Кампилобактеры – микроаэрофилы. Для получения культуры возбудителя вибриоза используют полужидкие и плотные питательные среды (полужидкий 0,15–0,2%-ный мясо-печеночный пептонный агар (ПЖА), сафранино-железо-новобиоциновую среду (СЖН), 2–3%-ный мясо-печеночный пептонный агар (МППА), агар Мартена и другие). На неселективных плотных средах культивирование проводят на мембранных фильтрах с последующим их удалением. Посевы помещают в эксикатор или микроанаэростат и культивируют в условиях пониженного содержания кислорода воздуха путем замены 10–15% его объема углекислым газом, после чего выдерживают в термостате при 37°С в течение 6–10 дней с просмотром через каждые 3 дня с микроскопией посевов.

Для обогащения в питательные среды добавляют 5–10% дефибринированной крови крупного рогатого скота, овец, кроликов или сыворотку крови лошади, аминопептид-2 (5–10%), экстракт сухих дрожжей (5 г на 1 л среды), тиогликолят натрия (0,5 г на 1 л среды). К селективным средам можно отнести Кэрри-Блер, Campy-thio и др.

На ПЖА вибриозная культура растет под поверхностью среды в виде серовато-голубоватого диска толщиной от 1 до 4 мм. На плотной питательной среде вибрионы растут в виде нежного мелкоросинчатого налета или отдельных голубоватых колоний, заметных через лупу.

Рис. 11 Рост кампилобактерий на плотной среде

На СЖН при росте чистой культуры вибрионов цвет среды не изменяется (розовый), при развитии посторонней микрофлоры или смешанном росте (вибрионы и посторонняя микрофлора) среда становится ярко-желтой.

Получение чистых культур получают пересевом на среду Китта-Тароцци без масла, ПЖА, сывороточный агар.

Для очистки загрязненных посторонней микрофлорой культур применяют заражение беременных морских свинок путем введения им в брюшную полость или во влагалище 0,5 мл исследуемой полимикробной культуры с последующим высевом материала из абортированных плодов. Если в течение 10–12 дней аборта не происходит, свинок убивают и высевы делают из эмбрионов и полости матки.

Для обнаружения кампилобактерий в патологическом материале и смешанных культурах при хроническом течение болезни или носительстве, а также для определения принадлежности их к тому или иному типу применяют метод флуоресцентной микроскопии. При отрицательных бактериологических результатах проводят ПЦР, позволяющий идентифицировать возбудителя до вида.

Дифференциацию выделенных культур по видам и типам проводят по культуральным, биохимическим и серологическим свойствам возбудителя, пользуясь при этом таблицей. Для дифференциации пригодны только чистые культуры.

Табоица 1 – Дифференциация видов кампилобактеров по ростовым и биохимическим свойствам

H₂S – образование в трехсахарной среде

Серологическая диагностика

Проводят в благополучных по кампилобактериозу хозяйствах и в период профилактического карантинирования. Антитела определяют в РА с диагностическим титром 1:40 и выше, РСК – 1:20, РНГА – 1:4, в РИФ и ИФА. Результаты серологии имеют самостоятельное значение (т.е. на основании их можно поставить диагноз) в титрах в 3–5 раз превышающих диагностические.

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИЗЕНТЕРИИ СВИНЕЙ

Дизентерия свиней – острая инфекционная болезнь, характеризующаяся геморрагической диареей и некротическим поражение толстого отдела кишечника. Возбудитель из семейства Spirochaetaceae, роду Treponema, вид Brachyspira hyodysenteriae (или Treponema hyodysenteriae). Бактероиды, фузобактерии, вибрионы, клостридии и другие микроорганизмы кишечника свиней способствуют созданию благоприятных условий для проявления трепонемами патогенного действия.

Отбор и пересылка проб

Материалом для прижизненной диагностики служат фекалии, для посмертной – слизистая оболочка большой ободочной кишки павших или убитых с диагностической целью свиней. Фекалии от больных свиней берут ватным тампоном из прямой кишки. Для этого стерильный ватный тампон вводят в прямую кишку на глубину 7–8 см и делают вращательные движения, прижимая тампон к стенке кишки, затем его извлекают и помещают в пробирку с 8–10 мл физиологического раствора.

У животных, убитых с диагностической целью, вырезают участок большой ободочной кишки, освобождают ее от содержимого, промывают водопроводной водой, затем соскабливают скальпелем около 1 г слизистой оболочки, переносят в пробирку с 8–10 мл физиологического раствора и суспендируют. Допускается отбор материала и от трупов не позднее 2 ч после гибели.

Приготовленную суспензию исследуют непосредственно в хозяйстве или отправляют в ветеринарную лабораторию. При пересылке материала в лабораторию пробирки закрывают резиновыми пробками и помещают в термос со льдом. Материал должен быть исследован в течении 6–8 ч.

Рис. 12 Диарея

Рис. 13 Схема лабораторной диагностики дизентерии свиней

Микроскопия

Материал исследуют микроскопически, методом фазового контраста, путем просмотра в темном поле или в проходящем свете методом «раздавленная капля», подкрашенных и окрашенных препаратов – по Грамму (Гр-отрицательные), Романовскому-Гимзе или фуксином Пфейффера.

В нативных препаратах трепонемы имеют вид подвижных извитых нитей с острыми концами, перемещающихся поступательно, змеевидно. Различают 3 вида трепонем свиней: крупные – длиной до 20 мкм, шириной 0,2 мкм, с 8–12 завитками; средние – длиной 8–12 мкм, с 6–8 завитками и малые – длиной до 8 мкм, шириной 0,1 мкм, с 3–4 завитками. Завитки расположены

равномерно.

По размерам вибрионы в сравнении с трепонемами в 2-4 раза толще, с тупыми концами. Могут приобретать вид спирали с тремя и более изгибами, но меньшей амплитудой их расположения, чем у трепонем. Движение вибрионов – вращательное вокруг длинной оси.

Рис. 14 Возбудитель дизентерии свиней. МФА

Культивирование

Возбудитель дизентерии является анаэробом. Культивируется на специальных средах: трипсин-агар с 5% цитратной кровью, соевый агар с 5% крови крупного рогатого скота и др. среды инкубируют в анаэробных условиях в течение 4–8 сут. В чашке с трипсин-агаром вырастают мелкие прозрачные колонии или нежная пленка со следами эрозии, вокруг которых образуется зона гемолиза шириной 3–4 мм.

Рис. 15 Рост на трипсин-агаре. Зоны гемолиза

Биопроба

Возбудитель накапливается в организме кролика в тестикулах при внутрибрюшинном заражении. Через7–10 сут. Берут пунктат и микроскопируют. При обнаружении трепонем, кроликов убивают и выделяют культуру.