидав составе клеточной стенки грамположительных бактерий и меньшим диаметром пор, что способствует удержанию образовавшегося комплекса при обработке бактерий этиловым спиртом.

2.Окраска кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена

1.Фиксированный мазок окрашивают карболовым фуксином через полоску фильтровальной бумаги с подогреванием до появления паров в течение 3-5 мин.

2.Обесцвечивают препарат 5% серной кислотой.

3.Промывают водой.

4.Окрашивают метиленовым синим 3-5 минут.

5.Промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Кислотоустойчивость обусловлена наличием в клеточной стенке и цитоплазме бактерий повышенного количества липидов, воска и оксикислот, в частности миколевой кислоты. Карболовая кислота разрыхляет клеточную стенку и тем самым повышает её тинкториальные свойства, а высокая концентрация красителя и нагревание в процессе окраски усиливает реакцию взаимодействия бактериальных клеток с красителями, которые окрашиваются при этом в красный цвет. При обработке препарата серной кислотой не кислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются и окрашиваются метиленовым синим в голубой цвет.

3.Окраска спор по методу Ожешки

1.На нефиксированный мазок наносят 0,5 % раствор соляной кислоты и подогревают на пламени спиртовки 2-3 мин.

2.Кислоту сливают, препарат промывают водой, просушивают и фиксируют над пламенем.

Далее препарат окрашивают по способу Циля-Нильсена.

Споры бактерий окрашиваются в красный цвет, а вегетативные формы в синий цвет. Протравы (кислоты или щёлочи) разрыхляют оболочку споры, облегчая проникновения в неё красителя. Окрасившиеся споры обладают кислотоустойчивостью в отличие от вегетативного тела микробной клетки, обесцвечивающегося под действием кислоты. Поэтому принцип окраски спор и кислотоустойчивых бактерий одинаков: препарат окрашивают основным красителем, затем обесцвечивают кислотой и докрашивают дополнительно в какой-нибудь контрастный цвет.

4.Окраска спор по методу Пешкова

1.Мазок окрашивают метиленовой синью с подогреванием до кипения;

2.Смывают водой;

3.Наносят 1 %-ный водный раствор нейтрального красного – 10с;

4.Высушивают и микроскопируют.

Споры окрашиваются в синий цвет, вегетативные клетки в красный.

5.Окраска зёрен волютина по методу Нейссера

1.Фиксированный мазок окрашивают ацетатом синьки Нейссера 2-3 мин.

2.Наносят раствор Люголя на 10-30 с.

3.Промывают препарат водой.

4.Окрашивают везувином или хриэоидином 0,5-1 мин.

5.Промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Зёрна волютина представляют собой соединения, имеющие в отличие от цитоплазмы щелочную реакцию и поэтому избирательно воспринимают ацетат синьки, окрашиваясь в тёмно-синий цвет. Цитоплазма клетки, обладающая кислой реакцией, воспринимает щелочной краситель- везувин и окрашивается в жёлтый цвет.

6.Окраска капсул по методу Бурри-Гинса

1.Приготовляют тушевой препарат по Бурри. Для этого смешивают каплю взвеси микробов с каплей туши и при помощи стекла со шлифованным краем готовят мазок (так же, как приготовляют мазки из крови), затем его высушивают и фиксируют.

2.Окрашивают водным фуксином 1-2 мин.

3.Промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Бактерии окрашиваются в красный цвет, неокрашенные капсулы выявляются на черно-розовом фоне.