Стерилизация (обеспложивание) – это полное уничтожение микроорганизмов в объектах, подвергающихся обработке. Методы стерилизации подразделяются на физические и химические.

К физическим методам относятся:

-тепловая стерилизация,

-лучевая стерилизация,

-стерилизация ультразвуком,

-ультрафильтрация.

Тепловая стерилизация основана на использовании высоких температур: стерилизация в пламени (прожигание, фламбирование), сухожаровая стерилизация, стерилизация перегретым паром под давлением - автоклавирование.

Прожигание является простым и надежным методом, однако имеет ограниченное применение.

Стерилизацию сухим жаром осуществляют в воздушных стерилизаторах (прежнее название – “сухожаровые шкафы или печи Пастера”). Стерилизуют лабораторную посуду и другие изделия из стекла, металлические инструменты, то есть объекты, которые не теряют своих качеств при высокой температуре. Режимы стерилизации: 160°С в течение 120 минут, 180°С - 40 минут.

Стерилизация паром под давлением - наиболее универсальный метод стерилизации. Проводится в автоклаве, представляющем собой герметически закрывающуюся емкость, в которую поступает перегретый пар. Автоклав снабжен датчиками контроля температуры и давления. Температура кипения воды возрастает при увеличении давления в камере: при 0,5 избыточных атмосфер температура пара составляет 111°С; при 1 избыточной атмосфере – 121°С, при 2-х атмосферах – 132 °С.

Наиболее часто используемый режим стерилизации в автоклаве -121°С (1 атм.) 40 минут. В автоклаве стерилизуют перевязочный материал, белье, коррозионно-устойчивые металлические инструменты, питательные среды, растворы.

Одной из разновидностей тепловой стерилизации является дробная стерилизация при температурах от 56°С (тиндализация) до 100°С, применяемая для обработки материалов, не выдерживающих дальнейшее нагревание. В частности, данный метод может применяться для стерилизации питательных сред. Материал нагревают в течение 30-60 минут, а затем помещают на сутки в термостат при 37°С. Процедуру повторяют трижды. Нагревание стимулирует прорастание спор. Образовавшиеся вегетативные формы погибают при последующем повышении температуры

Лучевая стерилизация осуществляется в специальных установках с помощью гамма-излучения. Инактивация микроорганизмов под действием гамма-лучей происходит в результате повреждения нуклеиновых кислот. Лучевая стерилизация позволяет обрабатывать сразу большое количество предметов (одноразовых шприцев, систем для переливания крови и т.д.).

Ультрафильтрация является широко используемым методом стерилизации растворов лекарственных препаратов. Жидкости пропускаются через мембранные фильтры с диаметром пор, через которые не проходят бактерии и вирусы.

Химическая стерилизация проводится с использованием газов: оксида этилена, смеси ОБ (смеси оксида этилена и бромистого метила в весовом соотношении 1:2,5) и паров формальдегида. Эти вещества являются алкилирующими агентами, их способность в присутствии воды инактивировать активные группы ферментов, других белков, ДНК и РНК приводит к гибели микроорганизмов. Стерилизация газами осуществляется в присутствии пара при температуре от 18 до 80°С в специальных камерах.

Дезинфекция (обеззараживание) – это процедура, направленная на уничтожение патогенных микроорганизмов, предусматривающая обработку объектов внешней среды, помещений, одежды, белья, инструментария и др.

Различают три основных метода дезинфекции:

- тепловая дезинфекция;

- УФ-облучение;

- химическая дезинфекция.

Тепловая дезинфекция. Температура 100°С в течение 5 минут убивает все вегетативные формы бактерий и большинство вирусов. При добавлении в воду 2% натрия гидрокарбоната погибают и споры.

Разновидностью тепловой дезинфекции является пастеризация – прогревание при температуре ниже 100^ОС. При используемом обычно режиме (60-70°С в течение 20-30 минут) погибает большинство вегетативных форм бактерий, но сохраняются споры.

Ультрафиолетовое облучение (лучи с длиной волны 200-400 нм) производится с помощью специальных бактерицидных ламп (настенных, потолочных, передвижных и др.) для обеззараживания воздуха, и поверх­ностей в помещениях (операционных, перевязочных, микробиологических лабораториях), Действие ультрафиолетовых лучей приводит к разрушению ДНК микробов в результате образования тиминовых димеров.

Химическая дезинфекция проводится с помощью различных дезинфицирующих веществ.

Асептика и антисептика. Асептикой называется комплекс мероприятий, направленных на предотвращение попадания патогенных микроорганизмов в стерильную зону (операционная рана, питательная среда и т.д.).

Антисептикой называется комплекс мероприятий, направленных на снижение концентрации микроорганизмов на поверхности или в глубине тканей организма (кожные покровы, операционная рана).

33.Методы культивирования анаэробов.
Необходимым условием при культивировании анаэробов является защита их от токсического воздействия молекулярного кислорода. Это достигается при по­мощи физических, химических и биологических методов.

Физические методы:

1. Регенерация сред. Для удаления, растворенного в питательных средах кислорода производят их кипячение в течение 15-20 минут на водяной бане с последующим быстрым охлаждением до 45-50°С. После посева культуры для предот­вращения проникновения кислорода в жидкую питательную среду ее поверхность заливают стерильным вазелиновым маслом или парафином.

2. Посев в “высокий столбик агара”. Питательную среду разливают в пробирки по 10 мл и прогревают на кипящей водяной бане для удаления кислорода, после чего охлаждают до температуры 45°С и вносят исследуемый материал. Пробирки с посевами помещают в обычный термостат. В высоком столбике плотной или полужидкой питательной среды кислород воздуха диффундирует обычно на расстояние 1,5-2,0 см от поверхности, а в глубине остаются благоприятные условия для роста облигатных анаэробов.

3. Эвакуационно-заместительный метод заключается в механическом удалении воздуха из гер­метически закрытого сосуда, который называется анаэростат, при помощи ва­куумного насоса с последующей заменой его инертным газом или бескислородной газовой смесью.

Химические методы:

1. Применение щелочных растворов пирогаллола для поглощения кислорода в замкнутой воздушной среде

2. Применение гидросульфита натрия для поглощения кислорода из замкнутого пространства.

3. Использование редуцирующих веществ. Для связывания остатков кислорода в питательных средах используют вещества-редуценты, к которым относятся тиогликолевая кислота, аскорбиновая кислота, различные сахара, цистин и цистеин.

4. Применение газогенерирующих систем для создания анаэробных условий в замкнутой воздушной среде (микроанаэростатах, эксикаторах, прозрачных газонепроницаемых пластиковых пакетах). Для образования водорода и двуоки­си углерода используют специаль­ные таблетки, которые активируются добавлением воды. Водород генерируется таблетками боргидрида натрия. Углекислый газ вырабатывается при взаимодействии лимонной кислоты с бикарбонатом натрия.

Биологический метод
Совместное выращивание анаэробов и аэробов (метод Фортнера). На одну половину чашки Петри с плотной питательной средой засевают исследуемый материал, а на другую – лабораторную культуру известных аэробных бактерий. После посева чашку герметично закрывают крышкой. Вначале вырастают аэробы, поглощающие кислород, а затем – анаэробы.