Схема бактериологического метода диагностики ботулизма
Поможем в ✍️ написании учебной работы
Поможем с курсовой, контрольной, дипломной, рефератом, отчетом по практике, научно-исследовательской и любой другой работой

I этап

1 день Посев исследуемого материала на среду Китта-Тароцци (среду накопления) или сразу на сахарно-кровяной агар и высокий столбик сахарного МПА, инкубация в анаэробных условиях 37°С
2 день 1. Изучение культуральных свойств Сахарно-кровяный агар: неправильной формы колонии с отростками или ровными краями, окруженные зоной гемолиза Высокий столбик сахарного МПА: в виде комочков ваты или чечевицы 2. Пересев на среду Китта-Тароцци с целью выделения чистой культуры
II этап 3 день 1. Идентификация чистой культуры по: · морфологическим и тинкториальным свойствам (крупные грам+ палочки с субтерминально расположенной спорой «теннисные ракетки») · культуральным (строгие анаэробы, на сахарно-кровяном агаре неправильной формы колонии с отростками или ровными краями, окруженные зоной гемолиза; в высоком столбике сахарного МПА колонии в виде комочков ваты или чечевицы · токсигенности и типу токсина (используют биопробу на мышах с поливалентной антитоксической сывороткой и для определения типа токсина с моновалентными сыворотками; ИФА и РПГА для определения типа токсина)

Лечение. Наиболее эффективно раннее применение соответствующей антитоксической сыворотки. До установления типа токсина используется поливалентная (А, В, С, Е) лошадиная (гетерологичная) антисыворотка, которую вводят по методу Безредко. После лабораторного определения типа токсина вводят антисыворотку соответствующего типа. Одновременно проводят антибактериальную (пенициллины и др.) и симптоматическую терапию.

Профилактика. Для специфической профилактики используют ботулинический полианатоксин, входящий в состав комплексной вакцины для профилактики анаэробных инфекций. Однако в силу спорадичности данного заболевания иммунопрофилактика ботулизма не нашла широкого применения.

В основе профилактики ботулизма лежит неукоснительное соблюдение санитарно-гигиенических правил при производстве пищевых продуктов. При производстве консервированных продуктов необходимо соблюдать условия стерилизации консервов и их хранения, исключающие накопление токсина, а также использование ингибиторов (нитриты).

Возбудитель газовой гангрены

Газовая гангрена (от греч. gangraina, разъедающая язва) - раневая инфекция, вызываемая клостридиями (С. perfringens, С. novyi, С. ramosum, С. histolyticum, С. septicum и др.); характеризуется быстро наступающим и распространяющимся некрозом преимущественно мышечной ткани, отеком, газообразованием в тканях (симптом крепитации), тяжелой интоксикацией и отсутствием воспалительных явлений.

Clostridium perfringens

Clostridium perfringens - вид бактерий рода Clostridium, который занимает первое место по частоте встречаемости и тяжести, вызываемой им газовой гангрены. С. perfringens также является причиной развития пищевых токсикоинфекций, поскольку вырабатывает энтеротоксин. По способности образовывать токсины микроорганизмы разделяют на 6 сероваров: А, В, С, D, E, F. Основной возбудитель заболеваний человека – бактерии типа А. При некротических энтеритах иногда выделяют микроорганизмы типов С и F; возбудители типа D вызывают инфекционные энтеротоксемии.

Распространенность и устойчивость в окружающей среде. Возбудитель обитает в кишечнике человека и животных, его выделяют из почвы, воды. Наиболее часто в почве и испражнениях обнаруживают серотип А. Споры способны длительное время сохраняться в окружающей среде; способны вегетировать в почве, богатой гумусом. С. рerfringens типа А относительно толерантен к кратковременному кислородному воздействию. Споры высоко устойчивы к физическим и химическим воздействиям. Термоустойчивость спор сероваров В и D относительно невысока (погибают при кипячении в течение 15-30 минут), споры типов А и С более устойчивы и выживают при кипячении и даже автоклавировании в течение 1-6 часов.

