Диагностические методы исследования, основанные на спе­цифическом взаимодействии антигенов и антител, широко ис­пользуются для лабораторной диагностики инфекционных и па­разитарных болезней, определения групп крови, тканевых и опу­холевых антигенов, видовой принадлежности белка, распозна­вания аллергии и аутоиммунных болезней, беременности, гормональных нарушений, а также в научно-исследовательской работе.

Иммунологические методы широко применяют в лаборатор­ной диагностике инфекционных болезней. Этиологию заболе­вания устанавливают также на основании прироста антител к возбудителю в сыворотке крови реконвалесцента по сравнению с пробой, взятой в первые дни болезни. На их основе изучают иммунитет населения по отношению к массовым инфекциям, например к гриппу, а также оценивают эффективность профи­лактических прививок. Иммунологические исследования позво­ляют решить несколько задач: выявить наличие в сыворотке крови специфических антигенов или антител, имеющих значение для диагностики и дифференциальной диагностики заболеваний внутренних органов; определить иммунологические сдвиги, ха­рактерные для тех или иных аутоиммунных заболеваний, нару­шения в системе комплемента и расстройства клеточного имму­нитета; диагностировать первичные и вторичные иммунодефицитные состояния; выбрать адекватную иммуномодулирующую терапию.

Серологические исследования

Реакции иммунитета — это реакции между антигеном и анти­телом или между антигеном и сенсибилизированными лимфо­цитами (повышенная чувствительность), которые происходят в живом организме и могут быть воспроизведены в лаборатор­ных условиях. Реакции антигена с антителом называются серологическими, или гуморальными, потому что участвующие в них антитела (иммуноглобулины) всегда находятся в сыво­ротке крови.

Реакции антигена с сенсибилизированными лимфоцитами называются клеточными (серологические реакции).

Серологические реакции — реакции взаимодействия между ан­тигеном и антителом — протекают в две фазы:

1) я специфическая (образование комплекса антигена и соот­ветствующего ему антитела). Видимого изменения в этой фазе не происходит, но образовавшийся комплекс становится чувстви­тельным к неспецифическим факторам, находящимся в среде (электролиты, комплемент, фагоцит);

2) я неспецифическая. В этой фазе специфический комплекс антитело—антиген взаимодействуете неспецифическими фак­торами среды, в которых происходит реакция.

Их взаимодействие — склеивание, растворение. Характер ви­димой фазы серологических реакций зависит от состояния ан­тигена и условий среды, в которой происходит его взаимодей­ствие с антителом. Различают реакции агглютинации, преци­питации, иммунного лизиса, связывания комплемента.

Применение серологических реакций:

1) Серодиагностика — выявление антител в сыворотке боль­ного.

2) Идентификация — определение вида или типа антигена, выделенного от больного микроорганизма.

Серологические реакции применяют также для определения активности (титра) сывороток и в научных исследованиях.

РА-реакция агглютинации — это склеивание и выпадение в осадок микробов или других клеток под действием антител вприсутствии электролита (изотонического раствора натрия хло­рида). Образовавшийся осадок называют агглютинатом.

РГА - реакция гемагглютинации

1РГА - относится к серологическим. В этой реакции эритро­циты агглютинируются при взаимодействии с соответствующи­ми антителами (гемагглютининами). Реакцию широко исполь­зуют для определения группы крови.

2РГА — не является серологической. В ней склеивание эрит­роцитов вызывают не антитела, а особые вещества, образуемые вирусами. Например, вирус гриппа агглютинирует эритроциты кур и морских свинок, вирус полиомиелита — эритроциты бара­на. Эта реакция позволяет судить о наличии того или иного ви­руса в исследуемом материале.

Реакция торможения гемагглютинации. Это серологическая реакция, в которой специфические противовирусные антитела, взаимодействуя с вирусом (антигеном), нейтрализуют его и ли­шают способности агглютинировать эритроциты, т.е. тормозят реакцию гемагглютинации. Высокая специфичность реакции торможения гемагглютинации (РТГА) позволяет с ее помощью определить вид и даже тип вирусов, обнаруженных при поста­новке РГА.

Реакция непрямой гемагглютинации. Реакция непрямой (пас­сивной) гемагглютинации (РНГА) основана на том, что эритро­циты, если на их поверхности адсорбировать растворимый анти­ген, приобретают способность агглютинировать при взаимодей­ствии с антителами к адсорбированному антигену.

При помощи РНГА можно определять неизвестный антиген, если на эритроциты адсорбировать заведомо известные антите­ла. Реакцию гемагглютинации можно ставить в объеме 0,025 мл (микрометод), пользуясь микротитратором Такачи.

Реакция преципитации. В реакции преципитации происхо­дит выпадение в осадок специфического иммунного комплекса, состоящего из растворимого антигена (лизата, экстракта, гаптена) и специфического антитела в присутствии электролитов. Образующееся в результате этой реакции мутное кольцо или оса­док называют преципитатом. От реакции агглютинации эта ре­акция в основном отличается размером частиц антигена. Реак­цию преципитации обычно применяют для определения анти­гена при диагностике ряда инфекций (сибирская язва, менин­гит); в судебной медицине — для определения видовой принад­лежности крови, спермы; в санитарно-гигиенических исследо­ваниях — при установлении фальсификации продуктов; с ее по­мощью определяют филогенетическое родство животных и растений. Для реакции необходимы:

· антитела (преципитины) — иммунная сыворотка с высо­ким титром антител. Титр преципитирующей сыворотки устанавливают по наибольшему разведению антигена, с которым она дает реакцию. Сыворотку обычно применя­ют неразведенной или в разведении 1:5—1:10;

· антиген — растворимые вещества белковой или липоидно-полисахаридной природы (полные антигены и гап­тены);

· изотонический раствор. Основные методы проведения ре­акции преципитации: реакция кольцепреципитации и реакция преципитации в агаре (геле).

Реакция лизиса (иммунный цитолиз). Иммунный лизис — это растворение клеток под воздействием антител при обязатель­ном участии комплемента. Для реакции необходимы:

антиген — микробы, эритроциты или другие клетки;

антитело (лизин) — иммунная сыворотка, реже — сыворотка больного. Бактериолитическая сыворотка содержит антитела, участвующие в лизисе бактерий; гемолитическая — гемолизи­ны, способствующие лизису эритроцитов; для лизиса спирохет нужны спирохетолизины, клетки цитолизина.

Комплемент — больше всего комплемента в сыворотке морс­ких свинок. Эту сыворотку обычно используют в качестве комп­лемента. Свежий (нативный) комплемент нестоек и легко раз­рушается при нагревании, встряхивании, хранении, поэтому пользоваться им можно не дольше двух дней после получения. Для консервации комплемента к нему добавляют 2%-ную бор­ную кислоту и 3%-ный сульфат натрия. Такой комплемент мож­но сохранять при 4 °С до двух недель. Чаще применяют сухой комплемент. Перед употреблением его растворяют в изотони­ческом растворе до первоначального объема.

Реакция связывания комплемента РСК — основана на том, что специфический комплекс антиген—антитело всегда адсорбиру­ет на себе (связывает) комплемент. Эту реакцию широко приме­няют при идентификации антигенов и в серодиагностике ин­фекций, особенно заболеваний, вызванных спирохетами (реак­ция Вассермана), риккетсиями и вирусами. РСК— сложная се­рологическая реакция. В ней участвуют комплемент и две системы антиген—антитело.