Тема:.
3. Вопросы к итоговому контролю по теме «Морфология и физиология бактерий».
1. Строение бактериальной клетки.
2. Спора бактерий, строение, назначение, отличия от спор грибов.
3. Основные компоненты белоксинтезирующей системы бактерий.
4. Принцип фазовоконтрастной микроскопии.
5. Принцип темнопольной микроскопии.
6. Основные отличия между прокариотами и эукариотами.
7. Основные типы культур бактерий.
8. Признаки, применяемые для идентификации микроорганизмов.
9. Определения всех методов микробиологической диагностики.
10. Структура жгутика бактерий.
11. Классификация бактерий по количеству и взаиморасположению жгутиков.
12. Методы определения подвижности бактерий.
13. Структура пептидогликана.
14. Принцип окраски бактерий по Граму, отличия клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий.
15. В каких случаях употребляются термины «бактерии», «бациллы», «клостридии»?
16. Что такое L-формы бактерий, в каких случаях они возникают?
17. Методы выявления спор у бактерий.
18. Что такое нумерическая таксономия?
19. Что такое конститутивные, индуцибельные, репрессибельные ферменты?
20. Отличия между ядерным аппаратом прокариот и эукариот.
21. Структура и функции цитоплазматической мембраны.
22. Функции клеточной стенки бактерий.
23. Что такое мини-клетки, когда они образуются?
24. Типы дыхания бактерий, сущность и разница.
25. Строение и функции липополисахарида клеточной стенки.
26. Что такое «вид» микроорганизма?
27. Что такое архебактерии?
28. Классификация бактерий по морфологии и взаиморасположению.
29. Механизм деления бактерий. Время жизни клетки (формула).
30. Механизмы поступления питательных веществ в бактериальную клетку.
31. Активный транспорт веществ у бактерий.
32. Классификации питательных сред, требования к ним.
33. Что такое плазмиды?
34. Что такое микроаэрофилы?
35. Причины чувствительности анаэробов к молекулярному кислороду воздуха.
36. Состав среды Китта-Тароцци.
37. Состав и химизм работы среды Вильсон-Блера.
38. Что такое волютин, как его выявляют и у каких бактерий?
39. Этапы выделения чистой культуры возбудителя.
40. Как изучают протеолитические свойства бактерий?
41. Как изучают сахаролитические свойства бактерий?
42. Методы культивирования анаэробов.
43. Определение подвижности бактерий по Пешкову.
44. Как у бактерий определяют способность выделять индол?
45. Как у бактерий определяют способность выделять сероводород?
46. Состав среды Эндо, как на ней растут разные кишечные бактерии?
47. Как изучают развернутые биохимические свойства бактерий?
48. Какой состав имеют МПА и МПБ?
49. Как судят о чистоте выделенной культуры микроорганизма?
50. Актиномицеты, морфология, друза.
51. Плесневые (нитчатые) грибы, родовые морфологические отличия.
52. Микроскопическая дифференциальная диагностика малярии.
53. Назвать патогенных простейших из класса Flagellata.
54. Морфология трипаносом, какие заболевания они вызывают?
55. Морфологические отличия дрожжей и дрожжеподобных грибов Candida.
56. Морфология токсоплазмы, ее роль в патологии человека.
57. Диагностика амебиаза, морфология и жизненный цикл возбудителя.
58. Морфологические отличия возбудителя вивакс и тропической малярии.
59. Чем отличается лейшманиальная форма лейшмании от лептомонадной?
60. Патогенные спирохеты, морфология и классификация.
61. Что такое стерилизация и дезинфекция?
62. Методы стерилизации.
63. Методы контроля качества стерилизации.
З А Н Я Т И Е 7
Дата ______________
Тема: Инфекционный процесс. Изучение факторов патогенности бактерий. Биологический метод диагностики.
План занятия:
1. Факторы патогенности. Экзотоксины.
а) Определение экзотоксина реакцией преципитации в геле. Демонстрация.
