Заключение: _________________________________________________________________

__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Антигены по 0,25 мл в каждой пробирке, 1%-ная взвесь эритроцитов в каждой пробирке

3. Вскрытие куриных эмбрионов зараженных вирусом гриппа. Определение наличия вируса гриппа в аллантоисной жидкости с помощью реакции гемагглютинации. Определение типа вируса с помощью РТГА.

Вскрыть, соблюдая необходимые правила (см. занятие 9), куриный эмбрион и отсосать пастеровской пипеткой аллантоисную жид­кость. Наличие вируса в аллантоисной жидкости определяется с помощью реакции гемагглютинации вначале на стекле, а затем в пробирках (для определения титра вируса).

Реакция гемагглютинации обусловлена способностью ортомиксовирусов, имеющих гемагглютинин, взаимодействовать с мукопептидами оболочки эритроцитов ряда животных и птиц. В результате этого взаимодействия происходит склеивание эритроцитов. Реакцию ставят в бактериологических пробирках или на предметных стеклах. Для получения эритроцитов у петухов берут кровь из подкрыльцовой вены стерильным шприцем и дефибринируют в баночке с бусами. Эритроциты фильтруют через марлю, осаждают центрифугированием и трижды отмывают физиологическим раствором. Из осадка эритроцитов готовят 1-2%-ную взвесь на физиологическом растворе. В пробирках готовят последовательные разведения вируса - 1:10, 1:20, 1:40 и т.д. - в объеме 1 мл и добавляют равные объемы взвеси эритроцитов. Для контроля на отсутствие спонтанной агглютинации в одну из пробирок эритроциты добавляют не к вирусной суспензии, а к физиологическому раствору. Пробирки тщательно встряхивают и помещают в термостат при 37°C на 30 мин. Учет реакции производят по форме осадка эритроцитов. Там, где прошла агглютинация, осадок эритроцитов напоминает развернутый зонт. Если агглютинации нет, эритроциты оседают на дно пробирки в вида круглого диска с ровными краями. То последнее разведение вируса, которое еще дает агглютинацию эритроцитов не менее, чем на (+++), носит название гемагглютинирующего титра вируса.

Поставить РТГА на стекле для определения типа вируса в аллантоисной жидкости (см. схему).

Схема определения типа вируса гриппа реакцией торможения гемагглютиниции

	В каплю аллантоисной жидкости добавляют каплю типовой сыворотки и каплю 5% взвеси эритроцитов. К– контроль (эритроциты + физ. раствор).
Заключение:__________________________________________________________ _____________________________________________________________________

4. Ускоренный метод диагностики гриппа с помощью иммунофлуоресценции (разбор и демонстрация).

Иммунофлуоресцентный метод диагностики.

Материал для исследования готовится как при люминесцентном методе. Осадок наносят на предметное стекло, фиксируют жидким фиксатором и обрабатывают специфической люминесцирующей сывороткой, промывают проточной водой, высушивают и микроскопируют с помощью люминесцентного микроскопа. Клетки, содержащие вирус, адсорбируют специфические люминесцирующие антитела и светятся зелёным светом. В препарате необходимо искать неразрушенные эпителиальные клетки.