Полиомиелитная пероральная живая вакцина Сэбина (ЖВС)

Представляет собой содержащую вирус жидкость, полученную из первичных культур почечных клеток африканских зеленых мартышек. Действующим началом являются аттенуированные штаммы вируса полиомиелита трех иммунологических типов – 1, 2 и 3.

Перед началом производственного процесса проводится тщательный контроль вакцинных штаммов. Для идентификации их используются типоспецифические сыворотки, вызывающие нейтрализацию цитопатогенного действия вируса при росте его на культурах почечных клеток обезьян. Инфекциозность штаммов проверяется путем заражения обезьян в головной и спинной мозг. Вакцинные штаммы должны быть бактериологически стерильными и апатогенными.

Средой для выращивания вакцинных штаммов служит однослойная культура почечных клеток обезьян. Почки получают от здоровых животных, обескровленных под наркозом. Из почек извлекается корковое вещество, быстро измельчается, отмывается от крови культуральной жидкостью, содержащей антибиотики, и обрабатывается трипсином для разделения клеток.

Клетки разводят питательной жидкостью, разливают в матрацы и выращивают при 36-37 °С до образования сплошного слоя эпителия. Затем культуральная жидкость отсасывается и заменяется свежей порцией. Одновременно с этим производится заражение культуры почечных клеток вакцинными штаммами вируса. Культивирование вируса производится при 36-37 °С до наступления полной дегенерации клеток, что обычно происходит через 2-3 дня после внесения вируса в культуру. Затем вся жидкость сливается в бутыли емкостью 1-5 л и сохраняется в холодильнике при -22 °С.

В процессе приготовления вакцины против полиомиелита производится тщательный контроль препарата на каждом этапе производства.

С целью повышения термоустойчивости к вакцине добавляют раствор химически чистого хлорида магния.

Вакцину выпускают в жидком виде и в форме конфет-драже (антиполиодраже). Она может быть изготовлена в виде моновакцины и тривакцины (смеси вирусов трех типов). Вакцину разливают во флаконы по 5 мл. В одном флаконе с моновакциной содержится 50 доз, а во флаконе с тривакциной – 25 прививочных доз. Антиполиодраже фасуют в картонные коробки, жестяные банки или в полиэтиленовые мешки по 100, 150 или 200 г (100-150-200 доз).

Полиомиелитная жидкая вакцина имеет красновато-оранжевый цвет. Драже выпускают разного цвета: розового (1 тип), сиреневого (2 тип), голубого (3 тип) и белого (смесь трех типов).

Вакцинацию проводят по схеме в соответствии с национальным календарем прививок детям с 3 месяцев. Разрешается проводить одновременно с вакцинацией против кори, паротита и краснухи.

Срок хранения жидкого препарата при температуре -20 ^oС – 2 года, при температуре 4-8 ^oС – 6 месяцев, антиполиодраже при температуре до 20 ^oС – до 90 дней.

Сухие поливалентные и типоспецифические диагностические полиомиелитные сыворотки для реакции нейтрализации

Сыворотки используются для идентификации и типирования кишечных вирусов человека на культуре ткани. Для их получения животных иммунизируют прототипными штаммами вируса полиомиелита, специфичность которых проверяется с помощью эталонных сывороток.

Поливалентные сыворотки содержат антитела к 1, 2 и 3 типам вируса полиомиелита, типоспецифические к одному из них.

Сыворотки должны быть стерильными, безвредными для культуры ткани, иметь титр не ниже 1:512 и обладать выраженной специфичностью: в рабочем разведении они не должны нейтрализовать гетерологичные вирусы.

Срок годности сывороток – 3 года.

Вирусы Коксаки А и В

Коксакивирусная инфекция представляет собой большую группу заболеваний, характеризующихся выраженным полиморфизмом. Манифестация Коксакивирусной инфекции может выражаться менингитом, параличами, острыми респираторными расстройствами, пневмонией, геморрагическим конъюнктивитом, миокардитом, гепатитом, диабетом и другими синдромами. Большая часть заражений заканчивается бессимптомной инфекцией.

