Haemophilus influenzae, способен вызывать гнойный менингит, острое воспаление верхних дыхательных путей, бронхит, пневмонию, эмпиему, конъюнктивит, отит и другие оппортунистические заболевания. Уровень носительства гемофильной палочки среди здоровых лиц высокий (до 90 %). Гемофильная инфекция у животных в возрасте до 3 лет

протекает исключительно тяжело, особенно в случае возникновения острого эпиглоттита (воспаления надгортанника).

Бактериоскопический метод может быть использован при исследовании спинномозговой жидкости при подозрении на гнойный менингит.

Бактериологический метод является основным в лабораторной диагностике гемофильной инфекции. Исследуемый материал (мокрота, кровь, спинномозговая жидкость, серозную жидкость) засевают на МПА с 6 - 10 % нативной крови или на «шоколадный» агар с прогретой или кипяченой кровью. Если возможности немедленно посеять материал на среды нет, используют транспортную полужидкую среду с активированным углем и ниацином.

Серозную и спинномозговую жидкости центрифугируют, осадок засевают бактериальной петлей на шоколадный агар (МПА с 5% дефибринированной крови человека, лоша­ди или кролика выдерживают 23 минуты при температуре 800ºС, повторно добавляют 5% крови и вновь выдерживают при той же температуре 2-3 минуты) или среду Филдса (МПА с добавлением пептического перевара крови лошади или барана). Параллельно делают посев на обычный МПА, на котором гемофильная палочка не растет.

Морфология. Колонии Haemophilus influenzae мелкие, прозрачные или полупрозрачные, вырастают через 18-24 часа; в мазках из этих колоний обнаруживаются мелкие капсулообразующие или капсулонеобразующие грамотрицательные палочки. Оставшуюся часть колонии пересевают на скошенный шоколадный МПА для выделения чистой культуры. Идентификацию гемофильных бактерий проводят на основании изучения биохимических (каталазная, оксидазная активность, ферментация углеводов, гемолитическая активность, питательные потребности) и антигенных (постановка РА на стекле с групповыми сыворотками а, b, с, d, e, f к капсульному антигену) свойств.

Культуральные свойства. Для идентификации Haemophilus influenzae применяют также тест сателлитных колоний, для чего на поверхность шоколадного МПА наносят исследуемую культуру и в некоторые участки среды - штамм Staphylococcus aureus. Гемофильная палочка вырастает в виде мелких сателлитных колоний, окружающих колонии S.aureus, так как стафилококк, гемолизируя кровь, высвобождает X и V факторы – стимуляторы роста Haemophilus influenzae.

Биохимические свойства. Каталазу гемофильной палочки определяют по пенообразованию в капле 10% перекиси водорода на предметном стекле при внесении в нее исследуемой культуры. Оксидазу выявляют путем нанесения на диск фильтровальной бумаги, диаметром 5-7 см , 2-3 капель 1% раствора тетраметилпарафенилендиамина и исследуемой культуры, в результате чего через10-15 сек. появляется фиолетовое окрашивание. Уреазу определяют общепринятым методом по разложению мочевины с образованием щелочных продуктов в присутствии индикатора фенолового красного; при наличии уреазы среда приобретает ярко-малиновый цвет. Порфириновый тест выявляет способность Н. influence к синтезу аминолевуленовой кислоты (АЛК) - потребности в факторе X. При внесении АЛК в среду только АЛК-независимые гемофильные бактерии синтезируют и секретируют порфобилиноген и порфирины

(промежуточные соединения биосинтеза гема), тогда как АЛК-зависимые гемофильные палочки, нуждающиеся в факторе X, не способны к образованию указанных продуктов. Исследуемые бактерии засевают на шоколадный МПА, наносят на поверхность среды диски, пропитанные АЛК, и после 24-часовой выращивания в термостате при 37°С облучают УФ-лучами. При наличии Х-независимых микроорганизмов наблюдают кирпично-красную флюоресценцию.

Для специфической профилактики гемофильной инфекции в России лицензирована полисахаридная вакцина, конъюгированная со столбнячным анатоксином (вакцина Act-HIB) фирмы Пастер Мерье Коннот, которая не содержит консервантов и антибиотиков.

