Полимера́зная цепна́я реа́кция (ПЦР) – молекулярно-биологическая реакция, позволяющая быстро получить большое количество копий конкретного фрагмента ДНК. Искомый фрагмент может быть частью очень сложной смеси нуклеиновых кислот. Исходным материалом для ПЦР может быть даже единственная молекула ДНК.

Преимущества:

o Высокая специфичность;

o Высокая чувствительность;

o Возможность диагностики скрытых инфекций;

o Прямое определение наличия возбудителя;

o Высокая скорость получения анализа (4-5 часов)

Основы ПЦР: Использование термостабильной полимеразы. Полимераза достраивает специфические затравки (праймеры). Процесс состоит из повторяющихся температурных циклов. ДНК-дактилоскопия или генетическая дактилоскопия представляет собой метод, используемый в судебно-медицинской экспертизе для идентификации лиц на основе уникальности последовательностей ДНК индивидуума. Метод был открыт в 1984 году британским генетиком Алеком Джеффризом. Последовательности ДНК конкретного человека составляют его ДНКпрофиль или генетический паспорт, который можно использовать для идентификации личности.

Секвенирование - это определение нуклеотидной последовательности избранного участка ДНК. В результате секвенирования получают формальное описание первичной структуры линейной макромолекулы в виде последовательности мономеров в текстовом виде. В результате секвенирования перекрывающихся участков ДНК, получают последовательности участков генов, целых генов, тотальной мРНК и даже полных геномов организмов Картирование - это создание схемы, описывающей порядок расположения генов на хромосоме. Генетические карты человека используются в медицине при диагностике ряда тяжелых наследственных заболеваний человека.

Генетические и цитологические карты хромосом человека. Использование ДНК-зондов для картирования хромосом. Секвенирование.

Цитологические карты – определение локализации какого-либо гена на хромосоме. В такой карте можно наблюдать истинное расположение генов. Метод создания цитологических карт заключается в следующем: с помощью мутагенов индуцируют различные хромосомные перестройки — делеции, транслокации или инверсии, которые приводят к изменению силы сцепления генов, что выявляется при генетическом анализе.

Генетические карты хромосом - карта генома, в которой полиморфные локусы располагаются относительно друг друга на основе частоты, с которой они рекомбинируют в мейозе. Единица расстояния - сантиморганида (сМ) , 1% вероятность рекомбинации. Представляют собой схемы относительного расположения сцепленных между собой наследственных факторов — генов и отображают реально существующий линейный порядок размещения генов в хромосомах.

ДНК-зонд — фрагмент ДНК, меченный тем или иным образом и использующийся для гибридизации со специфическим участком молекулы ДНК. Позволяет идентифицировать комплементарные ему нуклеотидные последовательности. ДНК-зонды могут быть использованы для гетерогенного детектирования целевых нуклеиновых кислот, введённая в ДНК-зонд метка позволяет определить области, в которых произошло связывание ДНК-зонда и мишени.

Секвенирование - это определение нуклеотидной последовательности избранного участка ДНК. В результате секвенирования получают формальное описание первичной структуры линейной макромолекулы в виде последовательности мономеров в текстовом виде. В результате секвенирования перекрывающихся участков ДНК, получают последовательности участков генов, целых генов, тотальной мРНК и даже полных геномов организмов