Морфологические и тинкториальные свойства. Короткие, крупные, неподвижные палочки с обрубленными концами (0,6-1,0х1,0-1,5 мкм). Грамположительны. Образуют крупные овальные споры, расположенные центрально (у С. рerfringens типа А – субтерминально). В тканях палочки образуют капсулу.

Культуральные свойства. Строгие анаэробы. На плотных средах бактерии образуют S и R-колонии. S-колонии круглые, сочные, куполообразные, с гладкими ровными краями, влажной консистенции. Сначала они прозрачные, позднее они становятся мутными, серовато-белыми. R-колонии неправильной формы, бугристые с неровными шероховатыми краями, сухой консистенции; в глубине агара напоминают комочки ваты. На кровяно-сахарном агаре образуют гладкие сероватые колонии с ровными краями, окруженные зоной полного или частичного гемолиза. Характерное свойство колоний С. рerfringens типа А, являющееся дифференциальным признаком – способность менять серовато-белый цвет на зеленовато-оливковый после кратковременного пребывания в аэробных условиях. На желточном агаре образуют колонии, окруженные зоной опалесценции, образующейся из лецитина куриного желтка под действием лецитиназы. На среде Китта-Тароцци признаки роста появляются через 1-2 часа в виде помутнения среды и появлением пузырьков газа из-под кусочков печени при встряхивании. Культуры С. рerfringens типа А имеют характерный запах масляной кислоты.

Антигенные свойства. Выделяют 6 сероваров (A-F), различающихся по антигенным свойствам, продуцируемых экзотоксинов. Тип А включает много подтипов, идентифицируемых в реакции агглютинации, что облегчает диагностику в случае пищевых токсикоинфекций и раневых анаэробных инфекций.

Биохимические свойства. Бактерии ферментируют углеводы (ксилозу, галактозу, сахарозу, маннозу и др.) с образованием кислоты и газа. От прочих клостридий С. рerfringens отличает способность восстанавливать нитраты, расщеплять лактозу, образовывать лецитиназу. Протеолитическая активность слабая: разжижает желатину, не разлагает казеин. Интенсивно створаживает молоко с образованием крупноячеистого творожистого сгустка, напоминающего пену на волнах («штормовая реакция»).

Медицинское значение. С. рerfringens типов А, С и D вызывают газовую гангрену, некротический энтерит и пищевые токсикоинфекции у человека и животных. Некоторые токсины обладают свойствами ферментов. Тип А включает много подтипов. Для человека патогенны С. perfringens А, С и D. Серовары В, С, D, Е вызывают заболевания у сельскохозяйственных животных.

Факторы патогенности. С. рerfringens продуцируют более 12 экзотоксинов, обозначаемых буквами греческого алфавита (α, β, γ, δ, ε и др.). Наиболее важную роль в развитии патологического процесса играет α-токсин (лецитиназа, фосфолипаза С). Продуцентами являются все серотипы, однако наиболее активные являются клостридии типа А. Токсин разрушает лецитин клеточных мембран животных клееток, вызывая лизис эндотелиальных клеток, эритроцитов, лейкоцитов и др. Проявляет дермонекротизирующее, гемолитическое и летальное действие.

Энтеротоксин. Продуценты бактерии типов А и С, вызывающие пищевые токсикоинфекции. Термолабильный, с низкой молекулярной массой, действует в нижних отделах тонкого кишечника. Молекула токсина взаимодействует с рецепторами на поверхности эпителиальных клеток, повреждает клеточную мембрану и нарушает транспорт ионов, что ведет к потере жидкости и внутриклеточных белков.

С. рerfringens синтезирует большое количество ферментов, являющихся факторами патогенности: протеазы, коллагеназа, ДНК-аза, желатиназа, гиалуронидазы, способствующие распространению инфекции в тканях организма.

Клинические проявления. Газовая гангрена развивается при попадании С. рerfringens на раневые поверхности, где бактерии активно размножаются в условиях пониженного содержания кислорода. Для поражений характерны некроз тканей с образованием газа с гнилостным запахом.