Впервые вирусы Коксаки были выделены и идентифицировны Г. Даллдорфом и М. Сайклсом в США в 1948 г. Вирусы Коксаки А и В названы по населенному пункту в США, где они были впервые выделены. По патогенности для новорожденных мышей вирусы разделены на группы А и В.

Вирусы Коксаки распространены повсеместно на земном шаре. Для стран умеренного климата характерен максимум их циркуляции в летне-осенний сезон.

Структура вирусов Коксаки А и В. По структуре вирусы Коксаки – типичные представители рода Enterovirus.

Культивирование. Вирусы Коксаки А не размножаются в культуре клеток, у новорожденных мышей вызывают диффузный миозит, сопровождающийся развитием трофических параличей.

Вирусы Коксаки В хорошо размножаются в культурах клеток обезьяньего и человеческого происхождения (HeLa, почка обезьяны). У новорожденных мышей вызывают спастические параличи.

Антигенные свойства. Выделяют 24 серотипа вируса Коксаки А и 6 серотипов вируса Коксаки В.

Патогенез. Вирусы обладают высокой степенью инвазивности, что обусловливает их быстрое распространение в человеческой популяции. Наиболее восприимчивы дети.

Первичное размножение вируса Коксаки происходит в лимфоидной ткани носоглотки и кишечника. Здесь он может вызывать локальные поражения, выражающиеся симптоматикой ОРЗ, герпангины, фарингита и др. в глотке вирус определяется до 7-х суток, а с фекалиями он экскретируется 3-4 недели (при иммунодефицитах – несколько лет). Вслед за первичным размножением наступает стадия виремии, в результате которой возбудитель проникает в органы-мишени. Для вирусов Коксаки это могут быть головной и спинной мозг, мягкие мозговые оболочки, верхние дыхательные пути, легкие, сердце, печень, кожа и др.

Клиническая картина. Инкубационный период при Коксакивирусной инфекции колеблется от 2 до 10 суток, чаще 3-4 суток. Вирусы вызывают развитие следующих клинических синдромов: серозный менингит (Коксаки А2, А3, А4, А6, А7, А9, А10 Коксаки В1-В6); острое системное заболевание детей с миокардитом и менингоэнцефалитом (Коксаки В1-В5); параличи (Коксаки А1, А2, А5, А7, А8, А9, А21, Коксаки В2-В5); герпангина (Коксаки А2-А6, А8, А10)4 острый фарингит (Коксаки А10, А21); контагиозный насморк (Коксаки А21, А24); поражение верхних дыхательных путей и пневмония (Коксаки А9, А16, Коксаки В2-В5); перикардит, миокардит (В1-В5); гепатит (Коксаки А4, А9, А20, Коксаки В5); диарея новорожденных и детей младшего возраста (Коксаки А18, А20, А21, А24) и др.

Иммунитет. В результате инфекции на ранних этапах появляются вируснейтрализующие типоспецифичекие антитела, сохраняющиеся в течение всей жизни. Формируется типоспецифический иммунитет.

Диагностика. Используют вирусологический метод, выделяя вирус из фекалий, отделяемого носоглотки путем одновременного заражения культур клеток и мышей-сосунков. Вирусы идентифицируют в реакции торможения гемагглютинации (РТГА), реакции связывания комплемента (РСК), реакции нейтрализации (РН), иммуноферментным анализом (ИФА), учитывая также характер патологических изменений у зараженных мышей. Также определяют вирусную РНК в ПЦР.

Лечение. Специфические химиотерапевтические препараты отсутствуют. Осуществляется патогенетическая и симптоматическая терапия, зависящая от клинической формы болезни.

Профилактика. Специфические и неспецифические меры профилактики Коксакивирусной инфекции не разработаны. В очаге инфекции проводятся мероприятия, направленные на его локализацию, выявление источника инфекции, определение круга лиц, контактировавших с источником.

Вирусы группы ECHO

Вирусы группы ECHO – РНК-содержащие вирусы семейства Picornaviridae рода Enterovirus, насчитывают более 30 типов.

ECHO-вирусная инфекция характеризуется поражением многих органов человеческого организма и полиморфной клинической картиной. Большинство заражений вирусами ECHO заканчивается бессимптомным носительством.

