Возбудитель эмфизематозного карбункула (эмкар)

Острое инфекционное заболевание рогатого скота, характеризуется развитием отечных крепитирующих припухлостей в мышечной ткани. К эмкару более восприимчив КРС, реже овцы и козы. Возбудитель эмфизематозного карбункула – Cl.chauvoei. Лабораторная диагностика основана на результатах бактериологических исследования.

Специфическая профилактика.

1. Поливалентная вакцина против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека овец и дизентерии ягнят.Вакцина содержит несколько типов клостридий.

2.Поливалентный анатоксин против клостридиозов овец содержит анатоксины Cl.perfringens типов С и D и Cl.septicum, сорбированные на гидроокиси алюминия.

3.Антитоксические сыворотки против анаэробной дизентерии ягнят и инфекционной энтеротоксемии овец.

Возбудитель брадзота овец

Название возбудителя Патологоанатомическая картина у морских свинок, зараженных возбудителями злокачественного отека

C. septicum Кожа легко отделяется от мышц. Мышцы и подкожная клетчатка светло-красного или розового цвета в подкожной клетчате большое количество пузырьков газа. Кишечник вздут, наполнен разжиженными массами, содержащими пузырьки газа, сосуды инъецированы. В грудной полости и сердечной сорочке находится трансудат.

C. novyi (oedematiens) На месте инъекции наблюдают желатинозный, студенистый отек от желтоватого до слабо-розового цвета. Мышцы бледные.

C. perfringens А и D Кожа на месте инъекции часто отслаивается от мускулатуры, образуя мешок. Мышцы вид вареного мяса, серовато-грязного цвета (более выражено при заражении типом А). Кишечник вздут, сосуды инъецированы.

C. perfringens B и C Кожа на месте инъекции легко отделяется, но не отслаивается Мускулатура сухая, красного цвета различных оттенков. Кишечник вздут, геморрагически воспален, иногда образует язвы (тип В)

C. histolyticum При подкожном заражении большей частью наблюдают выздоровление морских свинок. При заражении в мышцу бедра кожа красно-фиолетовая, напряжена, иногда лопается. Мышцы теряют свою структуру, расплавляются превращаются в кашицеобразную массу с примесью сгустков крови. Мягкие ткани отделяются от костей и сосудов. Газ не образуется, гнилостного распада нет.

Острая токсикоинфекция овец. Характеризуется геморрагическим воспалением слизистой оболочки сычуга и 12-перстной кишки, а также дегенеративными изменениями паренхиматозных органов.

Возбудители брадзота - Cl.perfringens, Сl.septicum и Cl.novyi (oedematiens).

Лабораторную диагностику проводят как и при злокачественном отеке. Материалом являются измененные участки сычуга и инфильтрат подкожной клетчатки. Токсичность возбудителей определяют на белых мышах, которым в/в или в/брюшинно вводят фильтрат исследуемых культур. При наличии токсина мыши погибают через 24-72 часа.

Возбудитель анаэробной энтеротоксемии

Острая инфекционная болезнь преимущественно молодняка, характеризующаяся геморрагическим гастроэнтероколитом, признакми токсемии, некрозом ворсинок тонкого отдела кишечника. Острая токсикоинфекция, поражающая ягнят впервые пять дней жизни. Характеризуется геморрагической энтеротоксемией и сопровождается высокой смертностью.

Возбудитель энтеротоксемии овец, коз, кроликов - Cl.perfringens тип D, телят - Cl.perfringens типы С, D, E, поросят - Cl.perfringens типы В и С.

Диагноз ставится при выделении чистой культуры возбудителя и обнаружении токсина в содержимом тонкого кишечника. При обнаружении токсина в фильтрате содержимого тонкого кишечника определяют его серовар в реакции РН на белых мышах.