б) Мембраноповреждающие токсины (разрушают эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, мастоциты, клетки культур тканей, протопласты и др.). Определение повреждающего действия на эритроциты (гемотоксина).
в) Определение некротоксического действия мембраноповреждающего токсина с помощью внутрикожной пробы на лабораторных животных - дермонекротическая проба. Демонстрация.
2. Факторы патогенности. Эндотоксин. Определение эндотоксина пробой на кролике. Демонстрация.
3. Факторы патогенности. Ферменты.
а) Гиалуронидаза. Определение гиалуронидазы - фактора проникновения в опыте на кролике. Демонстрация.
б) Фибринолизин. Определение фибринолизина на средах с плазмой крови. Разбор методики.
в) Плазмокоагулаза. Определение плазмокоагулазы, демонстрация опыта.
г) Лецитиназа. Определение лецитиназы на желточных средах. Демонстрация.
4. Методы заражения экспериментальных животных. Заражение белой мыши.
Методические указания
1. Факторы патогенности. Экзотоксины
а) Определение дифтерийного экзотоксина реакцией преципитации в агаре.
Полоска фильтровальной бумаги размером 1,5x8 см, простерилизованная в автоклаве, пропитывается антитоксической противодифтерийной сывороткой "Диаферм-3", разведенной физиологическим раствором до содержания 500 АЕ в I мл.
Смоченную сывороткой бумагу стерильным пинцетом переносят на поверхность питательной среды в чашке Петри. Чашку подсушивают в термостате 20 минут. Испытуемые культуры (колонии) засевают петлей бляшками диаметром в I см на расстоянии 0,5 см от бумаги. На одну чашку засевают несколько штаммов, в том числе один заведомо токсигенный. Рекомендуется каждую культуру засевать не менее чем четырьмя бляшками (по две с каждой стороны от бумаги). Посевы помещают в термостат. Учет производят через 24, 48, 72 часа. Определение токсигенности основано на следующем принципе: образующийся в процессе роста дифтерийных бактерий экзотоксин диффундирует в питательную среду. Одновременно в среду диффундирует специфическая антитоксическая противодифтерийная сыворотка. В тех местах среды, где токсин и антитоксин встречаются в оптимальных соотношениях, выпадает реакция преципитации в виде белой изогнутой линии. Исследуемые бактерии считаются токсигенными, если линии преципитата их сливаются с линиями преципитата контрольного штамма. Демонстрация опыта по определению токсина методом преципитации в агаре.
б) Для определения гемотоксина произвести посев золотистого, стафилококка на пластинки кровяного МПА. Для этого чашка с кровяным МПА делится на два сектора. На одном из них засевается культура золотистого стафилококка, а на другом - для контроля - культура нетоксигенного белого стафилококка.
в) Определение некротоксина производится путем внутрикожного введения лабораторному животному 0,2 мл бульонной культуры (или фильтрата бульонной культуры) испытуемого микроба.
Через сутки или двое суток на месте введения образуется очаг некроза. Демонстрация опыта. Зарисовать дермонекротическую пробу.
2. Факторы патогенности. Эндотоксин. Определение эндотоксина пробой на кролике. Демонстрация
Демонстрация опыта по выявлению брюшнотифозного эндотоксина внутрикожной пробы на кролике. 0,2 мл эндотоксина, полученного путем обработки культуры трихлоруксусной кислотой, вводят внутрикожно кролику. На месте введения эндотоксина через 24-48 часов отмечается воспалительная реакция. Зарисовать.
3. Факторы патогенности. Ферменты
а) Для выявления гиалуронидазы кролику в один участок депилированной кожи вводят внутрикожно 0,2 мл туши в физиологическом растворе, а в такой же соседний участок - 0,2 мл туши с прибавлением фильтрата бульонной культуры стафилококка.
Пятно на месте инъекции туши с фильтратом бульонной культуры стафилококка через 24-48 часов в несколько раз превосходит по размерам пятно на месте введения туши без фильтрата за счет повышения проницаемости ткани в присутствии гиалуронидазы. Демонстрация опыта.