Вирусы ЕСНО были впервые выделены из проб стула в начале 1950-х годов в США М.Рамосом-Альваресом и А.Сэбином в связи с развитием техники культур клеток. Выделенные агенты получили название кишечных цитопатогенных человеческих «сиротских» (enteric cytopathogenic human orphan) вирусов, т.к. были непатогенны для лабораторных животных и их роль в патологии человека была неизвестна.

Географическое распространение ECHO-вирусов глобальное. Сезонность в странах умеренного климата летне-осенняя. Механизм передачи фекально-оральный и воздушно-капельный. Источниками инфекции являются больные люди и носители вируса без клинической симптоматики. Диссеминация вируса осуществляется преимущественно контактно-бытовым путем, восприимчивость особенно высока у детей раннего возраста. Для ECHO-вирусов характерен эпидемический характер заболеваемости, выражающийся в некоторых случаях в регистрации сотен, тысяч и миллионов больных. Наиболее частыми являются вспышки серозного менингита, которые возникают в детских учреждениях, больницах. В эпидемиологическом плане вирусы ЕСНО опасны своей непредсказуемостью (обладают больим потенциалом шенетической изменчивости).

Структура ECHO-вирусов. По структуре ECHO-вирусы – типичные представители рода Enterovirus.

Культивирование. Вирусы ECHO непатогенны для всех видов лабораторных животных. Хорошо размножаются в культурах клеток обезьяньего и человеческого происхожения.

Антигенные свойства. Число серотипов в настоящее время составляет 28.

Патогенез. Входными воротами инфекции являются носоглотка и желудочно-кишечный тракт. Здесь же в лимфоидной ткани вирус размножается и накапливается, вызывая локальные патологические изменения в слизистых оболочках респираторного тракта, кишечника. Вирус выделяется из носоглотки в течение недели, а из кишечника – до месяца. В случае перехода в стадию виремии инфекция проникает в ЦНС, поражая вещество головного и спинного мозга, мягкие мозговые оболочки, а также миокард и перикард, поджелудочную железу, мышечную ткань, печень, ткани глаза, кожу.

Клиническая картина. Продолжительность инкубационного периода при ЕСНО-вирусной инфекции составляет 3-4 суток, в редких случаях – до 10 суток. ЕСНО-вирусы вызывают следующие клинические синдромы: серозный менингит (серотипы 1-5, 7, 9, 11, 13-21, 25, 27); паралич (серотипы 2, 4, 6, 9, 11, 30); энцефалит, атаксию, синдром Гийена-Барре (серотипы 2, 6, 9, 19); миокардит и перикардит (серотипы 1, 6, 9, 19); тяжелое системное заболевание новорожденных с некрозом печени (серотип 11); гепатит (серотипы 4, 9); диабет (серотип 9); респираторное заболевание (серотипы 4, 9, 11, 20, 25); экзантема (серотипы 2, 4, 6, 9, 11, 18); миалгии (серотипы 1, 6, 9) и диарея.

Иммунитет. Типоспецифические вируснейтрализующие антитела появляются в сыворотке крови вместе с первыми симптомами болезни. После перенесенного заболевания формируется стойкий типоспецифический иммунитет.

Диагностика проводится вирусологическим и серологическим методами. Вирус выделяют из цереброспинальной жидкости, фекалий, отделяемого носоглотки, заражая культуры клеток почек обезьян. Идентификацию вируса проводят в РТГА, РСК, РН, ИФА. Серологическую диагностику проводят, определяя в парных сыворотках крови нарастание титра антител, используя РТГА, РСК, РН, ИФА. В настоящее время широко применяются молекулярно-биологические методы: ПЦР, молекулярная гибридизация.

Лечение. Осуществляется патогенетическая и симптоматическая терапия, зависящая от клинической формы болезни.

Профилактика. Поскольку иммунитет при инфекциях ECHO является типоспецифическим, создание вакцин из многих типов вирусов является трудно осуществимой задачей. Поэтому основные меры профилактики связаны с мероприятиями санитарного характера.

