Культуры
На данном этапе изучаются биохимические, биологические, се-
рологические и генетические свойства культуры.
Идентификация микроорганизмов
С помощью бактериофагов
Бактериофаги имеют выраженное литическое действие на мик-
роорганизмы. Эту особенность используют для определения их вида.
С этой целью в две пробирки с мясо-пептонным бульоном засевают
исследуемую культуру бактерий. Потом в одну из них добавляют не-
сколько капель индикаторного фага. Пробирки инкубируют при
оптимальной температуре в течение 18−24 ч. Сравнивают мутность
бульона в контрольной и опытной пробирках и делают вывод о чув-
ствительности микроорганизмов к литическому действию бакте-
риофагов (рис. 19).
Рис. 19. Литическое действие бактериофагов
(справа – позитивный результат)
С этой целью можно использовать плотную питательную среду,
на которую газоном засевают исследуемую культуру бактерий. После
подсушивания чашек на них бактериологической петлей или пасте-
ровской пипеткой наносят каплю соответствующего разведения бак-
териофага, которое указано на ампуле. Посевы инкубируют в термо-
стате при 37 °С в течение 18−24 ч и фиксируют наличие прозрачных
круглых пятен, которые свидетельствуют о литическом действии
бактериофагу. Позитивный результат свидетельствует о принадлеж-
ности бактерий к определенному виду.
Фаготипирование микроорганизмов проводят с целью анализа
эпидемиологической ситуации для определения источника инфекции.
Чаще всего его выполняют при диагностике стафилококковых, ки-
шечных и других инфекций.
В основе теста лежит определение фаговариантов (фаговаров)
возбудителей. Для этого дно чашки с мясо-пептонным агаром по
числу бактериофагов разделяют на квадраты. Выращивают четырех-
часовую бульонную культуру исследуемого штамма и 1 мл ее засе-
вают на поверхность среды. Распределяют равномерно культуру по
поверхности среды и избыток ее сливают. Чашку подсушивают в
термостате при 37 °С в течение 30−40 мин и на поверхность агара в
каждый квадрат капают пипеткой бактериофаги соответствующих
разведений. Посевы ставят в термостат или оставляют при комнатной
температуре в течение 18−20 ч, после чего оценивают результаты.
Учет результатов проводят на темном фоне с помощью лупы. В зави-
симости от степени чувствительности культуры к бактериофагам вы-
деляют разные степени лизиса бактерий, который оценивается по
наличию лизиса или его отсутствию (рис. 20).
Рис. 20. Фаготипирование бактерий
Учитывая, что чувствительность бактерий к фагу является до-
статочно постоянным признаком, сравнивают фаготипы исследуемых
культур с фаготипом микроба, который был выделен от достоверного
источника инфекции. При их совпадении делают вывод об обнару-
женном источнике инфекции.
МАТЕРИАЛЫ ДЛЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО
ИССЛЕДОВАНИЯ
• Кровь. Кровь для исследования следует брать у больного в
период подъема температуры тела, в начале появления лихорадки.
Рекомендуется исследовать 3−4 пробы крови, взятые с интервалом
4−6 ч, что обоснованно с точки зрения снижения риска «упустить»
транзиторную бактериемию и повышения возможности подтвердить
этиологическую роль выделенной из крови условно-патогенной мик-
рофлоры (например, Staphylococcus epidermidis), если эта микрофло-
ра обнаруживается в нескольких пробах венозной крови. Пробу кро-
ви в количестве 10 мл у взрослого и 5 мл у детей засевают как
минимум в два флакона со средой для аэробных и анаэробных мик-
роорганизмов в соотношении 1:10. Желательно однократное иссле-
дование и артериальной крови.
