Ген – неделимая единица функции, мутации и рекомбинации. Для определения аллельности двух независимо возникших мутаций, т.е. установления затрагивают они один и тот же или разные гены, Т. Морган разработал критерии аллелизма: рекомбинационный – если мутации не рекомбинируют, то они аллельны; функциональный – если при скрещивании двух мутантов появляется гибрид дикого типа, то мутации затрагивают разные функции, если образуется мутант, то мутации затрагивают одну и ту же функцию.

Цис-транс-тест – сравнение фенотипов гетерозигот с цис- и транс- положениями аллелей. Цис- (аллели локализованы на одной из гомологичных хромосом) как по аллельным, так и неаллельным мутациям имеют нормальный фенотип. Транс- (аллели расположены в разных гомологах) по алелельным мутациям фенотип мутантный, по неаллельным – мутантный.

Если 2 мутации объединяются путем скрещивания в F1 и не поврежденные мутациями участки генетического материала взаимодействуют комплементарно, т.е. образуется гибрид дикого типа, то мутации относят к разным генам. (образуется дигетерозигота.). Пример: пурпурные глаза мух при генотипе rus и pn. Оба гена в Х. Если при объединении в F1 двух мутаций возникает гибрид мутантного фенотипа, след. обе мутации повреждают один и тот же ген (образуется аллельная комбинация). Пример: W^a – абрикосовые глаза, W^cf – кофейные. Оба гена в X. Скрещиваем абрикосовую самку и кофейного самца. Получаем кофейную самку.

Ген не явл единицей мутации (неск мутаций по 1 гену) и ед рекомбинации. Аллели, несущие разные разные мут способны рекомбинировать между собой. Скрещиваем самку (абр/коф) и самца (абр). 1-2 самки будут дикие, тк у самки произошёл кроссинговер внутри гена.

Исследование локуса rII бактериофага Т4 Е. coli. Мутанты бактериофага Т4 по локусу rII образуют на газоне Е. coli В более крупные «фаговые бляшки», по сравнению с фагом дикого типа. Отличительной особенностью этих мутантов, по сравнению с фагом дикого типа является неспособность к размножению в клетках штамма Е. coli К-12, лизогенного по фагу λ. Сначала тест на комплементарность. При инфицировании клеток Е. coli К-12 фаголизатом, полученным при заражении клеток Е. coli В двумя разными мутантами бактериофага Т4 по локусу rII, на газоне возможно формирование бляшек фага дикого типа. На основе функционального теста на аллелизм выяснилось, что локус rII включает два гена: А и В. В пределах этих генов было картировано более 2000 мутантов. Потом рекомбинантнй тест. Берём два фага, нсущих разные мутации одного гена (например, rIIA). Заражаем E. Coli B. Оба жизнеспособны, размножаются, возможно, рекомбинируют. Собираем фагов, заражаем К12. Появляются бляшки. Т.е., после инфекции бактериального штамма двумя мутантами rIIА в ходе репликации фаговых геномов могут образовываться рекомбинанты дикого типа. Частота появления этих рекомбинантов пропорциональна расстоянию между мутантными точками в геноме бактериофага. %кр = (К12)х2/всеВ

RII – 2700пн. Т4 – 180 тпн, 1500% На 1 нкт – 0.01%. В опытах Б min частота рекомбиназии – 0.02. Частота спонтанной мутации – 10^-6. Бензер улавливал частоту спонт мутации 0,0001%. Разр спообность метода выше на 2 порядка. 0.02 – 2 соседних нкт – единица рек., min размер п-ти в кот. Бензер улавливал рекомбинацию.  

Рекомбинация происходила на расстоянии около двух нуклеотидных пар и, очевидно, что рекомбинация может разделять соседние пары нуклеотидов, что наименьший участок ДНК, который изменяется мутации – нуклеотид, при рекомбинации – это пара нуклеотидов.

Для точной локализации мутации метод перекрывающихся делеций. Сначала определил, в каком гене делеция путём скрещивания. Потом провёл тест на рекомбинацию. При скрещивании точкового и делеционного мутантов рекомбинанты появляются только тогда, когда делеция не затрагивает участок, в котором локализована точковая мутация. Конец делеции справа от посл точечной мутации, с кот происходит рекомбинация. Потом скрещивал только мутации внутри делеции, чтобы определить расстояние м/у ними.

И ТУТ НАЧИНАЕТСЯ РИЗНИЧЕНКО

Вопрос №33.