2.2. РОД RHINOVIRUS

Риновирусы – РНК содержащие вирусы, наиболее частые возбудители острых инфекций верхних дыхательных путей (ОРВИ). Идентифицировано свыше 100 серотипов. Типовой вид – риновирус А человека (74 серотипа, причем серотип 1 делят на 2 антигенных подтипа). Вид риновирус В человека включает 25 серотипов.

Структура. Вирионы риновирусов не имеют наружной оболочки, а геном представлен одноцепочечной линейной нефрагментированной молекулой РНК связанная с белком VPg. Нуклеокапсид организован по типу кубической симметрии. После его удаления экстрагированная РНК сохраняет инфекционность. Существует много различных серологических типов риновирусов (это затрудняет борьбу со вспышками ОРВИ). Образование дочерних популяций риновирусов происходит в цитоплазме; высвобождение вирусов сопровождается лизисом клетки.

Культивирование. Риновирусы могут культивироаться в эмбриональных клеточных культурах или органных культурах трахеи эмбриона человека. Все риновирусы имеют общий рецептор. Рецептором риновирусов является межклеточная адгезивная молекула I (ICAM-I), которая экспрессируется на эпителиальных клетках, фибробластах и эндотелиальных клетках.

Антигенные свойства. По структуре единственного типоспецифического антигена выделяют 113 иммунологически разнородных групп; группоспецифический антиген отсутствует.

Резистентность. Вирусы этого рода чувствительны к кислым значениям рН, устойчивы к температуре 50 °С (отличие от энтеровирусов).

Этиология. Вирус впервые выделил Д. Тайрелл в 1960 г. из носовых смывов больных с острым насморком, инфекционная природа которого была доказана еще в начале 20 века.

Эпидемиология. Риновирусы распространены повсеместно, особенно в северных и средних широтах. Подъем заболеваемости отмечается дважды в год: ранней осенью и поздней весной. Источником инфекции является больной человек, основной путь передачи – воздушно-капельный, возможна и непрямая передача инфекции – через предметы обихода. Больной наиболее заразен в период максимального проявления катаральных симптомов, когда вирус передается наиболее интенсивно. Особенно быстро заболевание распространяется среди детей в организованных и закрытых коллективах.

Патогенез. Входными воротами инфекции является слизистая оболочка полости носа. Патологический процесс ограничивается верхними отделами дыхательных путей. В отличие от других ОРВИ, при риновирусной инфекции нет непосредственного повреждающего действия на цилиндрический мерцательный эпителий, в первую очередь страдает плоский эпителий, покрывающий носовые ходы.

К быстрореагирующим на внедрение инфекции механизмам неспецифического иммунитета относят мукоцилиарный клиренс, нейтрофилы и макрофаги, мигрирующие из кровяного русла.

Секреторные клетки эпителия продуцируют слизь, им же принадлежит адсорбционная функция. В состав слизи входят факторы неспецифической защиты: муцин, лизоцим, оказывающие бактерицидное действие, лактоферрин, обладающий бактериостатическим действием, и опсонины, обеспечивающие усиление фагоцитоза.

Макрофаги, содержащиеся в назальном секрете, выделяют противовоспалительные цитокины: ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8. Однако главная роль в развитии местного иммунитета принадлежит иммунным механизмам – Т- и В-клеткам. Т-клетки опосредуют цитотоксические и хелперные функции, а В-клетки продуцируют секреторные IgА, которые локализуются под эпителиальной мембраной и представляют первую линию защиты организма. IgА связываются с вирусными патогенами и блокируют возможность их адгезии к клеткам эпителия, предотвращая начало инфекционного процесса. Патогены, нейтрализованные IgА, легко удаляются за счет мукоцилиарного клиренса.

При развитии инфекционного процесса неспецифическая местная защита снижается: уменьшается мукоцилиарный транспорт, снижается продукция секреторного IgA, т.е. создаются условия, способствующие вирусу противостоять мукоцилиарному клиренсу и активироваться. Нарушается мукорегуляция и состав слизи, что приводит к застою, нарушению ее отделения и, как следствие, к скоплению в полостях околоносовых пазух и в среднем ухе. В этот период назальный секрет приобретает слизистый или слизисто-гнойный характер. К числу бактериальных патогенов, осложняющих риновирусную инфекцию, относятся Staphylococcus aureus, Haemophilus influenza, различные штаммы Streptococcus pneumonia, Klebsiella spp., Neisseria spp. Все это вности вклад в патогенез синуситов и отитов, ассоциированных с риновирусами.