• Спинномозговая жидкость. Взятие спинномозговой жидкости
(СМЖ) производит врач при люмбальной пункции в количестве
1−2 мл в сухую стерильную пробирку. Пробу немедленно доставляют
в лабораторию, где к ее исследованию приступают также немедлен-
но. При отсутствии такой возможности материал сохраняется при
37 °С в течение нескольких часов. Существенно повышает количество
положительных результатов бактериологического исследования посев
1−2 капель СМЖ в пробирку, содержащую полужидкую среду с глюко-
зой, и в чашку Петри с «кровяным» агаром. Для пересылки материала
используют изотермальные ящики, грелки, термосы или любую дру-
гую упаковку, где поддерживается температура около 37 °С.
• Испражнения. Испражнения для бактериологического иссле-
дования отбирают с помощью стерильных деревянных шпателей в
количестве 3−5 г в стерильный сосуд с плотно закрывающейся
крышкой. Исследование взятого материала должно быть начато не
позже чем через 2 ч. Если невозможно приступить к исследованию в
течение этого времени, следует отобрать небольшое количество ма-
териала, который помещают в соответствующую транспортную сре-
ду. При отборе испражнений следует стремиться направлять для ис-
следования патологические примеси (слизь, гной, частицы эпителия
и др.), если они имеются, избегая попадания в материал примеси кро-
ви, обладающей бактерицидными свойствами.
Для взятия материала могут быть использованы ректальные
тампоны (с ватным наконечником). Тампон должен быть увлажнен
стерильным изотоническим раствором натрия хлорида или транс-
портной средой (но не масляным гелем). Его вводят per rectum на
глубину 5−6 см и, поворачивая тампон, осторожно его извлекают,
контролируя появление на тампоне фекальной окраски. Тампон по-
мещают в сухую пробирку, если к исследованию материала присту-
пят в течение 2 ч, в ином случае − в транспортную среду.
• Мочу (средняя порция свободно выпущенной мочи) в коли-
честве 3−5 мл собирают в стерильную посуду после тщательного
туалета наружных половых органов.
Предпочтительней отбирать утренние порции мочи.
• Желчь собирают во время дуоденального зондирования в
процедурном кабинете отдельно по порциям А, В и С в три стериль-
ные пробирки, соблюдая правила асептики.
Промывные воды желудка собирают в стерильные банки в ко-
личестве 20−50 мл. Следует иметь в виду, что промывание желудка в
этих случаях проводят только индифферентными (не обладающими
бактериостатическим или бактерицидным действием на микроорга-
низмы) растворами − лучше кипяченой водой (без добавления соды,
перманганата калия и пр.).
• Мокрота. Утреннюю мокроту, выделяющуюся во время при-
ступа кашля, собирают в стерильную банку. Перед откашливанием
больной чистит зубы и полощет рот кипяченой водой с целью меха-
нического удаления остатков пищи, слущенного эпителия и микро-
флоры ротовой полости. Промывные воды бронхов. При бронхоско-
пии вводят не более 5 мл изотонического раствора натрия хлорида с
последующим его отсасыванием в стерильную пробирку.
• Материал, отделяемый глоткой, ротовой полостью и носом.
Материал из ротовой полости берут натощак или через 2 ч по-
сле еды стерильным ватным тампоном либо ложечкой со слизистой
оболочки и ее пораженных участков у входов протоков слюнных же-
лез, поверхности языка, из язвочек. При наличии пленки последнюю
снимают стерильным пинцетом. Материал из носовой полости заби-
рают сухим стерильным ватным тампоном, который вводят в глубь
полости носа. Материал из носоглотки берут стерильным заднегло-
точным ватным тампоном, который осторожно вводят через носовое
отверстие в носоглотку. Если при этом начинается кашель, тампон не
удаляют до окончания кашля. Для проведения анализа на дифтерию
исследуют одновременно пленки и слизь из носа и глотки, забирая
материал разными тампонами.
