Поможем в ✍️ написании учебной работы

Имя

Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

Выберите тип работыЧасть дипломаДипломная работаКурсовая работаКонтрольная работаРешение задачРефератНаучно - исследовательская работаОтчет по практикеОтветы на билетыТест/экзамен onlineМонографияЭссеДокладКомпьютерный набор текстаКомпьютерный чертежРецензияПереводРепетиторБизнес-планКонспектыПроверка качестваЭкзамен на сайтеАспирантский рефератМагистерская работаНаучная статьяНаучный трудТехническая редакция текстаЧертеж от рукиДиаграммы, таблицыПрезентация к защитеТезисный планРечь к дипломуДоработка заказа клиентаОтзыв на дипломПубликация статьи в ВАКПубликация статьи в ScopusДипломная работа MBAПовышение оригинальностиКопирайтингДругое

Нажимая кнопку "Продолжить", я принимаю политику конфиденциальности

Основной метод диагностики стафилококковых инфекций бактериологический (табл. 1). Из исследуемого материала готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие в препаратах грамположительных кокков, располагающихся в виде гроздьевидных скоплений позволяет поставить предварительный диагноз стафилококковой инфекции. Однако в патологическом материале стафилококки редко образуют типичные скопления, а располагаются поодиночке или небольшими группами.

Посев исследуемого материала проводят на кровяной агар и желточно-солевой агар для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37°С в течение суток. На следующий день изучают культуральные свойства. Стафилококки образуют мутные круглые ровные колонии средних размеров кремового, желтого или оранжевого цвета (S-формы). Для определения гемолитической активности выявляют зону полного (α-гемолиза) и неполного (β-гемолиза). Гемолитические свойства бактерий связаны с наличием гемолизина (экзотоксина, мембранотоксина по механизму действия). Лецитиназную активность (способность продукции экзофермента лецитиназы) определяют на желточно-солевом агаре. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью образуются зоны опалесценции (помутнения с перламутровым блеском). Для последующей идентификации проводят накопление чистой культуры на скошенном агаре. Для постановки реакции на плазмокоагулазу плазму крови, разведенную в 2 раза, разливают по 0,4 мл в пробирки, вносят одну петлю испытуемой культуры стафилококка и помещают в термостат при 37°С. Оценивают результат через 1, 2, 4 и 24 часа. При наличии плазмокоагулазы происходит свертывание плазмы с образованием сгустка фибрина (гель). Плазмокоагулазная активность является основным идентификационным признаком S.aureus.

Таблица 1. Схема бактериологического метода диагностики стафилококковых инфекций

1 день	1. Ориентировочная бактериоскопия: окраска по Граму - гроздьевидные скопления грамм (+) кокков 2. Посев на ЖСА и кровяной агар с целью получения изолированных колоний
2 день	1. Изучение культуральных свойств (мутные круглые ровные колонии средних размеров кремового, желтого или оранжевого цвета) ЖСА: при наличии лецитиназы вокруг колоний образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком (опалесценция); Кровяной агар: при наличии гемолизина вокруг колоний образуются зоны α- и ß-гемолиза; 2. Приготовление мазка, окраска по Граму и изучение морфологических и тинкториальных свойств: гроздьевидные скопления грам(+) кокков 3. Пересев на скошенный агар с целью получения чистой культуры
3 - 4 день	1. Определение чистоты выделенной чистой культуры макроскопически и микроскопически 2. Идентификация выделенной чистой культуры по: · морфологическим и тинкториальным свойствам: гроздьевидные скопления грам(+) кокков · культуральным свойствам: мутные круглые ровные колонии средних размеров кремового, желтого или оранжевого цвета (признаком патогенности стафилококков является образование золотистого или желто-лимонного пигмента · биохимическим свойствам · факторам патогенности (наличие плазмокоагулазы, лецитиназы, гемолизина) · фаготипу (фагоидентификация) 3. Определение чувствительности выделенной чистой культуры к антибактериальным препаратам. Особое значение для идентификации стафилококков с высокими вирулентными свойствами и множественной устойчивостью к антибиотикам имеет оценка чувствительности к метициллину (MRSA-стафилококки).