Клиническая картина. Инкубационный период составляет от 1 до 3 суток, реже – до 6 суток. Заболевание начинается с недомогания и легкого познабливания. С первых часов болезни появляется заложенность носа, многократное чиханье и обильное серозное отделяемое, нарушается обоняние и вкус, снижается слух.

Особенностью клинического течения риновирусной инфекции является ринорея и преобладание месных симптомов над общеинфекционными. Общее состояние больного страдает мало. Температура тела, как правило, субфебрильная или остается нормальной. Через 2-3 суток ринит достигает максимальных проявлений. При осмотре в области крыльев и преддверия носа определяется мацерация кожи, гиперемия слизистой оболочки ротоглотки, преимущественно в области задней стенки носоглотки, инъекция сосудов склер и конъюнктив. Могут увеличиваться нижнечелюстныелимфатические узлы. Продолжительность заболевания не превышает 7 суток, у части больных клинические симптомы сохраняются до 14 дней. При затяжном рините (более 2 недель) в результате присоединения бактериальной флоры выделения из носа приобретают слизисто-гнойный характер, что может свидетельствовать о начинающемся остром синусите.  

Иммунитет. Риновирусная инфекция вызывает развитие невосприимчивости только против гомологичного штамма на период 1-2 года. Иммунитет определяется секреторными иммуноглобулинами типа IgА.

Диагностика. Используются вирусологические методы диагностики: выделение вирусов на культурах клеток, зараженных отделяемым носовых ходов и экспресс-диагностика – иммунофлюоресцентный метод, позволяющий обнаружить вирусный антиген в цитоплазме эпителиальных клеток слизистой оболочки.

Лечение. Средства специфической противовирусной терапии отсутствуют, лечение симптоматическое.

Профилактика. Иммунопрофилактику не проводят из-за большого числа серологических вариантов возбудителя.

2.3. РОД CARDIOVIRUS

Наиболее значимым в патологии человека представителем рода Cardiovirus является вирус группы энцефаломиокардита (EMCV), вызывающий лихорадку долины Сырдарьи. Вирус выделен в 1973 г С.К. Каримовым в Казахстане из крови лихорадящего больного. Вирус также выделен от клещей Hyalomma asiaticum asiaticum и Dermacentor daghestanicus, собранных в пойме реки Сырдарьи, где зараженность клещей достигала 0,5 %.

На эндемичной территории иммунная прослойка среди населения составляет 15 %. Все заболевшие в анамнезе указывают на присасывание клещей за 5-7 суток до начала болезни. Начало заболевания внезапное, с лихорадкой, обильной полиморфной розеолезно-петехиальной сыпью, преимущественно на конечностях, груди и животе, ознобом, слабостью, головной болью и благоприятным исходом.

Некоторые источники указывают на этиологическую значимость вирусов EMCV в развитии рассеянного склероза.

2.4. РОД APHTHOVIRUS

Род Aphthovirus включает вирусы ящура (7 серотипов) и вирус ринита лошадей (1 серотип). Впервые был выделе Леффлером и Рошем в 1898г. Клиническую картину заболевания у человека впервые описал норвежский врач Сагар. Ящур является зоонозом и чрезвычайно актуален в ветеринарном отношении. Ящур способен передаваться человеку, однако видовой барьер преодолевается с крайне низкой эффективностью и заболевания людей относительно редки.

Ящур – зоонозная инфекционная болезнь, характеризующаяся лихорадочным состоянием, язвенными (афтозными) поражениями слизистой оболочки рта, кожи кистей и стоп.

Вирус ящура сходен по структуре и химическому составу с другими пикорнавирусами. Обладает высокой вирулентностью среди животных и дерматотропностью.

Вирус ящура устойчив во внешней среде: на шерстном покрове животных вирус сохраняется до 50 дней, на одежде – до 100 дней, в кормах и почве – до 150 дней.