Исследуемый материал засевают на плотные питательные сре-
ды, используя специальные методики для получения роста отдельных
колоний микроорганизмов, которые далее отсевают с целью выделе-
ния чистой культуры возбудителя. Определенные виды бактерий
выделяют, используя элективные (избирательные) среды, которые за-
держивают рост посторонних микроорганизмов или содержат веще-
ства, стимулирующие рост определенных патогенных микробов. Вы-
деленные на питательных средах микроорганизмы идентифицируют,
т.е. определяют видовую или типовую их принадлежность. В послед-
нее время для идентификации в практике здравоохранения исполь-
зуют микротест-системы, представляющие собой панели с набором
дифференциально-диагностических сред, что ускоряет исследование.
Микротест-системы применяют и для определения чувствительности
микроорганизмов к антимикробным препаратам методом разведения
антибиотика в жидкой питательной среде.
Оценивая результаты бактериологического исследования, врач
должен учитывать, что отрицательный результат не всегда означает
отсутствие возбудителя и может быть связан с применением анти-
микробных препаратов, высокой микроцидной активностью крови,
техническими погрешностями. Обнаружение патогенного микроба
в материале от больного вне связи с клинической картиной возможно
в случае реконвалесцентного, здорового или транзиторного бактерио-
носительства.
Выделение из крови при соблюдении всех правил асептики
условно-патогенных микроорганизмов (эпидермальный стафилококк,
кишечная палочка) и даже сапрофитов следует считать проявлением
бактериемии, особенно если эти микробы обнаружены больше чем в
одной пробе материала или в разных субстратах (кровь, моча), по-
скольку при снижении иммунореактивности организма эти и другие
«непатогенные» микроорганизмы могут быть возбудителями инфек-
ционных процессов, в том числе и сепсиса.
Определенную сложность представляет трактовка результатов
бактериологического исследования нестерильных сред, а именно до-
казательство этиологической роли условно-патогенных микроорга-
низмов. В этом случае учитывают в комплексе такие показатели, как
вид выделенных культур, количество микробных клеток данного ви-
да в материале, повторное их выделение в течение заболевания, при-
сутствие монокультуры или ассоциации микроорганизма.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Борисов, Л. Б. Медицинская микробиология, вирусология,
иммунология / Л. Б. Борисов. − 4-е изд. перераб. и доп. − М. : Меди-
цинское информагенство, 2005. − 735 с.
2. Васильев, Д. А. Методы общей бактериологии : учеб.-метод.
пособие / Д. А. Васильев, С. Н. Золотухин, Н. М. Никишина. – Улья-
новск, 1998.
3. Воробьев, А. А. Медицинская и санитарная микробиология :
учеб. пособие для студентов мед. вузов / А. А. Воробьев, Ю. С. Кри-
вошеин, В. П. Широбоков. − М. : Academia, 2005. − 462 с.
4. Зверев, В. В. Микробиология, Вирусология, иммунология :
учеб. / В. В. Зверев. − М. : Медицина, 2007. – 814 с.
5. Лабинская, А. С. Микробиология с техникой микробиологи-
ческих исследований : руководство / А. С. Лабинская. − М. : Меди-
цина, 2005. – 157 с.
6. Нетрусов, А. И. Микробиология : учеб. / А. И. Нетрусов,
И. Б. Котова. − 3-е изд., испр. − М., 2009. − 352 с.
7. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии : учеб.
пособие / под ред. А. А. Воробьева, Ю. С. Кривошеина. − М. : Высш.
шк., 2001. − 224 с.
8. Поздеев, О. К. Медицинская микробиология : учеб. /
О. К. Поздеев. М., 2004. – 779 с.
9. Ткач И. С. Бактериологическое исследование кала. Анализ
кала на дисбактериоз, анализ кала на кишечную инфекцию /
И. С. Ткач // Клиническая микробиология и антимикробная химиоте-
рапия. – 2014. № 10(3). – С. 135−144.
10. Шаршкова, М. А. Результаты бактериологического иссле-
дования у пациентов с кератитом / М. А. Шаршкова, Л. А. Деев //
Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. − 2012. −
№ 14(3). – С. 260−264.
11. Хаитов, Р. М. Иммунология : учеб. / Р. М. Хаитов. − М. :
Дата: 2019-03-05, просмотров: 396.