18 билет. 14.Протопласты,сферопласты, L -формы. Пептидогликан КС является «мишенью» для действия некоторых антибиотиков, главным образом пенициллинов и фермента лизоцима. При действии пенициллина на растущую бактериальную клетку образуются безоболочечные формы бактерий, лишенные КС. Их называют протопластами, сферопластами и L-формами. Первые полностью лишены КС, вторые – частично. Они приобретают сферическую форму вследствие отсутствия пептидогликана. Бактерии, полностью или частично утратившие КС, но сохранившие способность к размножению, получили название L-форм в честь института им.Листера (Англия). Независимо от формы исходной клетки (кокки, палочки) L- формы этих бактерий морфологически неразличимы и представляют сферические образования. L-формы могут возникать в естественных условиях в организме человека в результате длительного лечения антибиотиками, чаще всего пенициллином. L-формы бактерий играют существенную роль в патогенезе многих инфекционных заболеваний.

27.Реакция агглютинации.(РА) Реакция агглютинации (РА).Различают агглютинацию специфическую, в основе к-рой лежит взаимодействие антигена с гомологичнымантителом, содержащимся в организме животного, к-рому был введен данный антиген (иммуноагглютинация); неспецифическую (химическую), возникающую от изменения рН среды, концентрации электролитов; спонтанную, к-рую наблюдают при суспендировании бактерий (находящихся в R-форме) в физиологическом растворе и при нагревании, что связано с изменением коллоидного состояния бактериальной клетки. Антиген,участвующий в РА, называется агглютиногеном, антитело — агглютинином, образующийся осадок — агглютинатом. При образовании агглютината имеет значение количественное соотношение антигена и антител (феномен оптимума). При избытке или недостатке антител происходит задержка А.

Реакция агглютинации (РА) одна из первых иммунологических реакций, которую применяют в микробиологической практике. Впервые (1895) РА для диагностики брюшного тифа применил Ф. Видаль. Позже (1897) эту же реакцию для диагностики бруцеллеза у людей использовал А. Райт. РА нашла применение также при диагностике пуллороза цыплят, лептоспироза, инфекционного аборта кобыл, а также для типизации неизвестных культур микробов по заведомоизвестной агглютинирующей сыворотке. РА высокочувствительна; с ее помощью можно выявить 0,01 мкг азота белка антител в 1 мл.

Разработано несколько вариантов реакции агглютинации, различающихся по методическому исполнению и цели исследования.2. РА на стекле.

При этом варианте РА испытуемыми могут быть как сыворотка, так и антиген, но чаще всего этот вариант используют для идентификации микроорганизмов.

1. Для идентификации микроорганзма (м/о) на обезжиренное предметное стекло наносят раздельно каплю известной агглютинирующей сыворотки, например сальмонелиозной, и каплю физиологического раствора (контроль). Затем бактериологической петлей берут бактериальную массу изучаемой культуры из колонии в чашке Петри или с поверхности скошенного МПА в пробирке и суспендируют раздельно в иммунной сыворотке и физиологическом растворе до получения гомогенной взвеси. Результат учитывают через 2…4 мин.Учет результатов: в контрольной пробе изменения должны отсутствовать. При специфическом соответствии культуры бактерий иммунной сыворотке появляются хлопья агглютината (положительный результат), в случае отсутствия феномена агглютинации делают заключение о том, что исследуемая культура бактерий не соответствует иммунной сыворотке.2. Обнаружение аниттел в исследуемой сыворотке крови рассмотрим на примере роз-бенгал пробы, применяемой при серодиагностике бруцеллеза. На предметное стекло наносят 0,3 мл исследуемой сыворотки крови животного и 0,03 мл бруцеллезного антигена (окрашенные розовым-бенгальским клетки бруцелл). Компоненты тщательно перемешивают покачиванием стекла и через 4 мин учитывают результат.Учет результатов: при положительной реакции появляются розовые хлопья агглютината. Серологическую реакцию подобного типа относят к качественной, так как с ее помощью можно выявлять антитела к возбудителю в сыворотке крови животного, но невозможно оценить их количественное содержание.3. Пробирочная РА.

1. Обнаружение антител в сыворотке крови рассмотрим на примере РА для серологической диагностики бруцеллеза крупного рогатого скота. Схема постановки опыта приведена в таблице 1. Общий объем компонентов реакции 1 мл.