 Кипячение инактивирует вирус моментально, из дезинфицирующих средств лучшими являются 2-3 %-ный раствор гидроокиси натрия и 1 % -ный раствор формальдегида.

Естественным резервуаром вируса служат больные животные, особенно крупный рогатый скот. От больных животных вирус выделяется с молоком, слюной и мочой. Человек заражается при уходе за больными животными, а также при употреблении сырого молока и молочных продуктов. Восприимчивость человека к ящуру невысокая.

Диагностика. Вирус выявляют в содержимом афт, слюне и крови путем заражения морских свинок, мышей-сосунков или культур клеток. Для серологической диагностики исследуют парные сыворотки крови в РСК, РН, РПГА, ИФА.

Лечение преимущественно симптоматическое.

Профилактика ящура у человека неспецифическая.

2.5. РОД HEPATOVIRUS

Род Hepatovirus  - включает 1 серотип вирус гепатита А. Вирус гепатита А открыт в 1973 г. С. Фейнстоном. Вирус вызывает острую инфекционную болезнь, характеризующуюся лихорадкой, перимущественным поражением печени, интоксикацией, иногда желтухой и отличающуюся склонностью к эпидемическому распространению. Антропоноз.

Структура и антигенные свойства. Вирион имеет диаметр 27-28 нм. Геном представлен однонитевой РНК позитивной полярности. Имеет один вирусспецифический антиген.

Культивирование. Вирус гепатита А выращивают в культурах клеток. Цикл репродукции более длительный, чем у энтеровирусов, цитопатический эффект не выражен.

Этиология и эпидемиология. Вирус гепатита А относится к семейству Picornaviridae, роду Hepatovirus. Источником инфекции являются больные как с выраженными, так и с бессимптомными формами инфекции. Механизм заражения фекально-оральный. Вирусы выделяются с фекалиями, начиная со второй половины инкубационного периода и в начале клинических проявлений; в это время больные наиболее опасны для окружающих. С появлением желтухи интенсивность выделения вируса снижается. Вирусы гепатита А передаются через воду, пищевые продукты, предметы обихода, грязные руки, в детских коллективах – через игрушки, горшки. Вирусы способны вызывать водные и пищевые эпидемические вспышки.

Гепатит А распространен повсеместно, но особенно в местах с дефицитом воды, плохими системами канализации и водоснабжения и низким уровнем гигиены населения. Болеют преимущественно дети в возрасте от 4 до 15 лет. Подъем заболеваемости наблюдается в летние и осенние месяцы.

Патогенез. Вирус гепатита А обладает гепатотропизмом. После заражения репликация вирусов происходит в кишечнике, а оттуда через портальную вену они проникают в печень и репродуцируются в цитоплазме гепатоцитов.

Клиническая картина. Инкубационный период составляет от 15 до 50 дней, чаще около месяца. Начало острое с повышением температуры тела и явлениями со стороны желудочно-кишечного тракта (тошнота, рвота и др.). Возможно появление желтухи на 5-7-й день. Клиническое течение заболевания, как правило, легкое, без тяжелых осложнений; у детей до 5 лет обычно бессимптомное. Продолжительность заболевания – 2-3 недели. Хронические формы не развиваются.

Иммунитет. После инфекции формируется стойкий пожизненный иммунитет. У детей первого года жизни обнаруживаются антитела, полученные от матери через плаценту. Помимо гуморального, развивается и местный иммунитет в кишечнике.

Диагностика основана на выделении специфических антител (IgM) с помощью ИФА, РИА и иммунной электронной микроскопии. Вирусологическое исследование не проводится.

Лечение симптоматическое.

Профилактика. Неспецифическая профилактика направлена на повышение санитарной культуры населения, улучшение водоснабжения и условий приготовления пищи. Для специфической пассивной профилактики используют иммуноглобулин для лиц и контингентов, направляющихся в эндемичные районы на короткий срок. Иммунитет сохраняется около 3 месяцев. Для специфической активной профилактики разработаны инактивированная и рекомбинантная вакцины. Ведется работа по созданию живой вакцины из аттенуированных штаммов вируса.