Первый день исследования

Испражнения наносят на питательную среду и растирают стерильным шпателем на небольшой площадке среды в чашке Петри, затем шпатель отрывают от агара и не прижимая его, продолжают растирать по остальной поверхности среды. Этим достигается равномерный рост колоний по всей поверхности. Засеянные чашки Петри в перевернутом виде помещаются в термостат при 37 (на 18-24 часа). На дне каждой чашки проставляют номер анализа.

Второй день исследования

Чашки с посевом просматривают невооруженным глазом. Просмотр чашек и отбор подозрительных колоний является одним из ответственных этапов бактериологического исследования. На среде Плоскирева дизентерийные бактерии растут в виде мелких, нежных, прозрачных колоний. Подозрительные колонии с чашек пересевают на короткий пестрый ряд для определения основных свойств культур. Короткий пестрый ряд может состоять из сред Гисса с лактозой, глюкозой маннитом и сахарозой (полужидких или жидких сред). В зависимости от характера ферментации ингредиентов среды (лактоза, глюкоза, маннит и др.) различными представителями бактерий кишечной группы наблюдается различное окрашивание среды. При отсутствии на чашке подозрительных колоний дается отрицательный ответ.

Третий день исследования

Изучение выделенных культур начинают с учета их ферментативной активности. Если все культуры от данного обследуемого сбраживают лактозу и глюкозу с газообразованием то, дается отрицательный ответ. Неподвижные культуры, не разлагающие лактозу и мочевину, и разлагающие ферментирующую глюкозу до кислоты без газа являются подозрительными на дизентерийную группу и подвергаются дальнейшему изучению. Культуры неподвижных грамотрицательных бактерий, ферментирующих глюкозу без газообразования, испытывают в опыте агглютинации на стекле с набором дизентерийных адсорбированных сывороток. Материалом для агглютинации является рост культуры на среде с мочевиной или на скошенном агаре. Вести испытание культур в реакции агглютинации на стекле рекомендуется сначала со смесью сывороток преобладающих видов (Флекснера, Зонне), а при наличии агглютинации со смесью сывороток – испытывают культуру отдельно с каждой из сывороток, входящих в данную смесь. Положительная реакция на стекле с типоспецифическими сыворотками является только ориентировочной, в связи с чем необходимо поставить развернутую реакцию агглютинации в пробирках до титра сыворотки указанного на этикетке, начиная с разведения 1:100 и физиологическом растворе. Контролем служат две пробирки: одна содержит взвесь микробов в физиологическом растворе (без сыворотки), другая – сыворотку в наименьшем разведении (без микробных тел). Все пробирки помещают в термостат при 37 ^оС до следующего дня.

Четвертый день исследования

Отмечают изменения во всех углеводных средах, образование индола, сероводорода, учитывается подвижность, каталазная проба. В этот же день учитывают результаты пробирочной реакции агглютинации. Основание для выдачи положительного ответа является обнаружение неподвижной грамотрицательной палочки, не сбраживающей лактозу и не образующей сероводород, ферментирующей глюкозу до кислоты. При этом обязательно указывают вид и тип выделенного штамма.

Самостоятельная работа студентов

1. Микробиологический диагноз дизентерии.

А. Познакомиться с классификацией шигелл, а также со схемой исследования при дизентерии.

Б. Изучить характер роста шигелл на средах Левина, Плоскирева, Олькеницкого.

В. Знать ход исследования испражнений при диагностике дизентерии:

а) 1-й день – сделать посев на среды Левина и Плоскирева;

б) 2-й день – изучить посевы на чашках, отобрать изолированные колонии, посеять на среду Ресселя или Клиглера;

в) изучить биохимическую активность культуры на среде Ресселя;

 г) поставить ориентировочные реакции агглютинации со специфическими монорецепторными дизентерийными сыворотками;

 д) полученные данные занести в протокол.

2. Серологическая диагностика дизентерии:

а) изучить серологический метод исследования при дизентерии;

б) полученные данные занести в протокол.

Выполненную работу и полученные результаты оформить в виде протокола по схеме:

Заключение:

ХОЛЕРА

Холера – это острая антропонозная карантинная кишечная инфекция. Высокая заразительность приводит к развитию эпидемии и пандемии. Для их предотвращения проводят специальные санэпидемиологические мероприятия, устанавливают особый режим в очаге. Для холеры характерен тяжелый обезвоживающий понос с испражнениями в виде рисового отвара и нарушением водно-солевого обмена.

Цель занятия: выработать навыки лабораторного анализа холеры.

     Знать:

               - основных возбудителей холеры;

               - биологию возбудителей;

- эпидемиологию заболевания;

- лабораторную диагностику;

- профилактику и терапию заболевания.

Уметь:

- оценить полученные лабораторные данные.

Полная схема идентификации включает дополнительно тесты на определение биоваров: гемагглютинации, чувствительности к лимиксину, гемолиза по Грейгу, реакции Фогеса-Проскауэра. Для подтверждения принадлежности холерных вибрионов к серогруппе 0139 достаточно положительного результата в слайд-агглютинации.

Культуры, имеющие признаки вибрионов по морфологии, тесту на индофенолоксидазу и ферментативной активности на полиуглеводной среде, не агглютинирующиеся на стекле холерными сыворотками 01 и 0139 серогрупп, выделенные от больных острыми кишечными инфекциями, изучают по тестам, определяющим принадлежность к роду Vibrio и виду V. choleiae и в пробе с диагностическими фагами.

Через 36-48 ч от начала исследования учитывают результаты идентифи­кации и выдают окончательный ответ о выделении культуры холерного виб­риона соответствующей серогруппы.. На культуры, имеющие характерные для вибрионов морфологические  и культуральные признаки, относящиеся к первой группе по Хейбергу (манноз а +, сахароз а +, арабиноз а -), агглютинирующиеся сывороткой серогруппы 01 и вариантспецифическими сыворотками (Инаба, Огава) не менее чем до ½ титра, лизирующихся и нелизирующихся холерным и эльтор-фагами, а также на культуры, агглютинирующиеся сывороткой 0139, выдают окончательный ответ. Для холерных вибрионов 01 серогруппы указы вают биовар на основании чувствительности к одному из диагностических фагов(эльтор или холеры) и (или) по дополнительным признакам для фагорезистентных культур. Культуры  холерных вибрионов  01 и 0139 изуча­ют по гемолитической активности в пробе Грейга и чувствительности к антибиотикам, используемым в клинической практике для лечения холеры. Токсигенные штаммы холерных вибрионов 01 и 0139 серогрупп не лизируют эритроциты барана, в отличие от  гемолизпозитивных нетоксигенных штаммов.