1. Забор материала. Характер материала зависит от первичной или вторичной локализации микроба-возбудителя. Если материалом служат испражнения, что чаще всего бывает, то их берут до начала или после суточного перерыва в антибактериальной терапии. Материал лучше забирать ректальной трубкой, тампоном со стерильной пеленки или стерильной пергаментной бумаги, специальным устройством для забора фекалий (ни в коем случае не допуская его контакта с дезинфектанатами). Если материалом служит кровь, то забирают 10,0 мл крови из вены локтевого сгиба.

2. Транспортировка материала осуществляется в системе «стекло, металл» в течение не более трех часов после его забора или в консерванте с сопровождающими документами медицинским работником.

3. Питательные среды, используемые для бактериологического исследования можно подразделить на три группы: а) среды обогащения, создающие условия преимущественного размножения выделяемого возбудителя и основанные либо на принципе наличия в среде факторов активации роста данного микроба, либо на принципе подавления роста сопутствующих микробов-антагонистов. Первой группе соответствует среда Раппопорта, второй - селенитовая, магниевая, Мюллера, с пенициллином и т.д.; б) среды дифференциально-диагностические. Это плотные питательные среды, содержащие дифференцирующий углевод - лактозу и индикатор. Кишечные палочки, разлагающие лактозу (лактозоположитель-ные), растут в виде окрашенных колоний в зависимости от типа среды в красный и оранжевый (среда Эндо, Плоскирева) или фиолетовый (среда Левина) цвет. Клебсиеллы пневмонии разлагают лактозу в среде с индикатором бромтимоловым синим и образуют колонии желтого цвета, в то время как колонии лактозоотрицательных биоваров формируют колонии цвета среды. Сальмонеллы и шигеллы на средах Эндо, Левина, Плоскирева также не разлагают лактозу и дают бесцветные колонии; в) среды накопления чистой культуры. Чаще применяется среда Олькеницкого (скошенный агар): она состоит из столбика, скошенной части и включает лактозу, глюкозу и сахарозу, индикатор, реагенты для определения сероводорода и уреазы. Посев производят уколом в столбик и штрихом по поверхности скошенной части. При росте микробов глюкоза лучше разлагается в столбике, лактоза - на скосе, в результате чего дифференцированно меняется цвет среды, при образовании газа - формируются пузырьки и разрывы в среде, при продукции сероводорода - почернение по ходу укола, а - уреазы - изменение цвета среды на оранжевый.

4. Идентификация выделенных культур основана на определении:

* общего для семейства признака - морфологии бактерий (гр/-палочки), оксидазоотрицательные, наличия капсулы (у клебсиелл);

* цвета колоний на чашечных средах;

* подвижности (сальмонеллы и эшерихии подвижны, шигеллы и клебсиеллы неподвижны);

* биохимических свойств;

* антигенной структуры;

* чувствительности к антибактериальным препаратам;

* чувствительности к бактериофагам.

Определение антигенной структуры основано на предварительном установлении серогруппы, чаще с монорецепторными адсорбированными сыворотками, а затем серовара тоже с адсорбированными сыворотками.

Серологическая диагностика

Серологическая диагностика начинается с получения сывороток от больных. В них обнаруживаются антитела в реакции агглютинации, гемагглютинации или РСК. Диагноз основан на обнаружении антител в диагностическом титре или нарастании титра антител в динамике болезни.

Диагностика кишечных эшерихиозов (колиэнтеритов).

Цель: выделение чистой культуры эшерихий и отличие ее от условно-патогенных представителей нормальной микрофлоры кишечника.

Метод: бактериологический.

Материал для исследования: фекальные массы.

Схема: 1 - посев на среду Эндо (Левина)

2а - обнаружение окрашенных колоний, микроскопия их по Граму

2б - предварительная дифференциация патогенных эшерихий от условно-патогенных: постановка РА на стекле со смесью сывороток к патогенным серогруппам

2в - положительно реагирующая в реакции агглютинации колония отсевается на среду Олькеницкого

3а - учет изменения среды Олькеницкого: посинение и разрыв всей среды

3б - определение чистоты выделенной культуры

3в - определение серовара патогенной эшерихии (путем постановки р. агглютинации с отдельными ОК-сыворотками на стекле и в пробирках) с живой (определение К-антигена) и убитой кипячением (определение О-антигена) культурой

3г - проба на индол, подвижность и чувствительность к антибиотикам

Серологический метод - постановка реакции агглютинации с сывороткой больного (на 2-ой неделе заболевания).