являются следующие вирусы:

1. Энтеровирусы – род из семейства Picornaviridae – включает 68 антигенно различающихся серотипов, в том числе:

- полиовирусы: 1-3 (3 серотипа);

- Коксаки А: А1-А22, А24 (23 серотипа);

- Коксаки В: В1-В6 (6 серотипов);

- ECHO (Enteric Cytopathogenic Human Orphans): 1-9; 11-27; 29-34 (32 серотипа);

- энтеровирусы человека: 68-71 (4 серотипа).

Вирус гепатита А (бывший 72-й серотип энтеровируса) выведен из состава энтеровирусов в самостоятельный род Heparnavirus того же семества Picornaviridae.

2. Ротавирусы – род из семейства Peoviridae – 4 серотипа (по белкам VP3 и VP7).

3. Калицивирусы, в том числе вирусы группы Норволк (род Norovirus) и др.

4. Астровирусы.

5. Корокавирусы – 3-й серотип.

6. Аденовирусы – некоторые серотипы.

Б. Основные признаки энтеровирусов, по которым они объединяются в один род:

1. Вирусологические:

а) размер – 22-30 нм;

б) геном – линейная однонитчатая нефрагментированная позитивная РНК;

в) устойчивость к эфиру; 

г) повышение терморезистентности в присутствии ионов Mg⁺⁺ и Ca⁺⁺ ;

д) устойчивость к желчи, кислотам, щелочам (в диапазоне рН 3,0 - 10,0);

е) способность размножаться в определенных культурах клеток;

ж) число капсомеров – 60;

з) устойчивость во внешней среде.

2. Эпидемиологические:

а) выраженная сезонность заболеваний (лето, осень);

б) фекально-оральный механизм передачи;

в) выделение вируса из кишечника, носоглотки, ликвора, крови;

г) обнаружение в сточных водах;

д) преимущественное поражение детей до 12 лет;

е) широкое носительство среди здоровых людей.

В. Основные свойства ротавирусов:

Род Rotavirus семейства Reoviridae. Родовое название происходит от латинского слова rota – колесо, так как форма вириона сходна с колесом телеги. Это обусловлено тем, что вирион имеет сферическую форму, а его геном окружен нуклеокапсидом, состоящим из двух слоев: внутренний слой плотно окружает сердцевину, имеет форму икосаэдра и соприкасается с тонким наружным слоем капсида, в результате образуется структура, напоминающая колесо: втулка, спицы и ободок. В выделениях больного обычно встречаются однокапсидные (60-65 нм) и двухкапсидные вирионы (70-75 нм). Инфекционными являются полные двухкапсидные вирионы.

Геном вириона представлен двунитевой фрагментированной РНК (11 фрагментов); в сердцевине кроме геномной РНК располагается вирионная РНК-полимераза. Суперкапсид отсутствует. В составе вириона имеется 8 белков (VP1-VP8). Особенно важным является VРЗ-белок наружного капсида. Он отвечает за проникновение вируса в клетку и его вирулентность, обладает гемагглютинирующим свойством.

Для диагностики ротавирусной инфекции предложены следующие методы: а) РПГА с применением антительного ротавирусного диагностикума; б) реак­ция коагглютинации; в) тест-системы для обнаружения антигена с помощью ИФМ.

Г. Основные свойства калицивирусов:

Вирионы имеют сферическую форму и диаметр 37 нм, суперкапсида нет. Геном представлен позитивной однонитевой РНК с м. м. около 2,6-2,8 МД. При негативно-контрастной микроскопии на поверхности вирионов обнаруживается 32 глубоких (около 10 нм) чашевидных вдавления, что послужило основанием дать им название калицивирусы (греч. calyx - чаша). Калицивирусы не размножаются в культурах клеток. Для диагностики в основном используют метод иммунной электронной микроскопии.

Д. Для диагностики ОКВИ могут быть использованы следующие методы:

1. Иммуноэлектронной микроскопии.

2. Иммунологические реакции: коагглютинации, преципитации в геле (различные варианты), РСК, иммунофлуоресцентный метод, иммуноферментный метод, радиоиммунный метод.

3. Биологический метод.

4. Использование ПЦР.

Е. Арбовирусы

«Арбовирусы» (лат. Arthropoda - членистоногие и англ. borne - передающийся) – вирусы, передающиеся восприимчивым позвоночным (в том числе и человеку) через укусы кровососущих членистоногих. Передача возбудителя у членистоногих из поколения в поколение может осуществляться трансовариально. Арбовирусы - нетаксономическое, собирательное понятие. В настоящее время насчитывается около 400 арбовирусов, относящихся в основном к семействам тогавирусов, флавивирусов, буньявирусов, аренавирусов, реовирусов, рабдовирусов. Для человека патогенны около 100 из них. Природные очаги арбовирусных инфекций встречаются во всех районах земного шара, но чаще в тропических дождевых лесных зонах из-за обилия видов теплокровных животных и членистоногих. В России встречаются лишь некоторые из арбовирусных инфекций.