Пищевые токсикоинфекции, вызванные сероварами А и С:

· С. рerfringens типа А вызывает преимущественно токсикоинфекции легкой и средней степени тяжести. Симптомы появляются через 8-18 часов, после употребления контаминированной пищи. Заболевание начинается остро, с болями в животе, рвотой (иногда с примесью крови) и диареей (до 20 раз в сутки). Симптомы исчезают в последующие 12-24 часа. Летальные исходы наблюдают редко.

· С. рerfringens типа С вызывает некротический энтерит. При острых формах болезнь может привести к смерти пациента в течение 12-24 часов.

Clostridium novyi

С.novyi является одним из основных возбудителей газовой гангрены.

Распространенность и устойчивость в окружающей среде. Возбудитель широко распространен в окружающей среде, обитает в кишечнике здоровых животных. Устойчив к нагреванию, выдерживание кипячение в течение 1-2 часов; в костях животных сохраняется до 10 лет. Споры высоко устойчивы к физическим и химическим воздействиям.

Морфологические и тинкториальные свойства. Крупные прямые или слегка изогнутые грамположительные подвижные палочки (4-10х1-2 мкм). Перитрихи (20-25 жгутиков). Образуют крупные овальные споры, расположенные субтерминально.

Культуральные свойства. Строгие анаэробы. На плотных средах через 48 часов бактерии образуют круглые, сочные, сероватые, полупрозрачные колонии, иногда с зернистой поверхностью и неровными краями (S и R-колонии). На кровяно-сахарном агаре типы А, В и С образуют колонии, окруженные зоной гемолиза. Бактерии типа D не обладают гемолитической активностью. В жидких средах растут медленно и вызывают сдвиг рН в кислую сторону.

Антигенные свойства. Выделяют 4 серовара A, В, С и D. Серологическая идентификация основана на выявлении соматических антигенов.

Биохимические свойства. Бактерии ферментируют углеводы с образованием кислоты и газа. Протеолитическая активность слабая: все штаммы разжижают желатину, свертывают молоко (медленно). Бактерии типа D образуют индол и сероводород.

Медицинское значение. С.novyi типов А и В вызывают газовую гангрену у человека и животных.

Факторы патогенности. С.novyi вырабатывают 8 экзотоксинов, обозначаемых буквами греческого алфавита (α, β, γ, δ, ε и др.), однако они не тождественны токсинам С. рerfringens: лецитиназа, лецитиназа С, гемолизин, липаза и др.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования являются раневое отделяемое, отечная жидкость, кусочки мышечной ткани, перевязочный материал. Рекомендуется брать материал из разных участков очага поражения, особенно из глубоких слоев. При сепсисе исследуемым материалом является кровь.

На первом этапе проводят первичную бактериоскопию: наличие в препаратах крупных грамположительных палочек со спорами, некоторые из которых образуют макрокапсулу позволяет поставить предварительный диагноз.

Исследуемый материал вносят в несколько пробирок со средой Китта-Тароцци, среду Вильсона-Блера (железо-сульфитный агар) и молоком. Часть пробирок прогревают при 80°С в течение 30 мин для уничтожения неспорообразующих бактерий. Посевы инкубируют в термостате при 37°С. Клостридии растут в глубине среды, в молоке образуют творожистый сгусток. На среде Китта-Тароцци отмечается помутнение и газообразование, а на среде Вильсона-Блера черные колонии в глубине агарового столбика.

Для получения чистой культуры производят пересев на кровяно-сахарный агар и инкубируют в строго анаэробных условиях 3-4 дня. Выросшие пробирки пересевают на среду Китта-Тароцци. Идентификацию проводят по биохимическим свойствам.

Для быстрой серологической идентификации лецитиназы С. рerfringens проводится лецитиназная проба, основанная на реакции нейтрализации токсина моновалентными сыворотками. Исследуемый материал (раневое отделяемое) помещают в пробирки с раствором лецитина и добавляют антисыворотки. Присутствие лецитиназы выявляется помутнением жидкости в пробирке. При нейтрализации лецитиназной активности токсина соответствующей антисывороткой жидкость остается прозрачной. Для серологической идентификации токсинов также может быть использована биопроба.

Дата: 2019-07-24, просмотров: 222.