Одновремено по аналогичной схеме исследуют заведомо положительную и отрицательную сыворотки (положительный и отрицательный контроли).Учет результатов начинают с контрольных пробирок — не должно быть спонтанной (неспецифической) агглютинации в 6-й пробирке (контроль антигена) и хлопьев осадка в 1-й пробирке (контроль сыворотки). В остальных пробирках наличие и интенсивнось агглютинации учитывают визуально и оценивают в крестах: 1) (+ + + +) — полная агглютинация — хорошо выраженный осадок и полное просветление жидкости (агглютинировало 100% антигена); 2) (+ + +) — неполная аглютинация с хорошо выраженным осадком и со слабой опалесценцией жидкости (агглютинировало 75% антигена); 3) (+ +) — частичная агглютинация с небольшим осадком, надосадочная жидкость мутная (агглютинировало 50% антигена); 4) (+) — очень небольшой осадок, жидкость непрозрачная (агглютинировало 25% антигена); 5) (–) — отсутсвие агглютинации, осадка нет, жидкость мутная.

За положительный результат принимают агглютинацию минимум на два креста. Максимальное разведение исследуемой сыворотки крови, обеспечивающее агглютинацию минимум на два креста или более, называют титром сыворотки. Титр сыворотки отражает количественное содержание антителв крови исследуемого животного.Пробирочную РА используют не только для серодиагностики инфекционных болезней, но также для оценки активности диагностических агглютинирующих сывороток или интенсивности пост вакционального иммунологического ответа.

Количество антител млжет служить диагностическим критерием. Под диагностическим титром понимают минимальное количество антител к данному антигену в исследуемой сыворотке, заведомо превышаеющее количество нормальных антител к используемому в реакции антигену в сыворотке животного того же вида. При диагностическом титре антител и выше животное рассматривают как больное или переболевшее. При некоторых инфекциях этот подход не всегда продуктивен, и тогда исследуют «парные сыворотки», т.е. сыворотки, взятые от животного дважды с интервалом три-четыре недели, причем первую пробу необходимо брать не позднее двух-трех суток после появления клинических симптомов болезни. На активных инфекционный процесс указывает существенное превышение титра антител во второй пробе.2. Для идентификации м/о используют пробирочную РА, если из-за антигенного родства с различными видами или внутривидовыми сероварами в РА на стекле микроорганизм определить не удалось.

Например, если культура E. Coli дает в РА на стекле положительный результат одновременно с иммунными сыворотками против нескольких О-серогрупп, ее испытывают как антиген с теми же сыворотками уже в пробирочной РА и относят к той О-серогруппе, с сывороткой которой она дает максимальные титры.

18. Возбудители бруцеллеза. Таксономия, характеристика, микробиологическая диагностика, специфическая профилактика.Таксономия: Возбудители бруцеллеза B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.canis, B.ovis относятся к отделу Gracilicutes, роду Brucella.Морфология. Мелкие, грамотрицательные палочки овоидной формы. Не имеют спор, жгутиков, иногда образуют микрокапсулу.Культуральные свойства: облигатные аэробы. B.abortus для своего роста нуждается в присутствии 5-10 % углекислого газа. Оптимальной для роста являются температура 37ºС. Требовательны к питательным средам и растут на специальных средах (печеночных, кровяной агар). Их особенностью является медленный (в течение 2 нед) рост. В жидких средах – равномерное помутнение с небольшим осадком. На плотных – мелкие, круглые гладкие голубые колонии. Диссоциация от S- к R-формам колоний.Биохимическая активность: очень низкая; содержат каталазу и оксидазу, нитраты редуцируют в нитриты, цитраты не утилизируют, продуцируют Н2S.Антигенная структура. O-антиген - соматический, и капсульный антигены. Две разновид­ности О-антигена -А(абортус) и М(мелитензис). Иногда обнаруживают К-антиген.

Факторы патогенности. Образуют эндотоксин, обладающий высокой инвазивной активностью. Продуцируют один из ферментов агрессии - гиалуронидазу. Их адгезивные свойства связаны с белками наружной мембраны.