Возбудитель гемофилезного полисерозита

Септическое заболевание поросят раннего послеотъемного периода. Характеризуется серозно-фиброзным воспалением плевры, перикарда, брюшины, суставов, иногда менингоэнцефалит.

Возбудитель – Haemophilus parasuis.

Морфология. Полиморфная Гр- палочка (м.б. в виде диплобактерий, коротких цепочек из палочек, в виде нитей), неподвижная, образует капсулу.

Культуральные свойства. Микроорганизмы нуждаются в факторах роста, содержащихся в крови и продуктах обмена некоторых бактерий. Используют КА, шоколадный агар (к МПА добавляют дефибринированную кровь).

Исследуемый материал засевают сплошным газоном на питательные среды. Затем по диаметру чашки в виде 2-х прямых линий (крестообразный посев) засевают негемолитический стафилококк или кишечную палочку (баккормилка). Гемофильные бактерии дают рост в зоне 1-2 см от штриха (линий). Кишечная палочка или стафилококк продуцируют в агар ростовые факторы, стимулирующие рост гемофилов. На КА вырастают мелкие, выпуклые, блестящие колонии, слизистой консистенции, без зоны гемолиза. В МПБ – равномерное помутнение.

Антигенная структура. Различают 4 серовара А, В, С, Д. Болезнь вызывают серовары А и Д.

Патогенез изучен недостаточно. Полагают, что возбудитель заносится кровью на серозные оболочки, где размножается, вызывая воспаление.

Лабораторная диагностика. Материал для исследования: стерильно отбирают серозно-фиброзный экссудат из перитонеальной, плевральной, перикардиальной полостей, пораженных суставов, а также пораженные серозные оболочки.

Микроскопия. Мазки окрашивают по Граму и на обнаружение капсулы.

Бактериологический метод. Выделение чистой культуры по схеме.

Биопроба. Применяют для определения вирулентности H.parasuis. Суточной агаровой культурой в дозе 2х109 (20 ед.мутности 1 мл.) микробных клеток заражают в/брюшинно морских свинок. Наблюдают 5 суток. Культуру считают вирулентной в случае гибели одной или более свинок.

Иммунитет изучен недостаточно. Для профилактики предложена инактивированная вакцина для супоросных свиноматок и молодняка. Для лечения используют антибиотики.

Возбудитель гемофилезной плевропневмонии

Гемофилезная плевропневмония - инфекционная, контагиозная болезнь свиней, преимущественно 2-3-х месячного возраста и откормочных животных. Характеризуется развитием фиброзно-геморрагической некротизирующей пневмонии и фиброзного плеврита.

Возбудитель – Haemophilus pleuropneumoniae. В практикуме по вет.микробиологии за 2001 г. - (Actinobacillus pleuropneumoniae) род Actinobacillus, семейство Pasteurellaceae. Название болезни – актинобациллезная (гемофилезная) плевропневмония. Возбудитель обладает тропизмом к легочной ткани.

Морфология. Мелкие коккобактерии, палочки с закругленными концами, располагются в виде парных коккобактерий, коротких палочек, коротких цепочек. Имеют капсулу, неподвижные Гр-.

Культуральные свойства. Растет на КА, шоколадном, сывороточном агаре с наличием баккормилок – бактерией кормилкой (кормушка). На КА образует мелкие, круглые, гладкие, выпуклые колонии с зоной гемолиза. На МПА с баккормилкой образует колонии только близи штриха питающей культуры.

Антигенная структура. Известно 12 сероваров, которые отличаются только по капсульному антигену.

Лабораторная диагностика. Материал для исследования: кусочки пораженных органов, средостенные и бронхиальные лимфатические узлы. Материал должен быть свежим и

доставлен в термосе со льдом. Диагностика основана на результатах бактериологического исследования с дифференциацией от Haemophilus parasuis. В отличии Haemophilus parasuis возбудитель плевропневмонии обладает гемолитической и уреазной активностью.

Биопроба определяют вирулентность выделенной культуры на белых мышах.

Иммунитет слабо изучен. Для специфической профилактики предложена ГОА-формолвакцина для супоросных маток для создания колострального иммунитета.