Для определения ферментации маннита в анаэробных условиях с целью внутривидовой идентификации используется дифференциально-диагностическая среда, содержащая маннит и индикатор. При расщеплении маннита образуются кислые продукты, изменяющие цвет индикатора в среде (индикатор Андреде – красная окраска, индикатор ВР – синюю).

Для проведения фагоидентификации используют международный набор фагов (21 тип). Исследуемую культуру засевают в чашки Петри методом газона, подсушивают и наносят каплю фага, предварительно расчертив дно чашки на квадраты. Используют группоспецифические бактериофаги (поливалентные) с целью определения фагогруппы, а затем определяют фаготип с помощью моновалентных бактериофагов.

Важным этапом бактериологического анализа является изучение чувствительности к антибактериальным препаратам с использованием различных методик (диско-диффузионный метод, метод серийных разведений, Е-тест).

Таблица 2. Дифференциальные признаки стафилококков

Признак

Вид

S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus Наличие липохромного пигмента +/- - + Образование плазмокоагулазы + - - Образование лецитиназы + - - Гемолитическая активность + - -  Ферментация маннита в анаэробных условиях + - + Ферментация углеводов в аэробных условиях: · глюкозы · сахарозы · лактоза · трегалоза · фруктоза     + + + + +     + + +/- - +     - + +/- + + Чувствительность к новобиоцину S S R

Примечание: (+) – наличие признака, (-) –отсутствие признака, S – чувствительный, R - резистентный.

Для экспресс-идентификации применяют тест латекс-агглютинации с использованием коммерческих частиц латекса, нагруженных антителами, например, «Staphylatex» American Bioscan. Для биохимической идентификации используют системы Api Staph (Bio Merueux).

Серологические исследования не имеют принципиального значения, а результаты часто носят противоречивый характер, что связано со сложной антигеннной структурой этого микроорганизма. Иногда для типовой идентификации энтеротоксинов проводят реакцию преципитации в геле со специфическими сыворотками.

Иммунохимические исследования основаны на обнаружении антигенов (ферментов и токсинов) возбудителя в материале от больного с помощью чувствительных серологических реакций.

Молекулярно-генетические методы исследования позволяют выявить ДНК возбудителя в исследуемом материале методом ПЦР.

Лечение. Тактика лечебных мероприятий определяется особенностями клинических форм. Общие принципы лечения основываются на комплексной терапии, включающей адекватное хирургическое вмешательство (санация гнойных очагов), рациональную антибактериальную терапию и иммунотерапию.

Таблица 3. Спектр используемых антибактериальных препаратов

I	Пенициллины (оксациллин, нафциллин)
II	Цефалоспорины, тетрациклины, аминогликозиды, макролиды, фторхинолоны
III	Ванкомицин используется в случае MRSA (метициллин резистентных стафилококков)

Широкое распространение штаммов стафилококков с множественной лекарственной резистентностью делает необходимым назначение антибактериальных препаратов с учетом результатов антибиотикограммы (табл. 3). Предпочтительно назначение антибиотиков широкого спектра действия (полусинтетические пенициллины), обладающие устойчивостью к β-лактамазам. Высокоэффективны комбинированные препараты, содержащие блокаторы β-лактамаз (амоксиклав – амоксициллин + клавулоновая кислота).

Иммунопрофилактика. Создание эффективной вакцины для профилактики поражений у людей и животных - актуальная и сложная проблема прикладной иммунологии. Это обусловлено сложным антигенным строением, отсутствием информации о роли всех антигенных субстанций в развитии искусственной невосприимчивости и наличием большого количества сероваров. В настоящее время существуют убитые вакцины, обеспечивающие образование высоких титров антител, но лишь к антигенам вакцинных штаммов. Для создания антитоксического иммунитета используют стафилококковый анатоксин, но его активность ограничена лишь группой бактерий I фагогруппы. В отдельных случаях вводят стафилококковый иммуноглобулин и противостафилококковую донорскую гипериммунную плазму. С учетом того, что стафилококковые инфекции протекают на фоне иммуносупрессии показано назначение иммуностимуляторов.

III. План практической работы