Распределительная хроматография – основана на разделении веществ за счет различия в коэффициентах подвижности R_f, представляющих собой отношение концентрации вещества в неподвижной фазе (жидкости) к концентрации вещества в подвижной фазе (газе или жидкости):

Если неподвижная фаза – жидкость, то такая хроматография называется жидкостной, если подвижная фаза газ – то газожидкостной.

Анализируемую смесь вводят в колонку, она перемещается с помощью подвижной фазы. Разделение смеси происходит в соответствии с коэффициентом подвижности R_f между подвижной и неподвижной фазами.

Используется для определения аминокислотного состава белков, для разделения и количественного определения аминокислот, углеводов, липидов в биологических жидкостях и тканях.

Распределительный механизм реализуется в тонкослойной (ТСХ) и бумажной (БХ) хроматографии.

Хемосорбционная

Существует ряд вариантов хемосорбционной хроматографии. Разделение веществ определяется различием констант химических равновесий различных типов: констант растворимости(осадочная хроматография), констант нестойкости комплексных соединений.

Осадочная хроматография на бумаге. Рассмотрим сущность этого метода на примере анализа водного раствора, содержащего смесь катионов меди Cu²⁺, железа Fe³⁺ и алюминия Al³⁺.

В центр листа бумаги, пропитанной раствором осадителя – ферроцианида калия K₄[Fe²⁺(CN)₆], капилляром наносится анализируемый водный раствор. Ионы меди Cu²⁺ и железа Fe^³⁺ взаимодействуют с ферро-цианид-ионами с образованием малорастворимых осадков:

2Cu²⁺ + [Fe(CN)₆]^4- → Cu₂[Fe(CN)₆] (коричневый)

4Fe³⁺ + 3[Fe(CN)₆]^4- → Fe₄[Fe(CN)₆]₃ (синий)

поскольку ферроцианид меди(II) менее растворим, чем ферроцианид железа(III), то вначале выделяется осадок ферроцианида меди(II), образующий центральную коричневую зону (рис.). затем образуется синий осадок ферроцианида железа(III), дающий синюю зону. Ионы алюминия перемещаются на периферию, давая бесцветную зону, поскольку они не образуют окрашенного ферроцианида алюминия.

                       2

                       1       

3

Схема разделения Cu^2⁺ Fe³⁺ и Al³⁺ методом осадочной хроматографии.

1 – бесцветная зона Al³⁺;

2 – синяя зона Fe₄[Fe(CN)₆]₃;

3 – коричневая зона Cu₂[Fe(CN)₆].

Таким путем получают первичную хроматограмму, на которой зоны осадков частично перекрывается.

Затем получают вторичную хроматограмму. Для этого подходящий растворитель (в рассматриваемом случае – водный раствор аммиака), наносят капилляром в центр первичной хроматограммы. Растворитель самопроизвольно перемещается от центра бумаги к периферии, увлекая за собой и осадки, которые перемещаются с различной скоростью: зона более растворимого осадка ферроцианида железа перемещается быстрее зоны менее растворимого осадка ферроцианида меди. На этом этапе за счет различия в скоростях перемещения зон происходит их более четкое разделение.

Для открытия ионов алюминия, образующих бесцветную периферическую зону, вторичную хроматограмму проявляют – опрыскивают (из пульверизатора) раствором ализарина – органического реагента, образующего с ионами алюминия продукты реакции розового цвета. Получают внешнее розовое кольцо.

К хемосорбционной хроматографии относится афинная хроматография, основанная на высокой специфичности взаимодействия субстрата с ферментом. Стационарная фаза содержит либо фермент, либо субстрат. Из анализируемой смеси будет «вылавливаться» партнёр соответствующей фермент – субстратной реакции.