Заболевания, вызываемые арбовирусами, могут проявляться в виде трех клинических синдромов:

1. лихорадки недифференцированного типа, часто называемой «денгеподобной», с наличием мелкопятнистой сыпи или без нее и с относительно легким течением;

2. геморрагической лихорадки, часто с тяжелым течением и летальным исходом;

3. энцефалита, нередко с летальным исходом. Деление это весьма условно, так как один и тот же возбудитель может вызывать заболевание с преобладанием тех или иных симптомов и различной тяжестью течения.

З А Н Я Т И Е  15

Дата ______________

Тема: Микробиологическая диагностика гепатитов А, В, С, D , E , G , TT и ВИЧ-инфекции

План занятия:

1. Микробиологическая диагностика вирусных гепатитов (А,В,С,Е, дельта-гепатиты):

а) способы обнаружения вирусов,

б) использование иммунологических реакций. Методика "захвата" антител, относящихся к классу IgМ, для диагностики гепатита А. Применение реакции обратной пассивной гемагглютинации и ИФМ для обнаружения в сыворотке больных или носителей поверхностного антигена вируса гепатита В.

2. Особенности структурной организации ВИЧ и его генома.

3. Механизм взаимодействия ВИЧ с клеткой, особенности патогенеза инфекции.

4. Вирусологическая диагностика ВИЧ-инфекции.

5. Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции:

а) определение противовирусных антител у больных и носителей с помощью коммерческих тест- систем, демонстрация;

б) метод иммуноблотинга и его значение.

6. Знакомство с иммунопрепаратами, применяемые для диагностики, профилактики и лечения вирусных заболеваний.

Методические указания

1. Микробиологическая диагностика вирусных гепатитов

Для диагностики вирусных гепатитов могут быть использованы методы:

А. Для обнаружения вируса гепатита А - заражение животных (обезьяны шимпанзе, мармозеты); электронная и иммуноэлектронная микроскопия.

Б. Для обнаружения антител к вирусу (или к его антигенам) иммунологические реакции: РСК, гемагглютинация иммунного прилипания, иммунофлуоресценция, иммуноферментный и радиоиммунный методы, реакция пассивной гемагглютинации и др. способы.

Наиболее специфичным методом диагностики гепатита А является использование иммуноферментного метода "захвата" антител класса IgМ. На стенках полистироловых луночек вначале адсорбируют антитела против IgM (анти-IgM, затем добавляют исследуемую сыворотку, в которой определяют наличие антител класса IgМ к вирусу гепатита А. Если они имеются, то образуется комплекс IgM- анти IgM. Далее добавляют специфический антиген (вирус гепатита А), который связывается с противовирусными антителами. Для обнаружения образовавшегося комплекса добавляют противовирусные антитела; меченные ферментом (пероксидазой). После отмывания луночек в них добавляют субстрат для фермента (ортофенилендиамин) и определяют интенсивность образующейся окраски. Схема.

Для диагностики вирусного гепатита В используют реакции, направленные на обнаружение в сыворотке крови больных поверхностного HBsАg с помощью РОПГА или ИФМ.

2. Особенности структурной организации ВИЧ и его генома.

Вирус СПИДа (ВИЧ) имеет шаровидную форму, его диаметр 100 нм. Оболочка вируса имеет форму многогранника, составленного из 12 пятиугольников и 20 шестиугольников. В центре и углах каждого шестиугольника расположены молекулы gp120 (всего 80 молекул на вирион), оболочка содержит двойной слой липидов, над которыми выступают молекулы gp120, а через мембрану проходит трансмембранный белок gр41.

Сердцевина вириона имеет форму снаряда, составляющие его моле­кулы из трех-четырех белков образуют поверхность в виде дельта-икосаэдра.

Белок gp120 является рецептором вируса, взаимодействующим с рецептором СD4 чувствительных к нему клеток (Т- лимфоциты, макрофаги, моноциты).

В сердцевине вириона содержится его геном. Он представлен двумя идентичными молекулами РНК (у ВИЧ-1 из 9213 нуклеотидов), двумя молекулами затравочной РНК, двумя молекулами полимеразы, обладающей пятью активностями (протеазной, обратной транскриптазы, РНК-азы, ДНК-зависимой ДНК-полимеразы и эндонуклеазы, или интегразы). РНК связана с нуклеокапсидным белком.