Трансформация - Процесс переноса ген инфы, в рез кот экзогенная ДНК проникает в клетку-реципиент и выз её наследственные изм. Бактерии с природной комп: лишь в опред фазы роста (стрептококки, бациллы), всегда (гонококки, менингококки). С отсут ест компетентности: киш пал. Стадии: развитие компетентности, связывание ДНК с клет пов-ю, процессинг ДНК и поглощение, интеграция в хр-му с пом recA-зависимой гомологичной рекомбинации. Двунит ДНК адсорб на мембр с пом ДНК-связ белка. При уч эндонуклеазы и SSB 1 нить переносится через мембрану с пом транслокационного аппарата, другая деградирует. Однонит ДНК спаривается с гом ДНК реципиента. Рекомбинация путём замещения 1 из 2 цепей на гом фрагмент донора. Временный гетеродуплекс корректируется, удаляются некомпл основания. Можно жрать ДНК, чинить себя, рекомб разнообразие.

Обр клетку CaCl2 на холоду (4С). Мембрана не такая текучая, клетка в ионной шубе. Р-р молекул ДНК, абсорб клеткой. В 42С, потом тепл шок на 60-90С. Клетка резко расширяется, ДНК проваливается. Потом в лёд – сжатие. Потом в 37С.

Вопрос №71

Уровни регуляции экспрессии генов: особенности у про- и эукариотических организмов. Многообразие механизмов посттрансляционной регуляции генного действия: роль пептидаз, шаперонов и ковалентной модификации белков у про- и эукариотических организмов.

Уровни: изм стр хроматина, транскрипционный, постранскрипц.: процессинг, стабильность РНК и трансляционный, пострансляционный процессинг и модиф белков.

Базовое сост про гена – включён, у эу – выключен. У про РНК-поли связ с промотором, если нет репрессора, активаторы увел связывание. У эу надо менять стр хроматина. Изм зависят от модиф гист белков, от связ со спец последовательностями ДНК-связ рег белков.

Если будет мутация в генах, код пептидазы, шапероны, ферменты, отв за модификацию, то даже при отсутствии мутаций в генах белка, он не будет работать. Стабильность полипептидов в клетках зависит от протеаз, играющих важную регуляторную роль. Они осуществляют процессинг при их секреции и транспорте через мембраны, превращают пре-белки в белки, отщепляют N-концевой формилметионин и т.д.

Они гидролизуют нефункциональные, денатурированные, испорченные в процессе работы белки и мультиферментные комплексы. Специальные белки-шапероны обеспечивают правильную третичную

структуру белков. Специальные ферментные системы осуществляют ковалентную модификацию белков, добавляя или удаляя химические группы. Эти изменения в структуре и функции белков являются чувствительным методом клеточной регуляции. Реакции ковалентной модификации включают фосфорилирование, ацетилирование, метилирование, аденилирование, рибозилирование и т.д. В большинстве случаев ковалентная модификация является обратимой.

 Инициация транскрипции у эукариот нуждается в ремоделировании хроматина. Перед транскрипцией структура хроматина должна быть изменена в более открытую конформацию, чтобы ДНК стала более доступной для транскрипционного аппарата.

Транскрипция у эукариот осуществляется в ядре при участии трех различных форм РНК-полимеразы. Транскрипция и трансляция у эукариот не сопряжены как у прокариот, а разделены в пространстве и времени. Для трансляции мРНК должна экспортироваться в цитоплазму. укариотическая РНК-полимераза не может самостоятельно инициировать транскрипцию. Для ее активации необходимо большое количество белков (факторов транскрипции), которые объединяются в комплекс. В инициации и регуляции транскрипции у эукариот участвует гораздо больше типов регуляторных белков (транс-действующих факторов) и типов взаимодействия с регуляторными (цис-действующими) последовательностями ДНК

(активаторные последовательности, энхансеры, глушители). Оперонная организация генов и, следовательно, полигенная РНК у эукариот – редкое явление. Пре-мРНК у эукариот подвергается существенной модификации (процессингу) в ядре перед трансляцией. Многие гены эукариот имеют прерывистую структуру и содержат участки некодирующей ДНК (интроны), которые транскрибируются и затем удаляются с помощью сплайсинга. Эукариоты являются многоклеточными, и экспрессия генов может зависеть от стадии развития организма и быть тканеспецифической

Вопрос №72.