б) Для выявления фибринолитического фермента в чашки Петри с агаровой средой, содержащей плазму, засевают испытуемую культуру. После инкубации в течение 24-48 часов при 37 °C образуется зона просветления вокруг колоний бактерий, продуцирующих фибринолизин. Демонстрация опыта.
в) Для выявления фермента плазмокоагулазы испытуемую культуру засевают в 0,2 мл цитратной кроличьей или человеческой плазмы. В случае выработки плазмокоагулазы через 2-4-6-18 часов инкубации при 37 °C происходит свертывание плазмы. В контроле плазма остается жидкой. Демонстрация опыта.
г) Для выявления лецитиназы изучаемую культуру засевают на желточный агар. При наличии лецитиназы вокруг колонии бактерий образуется зона помутнения и радужного венчика. Демонстрация опыта.
4. Методы заражения экспериментальных животных. Заражение белой мыши
Демонстрация различных методов заражения экспериментальных животных:
а) подкожный способ заражения кролика и белой мыши;
б) внутрикожный способ заражения кролика и морской свинки; в)накожный способ заражения морской свинки;
г) внутривенный способ заражения кролика и белой мыши;
д) внутрибрюшинный способ заражения морской свинки и белой мыши.
Промикроскопироватъ культуру палочки Фридлендера с косячка МПА, окрасить препарат по Граму (по Ионэ), проверить чистоту культуры. Если культура чистая, приготовить из нее взвесь. Для этого стерильной пипеткой добавить в пробирку с культурой 5 мл стерильного физиологического раствора и вращением пробирки между ладонями рук смыть культуру; 0,2 мл полученной взвеси ввести внутрибрюшинно белой мыши. Зараженное животное маркировать краской и поместить в специальную банку.
Окраска капсул по Ионэ. На приготовленный и зафиксированный в жидком фиксаторе мазок наливаю 2%-ный раствор генцианвиолета и окрашивают в течение 3-х минут при легком подогревании над пламенем горелки. Затем сливают краску и наносят на препарат I %-ный раствор уксусной кислоты на 10 секунд (стекло необходимо покачивать). Препарат промывают водой, сушат и микроскопируют под иммерсией. Тела бактериальных клеток и фон окрашивается в фиолетовый цвет, капсулы не окрашиваются. Препарат зарисовать.
|
|
| Рис.1. Определение экзотоксина реакцией преципитации в агаре | Рис.2. Палочка Фридлендера Klebsiella pneumoniae Окраска____________ |
Контрольные вопросы
1. Что такое экзотоксин?
2. Что такое эндотоксин?
3. Каковы основные свойства экзотоксинов?
4. Каковы основные свойства эндотоксинов?
5. Какова химическая природа экзо- и эндотоксинов?
6. Что произойдет с экзотоксином, если его обработать формалином? Какие методы используются для обнаружения экзотоксинов?
7. Как называются бактерии, способные образовывать экзотоксин? Каков механизм действия гемотоксина, как можно обнаружить его присутствие?
8. На чем основан метод определения токсина в геле (агаре)?
9. Какие методы используются для обнаружения эндотоксинов?
10. Как определяется сила действия экзотоксина? Что такое минимальная смертельная доза, DL50?
11. Какие факторы патогенности (кроме токсинов) вы знаете?
12. Что такое патогенность и вирулентность микробов? Какие ферменты могут играть роль факторов патогенности? Какой фермент содержится в факторе распространения? Его действие на соединительную ткань?
13. С какой целью производится заражение лабораторных животных? Какие способы заражения животных Вы знаете?
14. Как маркируются подопытные животные и как они содержатся?
15. Какие меры предосторожности следует соблюдать при заражении животных?
16. Как производится подготовка животных к опыту?
17. Как осуществляется наблюдение за подопытными животными?
ПРИЛОЖЕНИЕ К ЗАНЯТИЮ 7.
Дата: 2019-03-05, просмотров: 263.