Резистентность. Быстро погибают при кипячении, при действии дезинфицирующих веществ, устойчивы к низкой температуре: в замороженном мясе они сохраняются до 5 мес, в молочных продуктах - до 1,5 мес.Эпидемиология. Зоонозная инфекция. Источник - крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, овцы, выделяющие B.melitensis. Люди более восприимчивы к этому виду

возбудителя. Реже заражение происходит от коров (B.abortus) и свиней (B.suis). Больные люди не являются источником заболевания.

Патогенез. Проникают в организм через слизистые оболочки или поврежденную кожу, попадают сначала в регионарные лимфатические узлы, затем в кровь, разносятся по всему организму и внедряются в органы ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенку, костный мозг). Там они могут длительное время сохраняться и вновь попадать в кровь. При гибели освобождается эндотоксин, вызывающий интоксикацию.Клиника. Инкубационный период составляет обычно 1-3 нед. Длительная лихорадка, озноб, потливость, боли в суставах, радикулиты.

Иммунитет. После перенесенного заболевания формируется непрочный иммунитет. Клеточно-гуморальный, нестерильный, относительный.

Микробиологическая диагностика.

Микробиологическая диагностика обычно проводится путем серологических исследований (реакция Райта и Хеддлсона).Бактериологическое исследование. Для получения гемокультуры кровь засевают в два флакона печеночного бульона. Один из них (для выделения культуры В. melitensis) инкубируют в обычных аэробных условиях, другой (для выделения первич­ной культуры В. abortus) - с СО2. В первых генерациях бруцеллы растут очень медленно. На агаре бруцеллы образуют бесцветные колонии, в бульоне - помутнение и слизистый осадок.В мазках, окрашенных по Граму, обнаруживаются мелкие грамотрицательные формы. Они неподвижны, спор не образуют, в определенных условиях появляется видимая капсула.

Для быстрой идентификации бруцелл ставят реакцию агглютинации со специфическими агглютинирующими сыворотками на стекле и определяют чувствительность к специфическому фагу. Все виды бруцелл не ферментируют углеводы. Их дифференцируют по образованию H2S, чувствительности к СО2, действию анилиновых красителей (основной фуксин).

Серодиагностика. Реакция агглютинации Райта с бруцеллезным диагностикумом. Положительные результаты отмечаются спустя 1 нед. после начала заболевания и сохраняются у переболевших животных в течение многих лет. Диагностический титр реакции 1:200. Для ускоренной серодиагностики применяется реакция агглютинации Хеддлсона, которая ставится с неразведенной сывороткой больного и концентрированным антигеном - диагностикумом, окрашенным метиленовым синим. При положительной реакции появляются хлопья синего цвета. Реакция положительна при наличии агглютинации на «++».

Для серодиагностики используют РПГА, РИФ, РСК, метод определения неполных антител. В поздние периоды заболевания процент положительных серологических реакций (агглютинации, РПГА и РСК) начинает снижаться, и большее диагностическое значение приобретают кожно-аллергическая проба и реакция Кумбса.Биопроба. Применяется для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Исследуемый материал вводят морским свинкам подкожно в паховую область. Кусочки органов и лимфатических узлов засевают на питательные среды для получения чистой культуры и ее идентификации.Кожно-аллергическая проба (реакция Бюрне). На предплечье внутрикожно вводят 0,1 мл бруцеллина. При наличии аллергии уже через 6 ч. могут появиться гиперемия кожи и болезненная отечность. Учет реакции производят через 24 ч. Реакция обладает высокой чувствительностью.

Лечение: антибиотики широкого спектра действия. Специфическая иммунотерапия убитой лечебной бруцеллезной вакциной или бруцеллина (фильтрат бульонных культур В. melitensis, B.abortus, В.suis), убитых нагреванием. При острых формах – бруцеллезный иммуноглобулин.

Профилактика: живая бруцеллезная вакцина получена штамма ВА19А, полученная из В. abortus, создает перекрестный иммунитет против других видов бруцелл.Бруцеллезный единый диагностикум. Взвесь убитых бруцелл, окрашенных метиленовым синим, применяется при серологической диагностике бруцеллеза постановкой реакции агглютинации Райта и Хеддлсона.

Накожная сухая живая бруцеллезная профилактическая вакцина. Взвесь вакцинного штамма. В. abortus применяется для профилактики бруцеллеза.